Спосіб визначення ступеня ендотеліальної дисфункції

Спосіб визначення ступеня ендотеліальної дисфункції, що здійснюють шляхом підрахунку вільноциркулюючих клітин судинного ендотелію, який відрізняється тим, що по 1,0 мл плазми відібраної у хворого крові поміщують у дві пробірки, для осадження тромбоцитів додають розчин адреналіну 0,4 мл у концентрації 0,18 %, перемішують вміст пробірок упродовж 10-12 хвилин, центрифугують при 200g 15 хвилин, після чого відбирають по 1 мл безтромбоцитарної суміші з кожної пробірки і поміщують відібрану суміш у наступні дві пробірки, які центрифугують при 2000g упродовж 30 хвилин, далі надосадову суміш зливають, а у осад кожної пробірки додають по 0,2 мл 0,9 % розчину NaCl, ретельно перемішують, тричі заповнюють U 2 (19) 1 3 дження тромбоцитів додають розчин адреналіну 0,4мл у концентрації 0,18%, перемішують вміст пробірок упродовж 10-12 хвилин, центрифугують при 200g 15 хвилин, після чого відбирають по 1мл безтромбоцитарної суміші з кожної пробірки і поміщують відібрану суміш у наступні дві пробірки, які центрифугують при 2000g упродовж 30 хвилин, далі над осадову суміш зливають, а у осад кожної пробірки додають по 0,2мл 0,9% розчину NaCl, ретельно перемішують, тричі заповнюють вмістом кожної пробірки обидві сітки камери Горяєва, кожен раз підраховують кількість ендотеліальних клітин за допомогою фазово-контрастного мікроскопу, усереднюють усі отримані результати, за формулою К = 3,16 N 105клітин/л, де: К - концентрація ендотеліальних клітин у крові пацієнта; N - середнє арифметичне підрахунку ендотеліоцитів у 6 парах сіток камери Горяєва; 3,16 - постійний коефіцієнт, що враховує втрату клітин при розведенні крові хворого розчином цитрату Na та розчином адреналіну, концентрацію клітин при останньому центрифугуванні, співвідношення до об'єму камери Горяєва, обчислюють кількість клітин на 1л крові хворого, і при значенні концентрації К від 4,5 105клітин/л до 5 6,5 10 клітин/л визначають помірну дисфункцію ендотелію, а при значенні його вище 6,5 105клітин/л констатують ендотеліальну дисфункцію високого ступеня. Спосіб виконується наступним чином: З ліктьової вени досліджуваного відбирають 4,5мл крові, яку змішують з 0,5мл 3,8% розчину цитрату Na, який виступає в ролі стабілізатора. Далі цитратну кров центрифугують при 200g упродовж 15 хвилин для осадження еритроцитів. У дві пробірки відбирають по 1мл отриманої плазми крові, після чого до кожної додають по 0,4мл 0,18% розчину адреналіну тартрату для індукції агрегації тромбоцитів. Вміст пробірок механічно перемішують періодичним струшуванням упродовж 10-12 хвилин. Для осадження агрегатів тромбоцитів пробірки центрифугують при 200g упродовж 15 хвилин. Далі з кожної з пробірок відбирають по 1мл безтромбоцитарної плазми, поміщають у окремі пробірки та центрифугують при 2000g упродовж 30 хвилин. Після цього над 55532 4 осадову рідину зливають, а осад кожної з пробірок ресуспендують: додають 0,2мл 0,9% розчину NaCl та ретельно перемішують скляною паличкою упродовж однієї хвилини. Отриманою суспензією клітин тричі для кожної з пробірок заповнюють обидві сітки камери Горяєва, кожного разу підраховуючи кількість ендотеліальних клітин за допомогою фазово-контрастної мікроскопії. На фіг. показано мікроскопічну картину суспензії отриманого осаду у камері Горяєва. Далі знаходять середнє арифметичне з дванадцяти значень кількості ендотеліоцитів (по два на кожну камеру Горяєва, три заміри на пробірку, дві пробірки), та за допомогою формули K = 3,16 N 105клітин/л, де: К - концентрація ендотеліальних клітин у крові пацієнта; N - середнє арифметичне підрахунку ендотеліоцитів у 6 парах сіток камери Горяєва; 3,16 - постійний коефіцієнт, що враховує втрату клітин при розведенні крові хворого розчином цитрату Na та розчином адреналіну, концентрацію клітин при останньому центрифугуванні, співвідношення до об'єму камери Горяєва, обчислюють кількість ендотеліальних клітин на 1л крові хворого. При значенні концентрації К від 2,0 105клітин/л до 4,5 105клітин/л дисфункцію вважають відсутньою, при значенні концентрації К від 4,5 105клітин/л до 6,5 105клітин/л визначають помірну дисфункцію ендотелію, а при значенні його вище 6,5 105клітин/л констатують ендотеліальну дисфункцію високого ступеня. В порівнянні з прототипом, заявлене технічне рішення дозволяє значно підвищити точність способу визначення ступеня ендотеліальної дисфункції шляхом використання запропонованої формули обчислення концентрації клітин в крові, що зменшує похибку відтворюваності результатів до 1012%, тобто в 5-6 разів. Джерела інформації: 1. Пат. 25012 Україна, МПК (2006) G01N 33/55 ( 2007. 07 ) G01N. опубл. 25. 07. 2007. - Бюл. № 11. - 2 с / Сівак В. В., Тимофієва Н. В., Динник О. Б. [та ін.]. Спосіб визначення вільно циркулюючих ендотеліальних клітин в крові - № U200702080. заявл. 27. 02. 2007. 5 Комп’ютерна верстка М. Мацело 55532 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601