Вакцинний штам fusobacterium necrophorum дн-97

Штам Fusobactenum necrophorum ДН-97, який депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 138 від 05 08 2002 року, використовується для виробництва шактивованої асоційованої вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин, володіє стабільними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями, викликає 100%-ну загибель білих мишей в дозі 0,5см3 та концентрації мікробних клітин 4,6x108 Винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи, зокрема, до нового штаму анаеробного мікроорганізму, що використовується для виготовлення вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин Аналогом винаходу є лабораторний штам Fusobactenum necrophorum BN-2, що був використаний для виготовлення анатоксин-вакцини проти некробактерюзу [2] До недоліків даного штаму мікроорганізму можна віднести те, що він використовується для виділення токсину при виробництві анатоксин-вакцини, а профілактичний ефект такої вакцини невисокий - 33,3% [3] Прототипом винаходу є колекційний штам Fusobactenum necrophorum 2030A, що зберігається в колекції кафедри епізоотології та інфекційних хвороб Московської Державної академії ветеринарної медицини та біотехнологм (м Москва) [4] Подібними ознаками прототипу із заявленим штамом є те, що він високо токсигенний та патогенний для білих мишей і при культивуванні на кров'яному агарі викликає гемоліз еритроцитів, а також володіє подібними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями Подібним також є те, що цей штам використовується для виробництва шактивованої асоційованої вакцини проти некробактерюзу великої рогатої худоби - "Нековак" [4] ВІДМІННИМИ ознаками прототипу від заявленого штаму є наступні штам задепонований в колекції мікроорганізмів Російської Федерації і на Україні даного штаму мікроорганізму немає, для виробництва вакцини використовується бульйонна 2-х добова культура Fusobactenum necrophorum 2030А, вакцина "Нековак", компонентом якої є антиген із штаму, що взятий за прототип, не завжди має бажаний ефект при вакцинації великої рогатої худоби і не забезпечує високої імуногенності у щепленого поголів'я [2] Метою даного винаходу є вакцинний штам Fusobactenum necrophorum ДН-97 (Дніпропетровський-97), який володіє стабільними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями, добре вираженими токсигенними та патогенними властивостями був виділений з матеріалу відібраного від великої рогатої худоби з ознаками некробактерюзу в одному із господарств Дніпропетровської області Штам Fusobactenum necrophorum ДН-97, отриманий шляхом культивування ізоляту з вражених ділянок дистальних ВІДДІЛІВ КІНЦІВОК великої рогатої худоби та селекційований співробітниками лабораторії анаеробних інфекцій IBM УААН Штам Fusobactenum necrophorum ДН-97 задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 138 від 5 08 2002р Морфологічні властивості У мазках із бульйонних та агарових культур, штам Fusobactenum necrophorum ДН-97 має вигляд довгих ниток, що формують сплетіння у вигляді клубків Бактерія за Грамом фарбується негативно, спор та капсул не утворює При фарбуванні за Муромцевим, має (О 1^ 00 00 ю 58876 вигляд тонких довгих ниток з чітко вираженою дрібною зернистістю Культуральні властивості При культивуванні на середовищі Кітта-Тароцці (рН=7,4±0,2, оптимальна температура 37±1,0°С) ріст штаму Fusobacterium necrophorum ДН-97 при добре виражений через 46±8 годин, при цьому ріст супроводжується утворенням рівномірного помутніння та газу, що має неприємний гнилісний запах, а через 72±6 години - спостерігається значне помутніння середовища, а при подальшому культивуванні утворюється крипіковидний осад на дні пробірки На кров'яному і глюкозо-сироватковому агарі штам Fusobacterium necrophorum ДН-97 утворює дрібні росинчасті колонії до 1мм в діаметрі, які через 4-5 діб стають добре видимими сіруватобілого кольору з рівними краями На кров'яному агарі утворює зону гемолізу Ферментативні