Спосіб діагностики змішаної мікоплазмо-герпесвірусної інфекції у хворих з патологією дихальних шляхів

Спосіб діагностики змішаної мікоплазмогерпесвірусної інфекції у хворих з патологією дихальних шляхів шляхом дослідження показників сироватки крові, який відрізняється тим, що використовують імуноферментний аналіз по визначенню в сироватці крові імуноглобулінів М до Mycoplasma pneumoniae (або Mycoplasma hominis) та імуноглобулінів М до ВПГ-1 і ВПГ-2, при цьому попередньо здійснюють їх концентрацію за допомогою гідрогелю метилкремнієвої кислоти. (19) (21) u201007474 (22) 15.06.2010 (24) 27.12.2010 (46) 27.12.2010, Бюл.№ 24, 2010 р. (72) ПАНЧЕНКО ЛЮДМИЛА ОЛЕКСАНДРІВНА, КИРИЧЕНКО ІГОР ІВАНОВИЧ, ПОПОВА НАТАЛІЯ ГЕННАДІЇВНА, ВАСІНА СВІТЛАНА ІВАНІВНА, КУЛІКОВА ОЛЕНА ОЛЕКСАНДРІВНА, ПОПОВА ЛЮДМИЛА ОЛЕКСІЇВНА, КОРОВАЄВА ІНГА ВАДИМІВНА, ЗУЕТИР САМИР (73) ПАНЧЕНКО ЛЮДМИЛА ОЛЕКСАНДРІВНА, КИРИЧЕНКО ІГОР ІВАНОВИЧ, ПОПОВА НАТАЛІЯ ГЕННАДІЇВНА, ВАСІНА СВІТЛАНА ІВАНІВНА, КУ 3 тичного лікування хворих та запобігання несприятливих наслідків мікст-інфікування [Панченко Л.О. Проблемні питання персистуючих змішаних мікоплазмо-герпесвірусних інфекцій у дітей/ Л.О. Панченко, І.І.Кириченко, С.І.Кандзюба// Інфекційні хвороби.-2008.-№ 4.- С.66-69]. Відомо, що мікоплазми і герпесвіруси належать до різних таксономічних груп і їх ізоляція і культивування здійснюється різними методами. Мікоплазми різних видів вирощують на складних і дороговартісних середовищах, а герпесвіруси потребують для ізоляції і культивування первинних або перещеплюваних клітинних культур. Незважаючи на високу специфічність культуральних методів, їх значення із-за низької результативності і трудоємкості процесів ізоляції має обмежене значення і може використовуватися лише у великих спеціалізованих лабораторіях та медичних центрах (патент RU № 2261903 С, патент UA № 18521 U). Найбільш близьким та обраним за прототип є використання полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) для виявлення Mycoplasma hominis, Cytomegalovirus, Herpes simplex virus 1/2. [Пат RU №2271003 G01N33/48]. Недоліками є дороговартість лабораторних аналізів, необхідність мати окрему спеціалізовану лабораторію з відповідним коштовним обладнанням, а також молекулярними маркерами - праймерами та високопрофесійним персоналом. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу діагностики змішаної мікоплазмо-герпесвірусної інфекції у хворих з патологією дихальних шляхів, в якому за рахунок додаткової концентрації в сироватці крові імуноглобулінів, досягається можливість підвищити вірогідність визначення мікст-інфікування і тактики подальшого ведення пацієнтів. Поставлена задача вирішується в способі діагностики змішаної мікоплазмо-герпесвірусної інфекції у хворих з патологією дихальних шляхів шляхом дослідження показників сироватки крові, згідно з корисною моделлю, використовують імуноферментний аналіз по визначенню в сироватці крові імуноглобулінів М до Mycoplasma pneumoniae (або Mycoplasma hominis) та імуноглобулінів М до ВПГ1 і ВПГ-2, при цьому попередньо здійснюють їх концентрацію за допомогою гідрогелю метилкремнієвої кислоти. Для концентрування Ig M в сироватці крові хворим з підозрою на змішане мікоплазмогерпесвірусне інфікування пропонується використовувати вітчизняний сертифікований з адсорбуючими якостями препарат - гідрогель метилкремнієвої кислоти. Виробником препарату є ЗAT «Екологоохоронна фірма «КРЕОМА-ФАРМ», який в медицині використовується як адсорбент (код АТС А01ВС10). Спосіб має таки перевааги: 1. Проводиться одночасно в одній пробі сироватки крові виявлення двох мікробів, після їх концентрування. 