Використання штаму vibrio alginolyticus №36-д для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці галофільних вібріонів

Штам Vibrio alginolyticus, задепонований 27.11.2008 p. під номером № 36-Д в депозитарії музею патогенних для людини мікроорганізмів (МПМ) ДУ "Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського" АМН України, який знаходиться у колекції філії МПМ на базі Державного закладу "Українська протичумна станція" Міністерства охорони здоров'я України, для контролю ростових властивостей поживних середовищ при діагностиці галофільних вібріонів. Корисна модель відноситься до біотехнології, медицини та ветеринарії, а саме, до бактеріології і може використовуватися в практичних та наукових лабораторіях при дослідженнях на галофільні вібріони. Відомий штам Vibrio alginolyticus (Bacteria ATCC® Number: 17750™) використовується за кордоном для діагностики галофільних вібріонів та контролю ростових властивостей поживних середовищ. Цей штам виділений за кордоном та зареєстрований в колекції АТСС, його придбання має високу вартість та пов'язане зі складною процедурою придбання патогенних бактерій. Крім того, штам необхідно періодично поновлювати, що передбачає витрати коштів на процедуру придбання за кордоном патогенних бактерій. В основу корисної моделі поставлене завдання знайти новий штам, котрий може бути використаний для контролю якості поживних середовищ для діагностики галофільних вібріонів. Штам має бути доступний на території України та відповідно мати нижчу вартість, ніж придбаний у закордонних колекціях. Метою даного винаходу є застосування вперше даного штаму для контролю якості поживних середовищ для діагностики галофільних вібріонів. Штам Vibrio alginolyticus № 36-Д за депонований 27.11.2008 р. під номером № 36-Д в депозитарії музею патогенних для людини мікроорганізмів (МПМ) ДУ "Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського" АМН України, та знаходиться у колекції філії МПМ на базі Державного закладу "Українська протичумна станція" Міністерства охорони здоров'я України. Штам Vibrio alginolyticus № 36-Д має характерні властивості, аналогічні до штаму Vibrio alginolyticus (Bacteria ATCC® Number: 17750™). Морфологічні ознаки. У мазках з добових агарових культур клітини цього штаму мають вигляд вигнутих грамнегативних паличок, що рухаються, спор і капсул не утворюють, добре фарбуються всіма аніліновими бар (19) UA (11) 57565 (13) (21) u201007160 (22) 09.06.2010 (24) 10.03.2011 (46) 10.03.2011, Бюл.№ 5, 2011 р. (72) ХАЙТОВИЧ ОЛЕКСАНДР БОРИСОВИЧ, ІЛЬЇЧЬОВ ЮРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ПІДЧЕНКО НАДІЯ НИКИФОРІВНА, В'ЯЛИХ ЖАННА ЕДУАРДІВНА (73) ДЕРЖАВНИЙ ЗАКЛАД "УКРАЇНСЬКА ПРОТИЧУМНА СТАНЦІЯ" МОЗ УКРАЇНИ, ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ЕПІДЕМІОЛОГІЇ ТА ІНФЕ U 1 3 57565 вниками. Поліморфізм помірно виражений. Культуральні властивості. На пластинах 3% лужного агару pH (7,6±0,2) через 12 годин вібріони штаму Vibrio alginolyticus №36-Д виростають у вигляді круглих, плоских, матових, блакитних у проточному світлі колоній розміром 3-4 мм у діаметрі. Колонії на твердому елективному середовищі TSBS круглі, мають яскравий жовтий колір на зеленому фоні середовища, 3-4 мм у діаметрі. Добре ростуть на елективному середовищі Vibrio агару у вигляді круглих колоній, мають рожевий колір середовища, розміром 3-4 мм у діаметрі. У бульйоні і лептонній воді вібріони у процесі росту дають рівномірне помутніння й утворюють поверхневу плівку. Оптимальна температура росту +(36±1)°С, температурний інтервал росту 20-40°С, час росту на рідких поживних середовищах 3-6 годин, на щільних поживних середовищах - 18-20 годин. Біохімічні ознаки. Вібріони штаму Vibrio alginolyticus № 36-Д володіють оксидазною активністю. Ферментують глюкозу в середовищі Хью-Лейфсона в аеробних й анаеробних умовах, ферментують сахарозу, маніт, манозу (з 0,1% пептону), але не розщеплюють лактозу, арабінозу , інозит, мають ферменти діастазу та триптофаназу (індол). Ферменти желатинозу та тіосульфатредуктази (сірководень) - відсутні. Ріст на 1% лептонній воді з 0% NaCl відсутній, 4 ріст на 1% лептонній воді з 7% NaCl - присутній, ріст на 1% пептонній воді з 10%NaCl - присутній. Містять декарбоксілазу лізину і орнітину, але не мають дигідролази аргініну. Штам зберігається у ліофілізованому стані при температурі +(5±2)°С, життєздатність його зберігається не більше 5 років або в напіврідкому 0,4% поживному агарі (pH 7,6-7,8) під шаром стерильної вазелінової олії при температурі +18 - +25 °С, але не більше 1 року. Можливість одержання штаму підтверджується наступними відомостями про депонування штаму: Приклад 1. Здійснення корисної моделі. При висівах на середовища збагачення - 1% пептонну воду та бульйон Хоттінгера культури з 3% NaCl Vibrio alginolyticus № 36-Д через 6 годин росли у вигляді рівномірного помутніння з плівкою на поверхні. Була відсутня дисоціація колоній при зберіганні протягом 48-72 годин на лужному агарі при температурі +(20±2)°С. Морфологія мікробних клітин у всіх досліджуваних культур була типова Грам негативні вигнуті палички. За характером росту на лужному агарі - блакитні, круглі, напівпрозорі колонії з рівним краєм до 4 мм у діаметрі. На рідкому середовищі збагачення ріст у всіх культур спостерігався у вигляді рівномірного помутніння з утворенням плівки на поверхні. Біохімічні, серологічні властивості культур та результати досліджень з фагами після 5 пасажувань на лужному агарі наведені в табл. 1. Таблиця 1 Визначення ефективності корисної моделі ОЗНАКИ 1 Лактози Маніту Сахарози ФЕРМЕНТАЦІЯ: Манози Арабінози Інозиту Середовище Кодама Середовище Хью-Лейфсона (окислення глюкози) Середовище Хью-Лейфсона (ферментація глюкози) Індолу УТВОРЕННЯ: H2S желатину Реакція Фогес-Проскауера Ріст на 1% пептонній воді без NaCl Ріст на 1% пептонній воді з 7% NaCl Ріст на 1% пептонній воді з 10% NaCl Лізиндекарбоксілаза Аргініндигідролаза Орнітиндекарбоксілаза Контроль амінокислот 1 пасаж 2 пасаж 3 пасаж 4 пасаж 5 пасаж Vibrio Vibrio Vibrio Vibrio Vibrio alginolyticus alginolyticus alginolyticus alginolyticus alginolyticus №36-Д №36-Д №36-Д №36-Д №36-Д 2 3 4 5 6 негативна негативна негативна негативна негативна кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст ріст позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна негативна негативна негативна негативна негативна позитивна позитивна позитивна позитивна позитивна норма норма норма норма норма 5 57565 Висновок: Штам Vibrio alginolyticus № 36-Д доступний в Україні, стабільні морфологічні, культуральні, біохімічні характеристики штаму Vibrio alginolyticus № 36-Д дозволяють використовувати його для контролю ростових властивостей пожив Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 6 них середовищ при діагностиці галофільних вібріонів. Наявність штаму Vibrio alginolyticus № 36-Д у вітчизняній колекції дозволить уникнути витрат коштів на купівлю штамів у закордонних колекціях та на періодичне поновлення цих штамів. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601