Штам vibrio parahaemolyticus №38-д для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці патогенних вібріонів

Штам Vibrio parahaemolyticus, задепонований 27.11.2008 під номером № 38-Д в депозитарії музею патогенних для людини мікроорганізмів (МПМ) ДУ "Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського" АМН України, який знаходиться у колекції філії МПМ на базі Державного закладу "Українська протичумна станція" Міністерства охорони здоров'я України, для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці патогенних вібріонів. Корисна модель належить до біотехнології, медицини та ветеринарії, а саме, до бактеріології і може використовуватися в практичних та наукових лабораторіях при дослідженнях на галофільні вібріони. Відомий штам Vibrio parahaemolyticus (Bacteria ATCC® Number: 33844™) [2], що використовується для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці патогенних вібріонів. Цей штам виділений та зареєстрований за кордоном, його придбання має високу вартість та пов'язане зі складною процедурою придбання бактеріологічних препаратів. Крім того штам необхідно періодично поновлювати, що передбачає витрати коштів на процедуру придбання за кордоном бактерійних препаратів. В основу корисної моделі поставлене завдання знайти новий штам, котрий може бути використаний для контролю якості поживних середовищ для діагностики галофільних вібріонів. Причому штам має бути доступний на території України та відповідно мати нижчу вартість, ніж при придбанні у закордонних колекціях. Використання такого штаму, в зв'язку з відсутністю його в колекціях України передбачено лише у проекті «Методичні рекомендації з лабораторної діагностики, епідеміології, клініки, лікування та профілактики захворювань, які викликані пара гемолітичними та іншими умовно патогенними морськими вібріонами» [1,3,4]. Поставлене завдання вирішують за рахунок штаму Vibrio parahaemolyticus депонованого 27.11.2008 p. під номером № 38-Д у колекції депозитарію музею патогенних для людини мікроорганізмів (МПМ) Державної установи «Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського" Академії медичних наук України. Штам знаходиться у філії МПМ базі Державного закладу «Українська протичумна станція» Міністерства охорони здоров'я України. Штам має характерні властивості. Морфологічні ознаки. У мазках з добових агарових культур клітини цього штаму мають вигляд вигнутих грамнегатив (19) UA (11) 57564 (13) (21) u201007159 (22) 09.06.2010 (24) 10.03.2011 (46) 10.03.2011, Бюл.№ 5, 2011 р. (72) ХАЙТОВИЧ ОЛЕКСАНДР БОРИСОВИЧ, ІЛЬЇЧЬОВ ЮРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ПІДЧЕНКО НАДІЯ НИКИФОРІВНА, В'ЯЛИХ ЖАННА ЕДУАРДІВНА (73) ДЕРЖАВНИЙ ЗАКЛАД "УКРАЇНСЬКА ПРОТИЧУМНА СТАНЦІЯ" МОЗ УКРАЇНИ, ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ЕПІДЕМІОЛОГІЇ ТА ІНФЕ U 1 3 57564 них паличок, що рухаються, спор і капсул не утворюють, добре фарбуються всіма аніліновими барвниками. Поліморфізм помірно виражений. Культуральні властивості. На пластинах 1,5-2 % агару pH (7,6±0,2) через 12 годин вібріони штаму Vibrio parahaemolyticus № 2451 виростають у вигляді круглих матових, блакитних у проточному світлі колоній розміром 4 мм. У бульйоні і лептонній воді Vibrio parahaemolyticus № 2451 у процесі росту дають рівномірне помутніння й утворюють поверхневу плівку. Після 3-х днів зберігання посівів при кімнатній температурі морфологія колоній зберігається. Оптимальна температура росту (37± 1)°С, температурний інтервал росту 20-40 ° С, час росту 18- 20 годин. Біохімічні ознаки. Вібріони штаму Vibrio parahaemolyticus № 38-Д володіють оксидазною активністю. Ферментують глюкозу в середовищі Хью-Лейфсона в аеробних й анаеробних умовах, ферментують маніт, арабінозу, манозу (з 0,1 % пептону), але не розщеплюють лактозу, сахарозу, інозит, мають ферменти діастазу та триптофаназу (індол). Ферменти тіосульфатредуктаза (сірководень) та желатиназа - негативні. Ріст на 1 % лептонній воді з 0 % NaCl - відсутній, на 1 % лептонній воді з 7 % NaCl - присутній, на 1% пептонній воді з 10 % NaCl -відсутній. Містять декарбоксілазу лізину і орнітину, але не мають дигідролази аргініну. 