2. Процедура концентрування не складна, не потребує великих затрат, адсорбент доступний в аптечній мережі. 55822 4 3. Зростає інформативність аналізу. Запропонований спосіб діагностики здійснюють наступним чином. Визначення концентрації імуноглобулінів в сироватці крові до мікоплазмогерпесвірусного комплексу складається із наступних етапів: 1. Внесення до 0,2 мл сироватки крові хворого 0,4 мг гідрогелю метилкремнієвої кислоти . 2. Струшування впродовж 5 хвилин. 3. Центрифугування впродовж 10 хвилин при 2000 об/хв. 4. Надосад зливається. До осаду добавляється 0,05 М фосфатно-сольовий буфер, рН 8,0 в кількості 0,2 мл. 5. Повторне центрифугування впродовж 10 хв. при 1500-2000 об/хв.. 6. Надосад (елюат) використовується для постановки ІФА згідно інструкції до тест-систем - Ig M до Mycoplasma pneumoniae (або Mycoplasma hominis) та Ig М до ВПГ-1/2. Результат аналізу реєструється на спектрофотометрі в оптичних одиницях (опт.од.) при порівнянні з показником ОЩ критичної, яка розраховується за формулою (додається в інструкції). Результати лабораторного обстеження хворих з використанням запропонованого способу діагностики мікст-інфекції пояснимо на прикладах. Приклад 1. Хворий С, 1987 р. народження (історія хвороби № 8481 за 2009 р.) знаходився на стаціонарному лікуванні в пульмонологічному відділенні з 10.11.09 по 27.11.09 р. Діагноз: негоспітальна пневмонія нижньої долі лівої легені. Гостре респіраторне вірусне захворювання. Гострий ринофарингіт. Результати лабораторного обстеження хворого на знаходження Ig M до ВПГ-1/2 склали до концентрації - 0,340 опт.од., після концентрації - 0, 420 опт.од. (показник ОЩ критичної - 0,400 опт.од.). Ig M до Mycoplasma pneumoniae були знайдені одночасно з ВПГ до концентрації - 0,440 опт.од, після проведення попередньої концентрації - 0,510 опт.од. (показник ОЩ критичної був 0, 425 опт.од). Діагноз: негоспітальна пневмонія нижньої долі лівої легені, гостре респіраторне захворювання змішаної мікоплазмо-герпесвірусної природи, яке підтверджене лабораторними даними. Приклад 2. Хворий Т., 1973 p. народження (історія хвороби № 8599 за 2009 р.) знаходився на стаціонарному лікуванні в пульмонологічному відділенні з 06.11.09 по 22.11.09 р. з діагнозом: негоспітальна лівобічна сегментарна (S5) пневмонія. Скарги при надходженні: кашель з періодичним відхаркуванням мокроти, головний біль, загальну слабкість, підвищення температури тіла, закладеність носу. Захворів після переохолодження. Захворювання починалось як гостра респіраторна інфекція. Результати лабораторного дослідження сироватки крові хворого на Ig М до ВПГ-1/2 склали до концентрації - 0,450 опт.од., після концентрації 0,495 опт.од. (показник ОЩ критичної - 0, 400 опт.од.). Одночасно були виявлені Ig M до Mycoplasma pneumoniae - 0,480 опт.од., після концентрації рівень Ig M склав - 0,512 опт.од. (показник ОЩ критичної був 0, 425 опт.од). Уточнений 5 55822 діагноз: негоспітальна лівобічна пневмонія, гостра респіраторно-вірусна інфекція змішаної мікоплазмо-герпесвірусної природи. Таким чином, в обох випадках кількісний рівень Ig M до збудників мікст-інфекції у досліджуваних хворих був вищим після проведення попередньої концентрації сироваток крові, ніж в сироватках крові без проведення процедури кон Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 6 центрації. Наведені результати лабораторних досліджень дають можливість підвищити вірогідність встановлення у хворих лабораторного діагнозу змішаної мікоплазмо-герпесвірусної інфекції за допомогою підвищення виявлення більш кількісних показників специфічної імунної відповіді до мікробних асоціантів. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601