Штам vibrio parahaemolyticus №37-д для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці патогенних вібріонів

Штам Vibrio parahaemolyticus, задепонований 27.11.2008 p. під номером № 37-Д в депозитарії музею патогенних для людини мікроорганізмів (МПМ) ДУ "Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського" АМН України, який знаходиться у колекції філії МПМ на базі Державного закладу "Українська протичумна станція" Міністерства охорони здоров'я України, для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці холерних вібріонів. Корисна модель належить до біотехнології, медицини та ветеринарії, а саме, до бактеріології і може використовуватися в практичних та наукових лабораторіях при дослідженнях на галофільні вібріони. Відомий штам Vibrio parahaemolyticus (Bacteria ATCC® Number: АТСС® Number: 27519™) [1], що використовується за кордоном для діагностики галофільних вібріонів та контролю ростових властивостей поживних середовищ. Цей штам виділений та зареєстрований за кордоном, його придбання має високу вартість та пов'язане зі складною процедурою придбання бактеріологічних препаратів. Крім того штам необхідно періодично поновлювати, що передбачає витрати коштів на процедуру придбання за кордоном патогенних бактерій. В основу корисної моделі поставлене завдання знайти новий штам, котрий може бути використаний для контролю якості поживних середовищ при діагностиці галофільних вібріонів. Штам має бути доступний на території України та відповідно мати нижчу вартість, ніж придбаний у закордонних колекціях. Використання такого штаму, в зв'язку з відсутністю його в колекціях України, передбачено лише у проекті «Методичні рекомендації з лабораторної діагностики, епідеміології, клініки, лікування та профілактики захворювань, які викликані парагемолітичними та іншими умовно патогенними морськими вібріонами». Поставлене завдання вирішують за рахунок використання штаму Vibrio parahaemolyticus, депонованого 27.11.2008 p. під номером № 37-Д в депозитарії музею патогенних для людини мікроорганізмів (МПМ) ДУ «Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського" АМН України, та знаходиться у колекції філії МПМ на базі Державного закладу «Українська протичумна станція» Міністерства охорони здоров'я України. Штам Vibrio parahaemolyticus № 37-Д має характерні властивості, аналогічні до штаму Vibrio parahaemolyticus (Bacteria ATCC® Number: АТСС® Number: 27519™). Морфологічні ознаки. (19) UA (11) 57563 (13) (21) u201007157 (22) 09.06.2010 (24) 10.03.2011 (46) 10.03.2011, Бюл.№ 5, 2011 р. (72) ХАЙТОВИЧ ОЛЕКСАНДР БОРИСОВИЧ, ІЛЬЇЧЬОВ ЮРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ПІДЧЕНКО НАДІЯ НИКИФОРІВНА, В'ЯЛИХ ЖАННА ЕДУАРДІВНА (73) ДЕРЖАВНИЙ ЗАКЛАД "УКРАЇНСЬКА ПРОТИЧУМНА СТАНЦІЯ" МОЗ УКРАЇНИ, ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ЕПІДЕМІОЛОГІЇ ТА ІНФЕ U 1 3 57563 У мазках з добових агарових культур клітини цього штаму мають вигляд вигнутих Грамнегативних паличок, що рухаються. Спор і капсул не утворюють, добре фарбуються всіма аніліновими барвниками. Поліморфізм помірно виражений. Культуральні властивості. На пластинах 3 % лужного агару рН (7,6±0,2) через 12 годин вібріони штаму Vibrio parahaemolyticus № 37-Д виростають у вигляді круглих, матових, блакитних у проточному світлі колоній розміром 3-4 мм у діаметрі. Колонії на твердому елективному середовищі TSBS мають зелений колір середовища, 3-4 мм у діаметрі. Добре ростуть на елективному середовищі Vibrio агар у вигляді круглих колоній, мають рожевий колір середовища, розміром 3-4 мм у діаметрі. У бульйоні і лептонній воді вібріони у процесі росту дають рівномірне помутніння й утворюють поверхневу плівку. Оптимальна температура росту +(36±1) °С, температурний інтервал росту 20-40 °С, час росту на рідких поживних середовищах 3-6 годин, на щільних поживних середовищах - 18-20 годин. Біохімічні ознаки. Вібріони штаму Vibrio parahaemolyticus № 37-Д володіють оксидазною активністю. Ферментують глюкозу в середовищі Хью-Лейфсона в аеробних й анаеробних умовах, ферментують манніт, арабінозу, манозу (з 0,1 % пептону), але не розщеплюють лактозу, сахарозу, інозит, мають ферменти діастазу та триптофаназу (індол). Ферменти тіосульфатредуктази (сірководень) та желатиназа 4 негативниі. Ріст на 1 % пептонній воді з 0 % NaCl відсутній, на 1 % пептонній воді з 7 % NaCl - присутній, на 1 % пептонній воді з 10 % NaCl - відсутній. Містять декарбоксілазу лізину і орнітину, але не мають дигідролази аргініну. На середовищі Wagatsuma (Вагатцума) Vibrio parahaemolyticus № 2448 дає гемоліз. Штам був досліджений за допомогою полімеразної ланцюгової реакції на наявність гену гемолізину; ген гемолізину позитивний. Штам зберігається у ліофілізованому стані при температурі +(5±2) °С, життєздатність його зберігається не більше 5 років або в напіврідкому 0,4 % поживному агарі (рН 7,6-7,8) під шаром стерильної вазелінової олії при температурі +18 - +25 °С, але не більше 1 року. Приклад 1. Здійснення корисної моделі. При висівах на середовища збагачення - 1 % лептонну воду та бульйон Хоттінгера культури з 3 % NaCl Vibrio parahaemolyticus № 37-Д через 6 годин росли у вигляді рівномірного помутніння з плівкою на поверхні. Була відсутня дисоціація колоній при зберіганні протягом 48-72 годин на лужному агарі при температурі +(20±2) °С. Морфологія мікробних клітин у всіх досліджуваних культур була типова - Грам негативні вигнуті палички. За характером росту на лужному агарі - блакитні, круглі, напівпрозорі колонії з рівним краєм до 4 мм у діаметрі. На рідкому середовищі збагачення ріст у всіх культур спостерігався у вигляді рівномірного помутніння з утворенням плівки на поверхні. Біохімічні, серологічні властивості культур та результати досліджень з фагами після 5 пасажувань на лужному агарі наведені в табл. 1. Таблиця 1 Визначення ефективності корисної моделі ОЗНАКИ 1 Лактози Маніту Сахарози ФЕРМЕНТАЦІЯ: Манози Арабінози Інозиту Середовище Кодама Середовище Хью-Лейфсона (окислення глюкози) Середовище Хью-Лейфсона (ферментація глюкози) Індолу УТВОРЕННЯ: H2S желатина Реакція Фогес-Проскауера Ріст на 1 % лептонній воді без NaCl 1 пасаж 2 пасаж 3 пасаж 4 пасаж 5 пасаж Vibrio Vibrio Vibrio Vibrio Vibrio parahaemoly- parahaemoly- parahaemoly- parahaemoly- parahaemolyticus № 37-Д ticus № 37-Д ticus № 37-Д ticus № 37-Д ticus № 37-Д 2 3 4 5 6 негативна негативна негативна негативна негативна кислота кислота кислота кислота кислота негативна негативна негативна негативна негативна кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота негативна негативна негативна негативна негативна позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота позитивна негативна негативна негативна позитивна негативна негативна негативна позитивна негативна негативна негативна позитивна негативна негативна негативна позитивна негативна негативна негативна немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту 5 57563 6 Продовження таблиці 1 1 Ріст на 1 % пептонній воді з 7% NaCl Ріст на 1 % пептонній воді з 10% NaCl Лізиндекарбоксілаза Аргініндигідролаза Орнітиндекарбоксілаза Контроль амінокислот Гемоліз на середовищі Вагатцума Наявність гену гемолізину в полімеразній ланцюговій реакції 2 3 4 5 6 ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна Висновок: Штам Vibrio parahaemolyticus № 37Д доступний в Україні. Стабільні морфологічні, культуральні, біохімічні, гемолітичні характеристики штаму Vibrio parahaemolyticus № 37-Д дозволяють використовувати його, як контрольний штам для перевірки ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці галофільних вібріонів. Наявність штаму Vibrio parahaemolyticus № 37-Д у вітчизняній колекції дозволить уникнути витрат Комп’ютерна верстка М. Мацело коштів на купівлю штамів у закордонних колекціях та на періодичне поновлення цих штамів. Використана література: 1. «Методические рекомендации по лабораторной диагностике, клинике, лечению и профилактике заболеваний, вызываемых парагемолитическими и другими условно патогенными морскими вибрионами», утверждено МЗ СССР № 28 - 6/11 от 17.07.1985 г. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601