4 На середовищі Wagatsuma (Вагатцума) Vibrio parahaemolyticus № 38-Д не дає гемолізу. Штам був досліджений за допомогою полімеразної ланцюгової реакції на наявність гену гемолізину, ген гемолізину негативний. Штам зберігається у ліофілізованому стані при температурі +4 - +6 °С, життєздатність їх зберігається не більше 5 років або в напіврідкому 0,4 % поживному агарі (pH 7,6-7,8) під шаром стерильної вазелінової олії при температурі +18 - +25 С, але не більше 1 року. Можливість одержання штаму підтверджується наступними відомостями про депонування штаму: Приклад 1. Здійснення корисної моделі. При висівах на середовища збагачення - 1 % пептонну воду та бульйон Хоттінгера культури з 3 % NaCl Vibrio parahaemolyticus № 38-Д через 6 годин росли у вигляді рівномірного помутніння з плівкою на поверхні. Була відсутня дисоціація колоній при зберіганні протягом 48-72 годин на лужному агарі при t 20 (± 2) °С. Морфологія мікробних клітин у всіх досліджуваних культур була типова Грам негативні вигнуті палички. За характером росту на лужному агарі - блакитні, круглі, напівпрозорі колонії з рівним краєм до 4 мм у діаметрі. На рідкому середовищі збагачення ріст у всіх культур спостерігався у вигляді рівномірного помутніння з утворенням плівки на поверхні. Біохімічні, серологічні властивості культур та результати досліджень з фагами після 5 пасажувань на лужному агарі наведені в табл. 1. Таблиця 1 Визначення ефективності корисної моделі 1 пасаж Vibrio parahaemolyticus № 38-Д 2 2 пасаж Vibrio parahaemolyticus № 38-Д 3 3 пасаж Vibrio parahaemolyticus № 38-Д 4 4 пасаж Vibrio parahaemolyticus № 38-Д 5 5 пасаж Vibrio parahaemolyticus № 38-Д 6 Лактози негативна негативна негативна негативна негативна Маніту кислота кислота кислота кислота кислота негативна негативна негативна негативна негативна Манози кислота кислота кислота кислота кислота Арабінози кислота кислота кислота кислота кислота негативна негативна негативна негативна негативна Середовище Кодама Середовище Хью-Лейфсона (окислення глюкози) Середовище Хью-Лейфсона (ферментація глюкози) Індолу УТВОРЕННЯ: H2S позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна негативна негативна негативна негативна негативна желатина негативна негативна негативна негативна негативна Реакція Фогес-Проскауера Ріст на 1% лептонній воді без NaCl Ріст на 1% лептонній воді з 7% NaCl Ріст на 1% лептонній воді з 10% NaCl Лізиндекарбоксілаза негативна негативна негативна негативна негативна немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту ріст ріст ріст ріст ріст ОЗНАКИ 1 ФЕРМЕНТАЦІЯ: Сахарози Інозиту Аргініндигідролаза ріст ріст ріст ріст ріст позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна негативна негативна негативна негативна негативна 5 57564 6 Продовження таблиці 1 1 Орнітиндекарбоксілаза Контроль амінокислот Гемоліз на середовищі Вагатцума Наявність гену гемолізину в полімеразній ланцюговій реакції 2 позитивна 3 позитивна 4 позитивна 5 позитивна 6 позитивна норма норма норма норма норма негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна Висновок: Штам Vibrio parahaemolyticus № 38-Д доступний в Україні. Стабільні морфологічні, культуральні, біохімічні, гемолітичні характеристики штаму Vibrio parahaemolyticus № 38-Д дозволяють використовувати його як контрольний штам для перевірки ростових властивостей поживних середовищ та вхідного контролю діагностичних препаратів при діагностиці патогенних вібріонів. Наявність штаму Vibrio parahaemolyticus № 38-Д у вітчизняній колекції дозволить уникнути витрат коштів на купівлю штамів у закордонних колекціях та на періодичне поновлення цих штамів. Джерела інформації: 1. „Інструкція з організації та проведення протихолерних заходів, клініки та лабораторної діагностики холери", затверджено наказом МОЗ України №167 від 30.05.1997р. Комп’ютерна верстка М. Мацело 2. «Методические рекомендации по лабораторной диагностике, клинике, лечению и профилактике заболеваний, вызываемых парагемолитическими и другими условно патогенными морскими вибрионами», утверждено МЗ СССР № 28 - 6/11 от 17.07.1985г. 3. «Инструкция по санитарно - микробиологическому контролю произвоздства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных», утверждено приказом МЗ СССР № 5319 - 91 от 22.02.1991г. 4. „Державні санітарні правила і норми для підприємств і суден, що виробляють продукцію з риби та інших водних живих ресурсів", затверджено наказом МОЗ України № 197 від 06.05.2003р. МР 9.3.1 - 106 - 2004р. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601