властивості Штам Fusobacterium necrophorum ДН-97 ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, не ферментує фруктозу, маніт, дульцит Утворює індол та сірководень Таблиця 1 БІОХІМІЧНІ властивості штаму Fusobacterium necrophorum ДН-97 + + + + + + Глюкоза Мальтоза Фруктоза Галактоза Сахароза Маніт Дульцит Утворення індолу Утворення сірководню crophorum ДН-97 патогенний для великої рогатої худоби, кролів та білих мишей У кролів на 4-5 добу при підшкірному введенні семидобової бульйонної культури в дозі 1см3 викликає некроз на МІСЦІ введення та їх загибель на 7-9 добу та 100%-ну загибель білих мишей в дозі 0,5см та концентрацією мікробних клітин 4,6x108 Стабільність вірулентності встановлена шляхом 5ти кратних пасажів через організм білих мишей та лабораторних спостережень на протязі 5-ти років Винахід ілюструється наступними прикладами Приклад 1 Штам Fusobacterium necrophorum ДН-97 (культура 1), отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок дистальних ВІДДІЛІВ КІНЦІВОК великої рогатої худоби, відселекційо ваний, як такий, що володіє характерними для роду Fusobacterium, родини Bactenodaceae морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями Був патогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні двохдобової бульйонної культури в дозі 0,5см3 по 10 тварин на кожне введення, гинуло 90100% тварин, при 100% збереженні у контролі Приклад 2 Штам Fusobacterium necrophorum ДН-97 (культура 2), отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок печінки великої рогатої худоби, що володів характерними для роду Fusobacterium, родини Bactenodaceae морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями, але був слабо патогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні бульйонної культури в дозі 0,5см3 по 10 тварин на кожне введення, гинуло 10-20% тварин, при 100% збереженні у контролі Порівняльна характеристика властивостей прототипу та випробуваних і вищезазначених прикладів наведені в таблиці 2 Патогенні властивості Штам Fusobacterium neТаблиця 2 Порівняльна характеристика властивостей прототипу та штамів Fusobacterium necrophorum Морфологія Штами F necrophorum 2030 F necrophorum ДН-97 (культура 1) F necrophorum ДН-97 (культура 2) Н П + Термін культи- Гемоліз еритвування штаму роцитів + + 2 доби 7 діб 7 Діб + + Наявність токсину Патогенність для білих мишей + + + 9/10 10/10 2/10 Примітка Н - нитчаста форма, П- поліморфна форма Імуногенні властивості Із штаму Fusobacterium necrophorum ДН-97 була виготовлена моновакцина для встановлення імуногенності штаму у дослідах на білих мишах та кролях Лабораторних тварин щепили підшкіряно ДВІЧІ З інтервалом 14 діб у дозах білих мишей по 0,5см3, кролів по 1,0см3 з концентрацією мікробних клітин 4млрд м к/см 3 На 10-ту добу після другого щеплення провели гостре зараження дослідних та контрольних (нещеплені) тварин бульйонною культурою штаму Fusobacterium necrophorum ДН97 в дозі 0 5см 3 та концентрацією мікробних клітин 4,6x10 Тварини із дослідної групи залишилися живими у порівнянні із 100%-вою загибеллю в контролі Титри антитіл у сироватці крові кролів, щеплених моновакциною із штаму Fusobacterium necrophorum ДН-97 наведені у таблиці З 58876 Таблиця З Динаміка титрів антитіл в РИГА у кролів, щеплених моновакциною із штаму Fusobactenum necrophorum ДН-97 Група тварин Термін дослідження Дослід Титри Антитіл не виявлено Контроль ВИХІДНІ дані Після 1-ГО щеплення на 7-у добу на 14-у добу Після 2-ГО щеплення на 7-у добу на 14-у добу на 30-у добу ід 1 4-1 16 1 32-1 64 0,6-1,2 1,5-1,8 1 256-1 512 1 512-1 1024 1 256-1 512 2,4-2,7 2,7-3,0 2,4-2,7 Антитіл не виявлено Отже, встановлено, що моновакцина із штаму Fusobactenum necrophorum ДН-97 є імуногенною Крім того, вакцина не викликає поствакцинальних ускладнень і викликає імунологічну ВІДПОВІДЬ та формування специфічних антитіл Антигенні властивості Визначення антигенної спорідненості штаму Fusobactenum necrophorum ДН-97 з іншими епізоотичними штамами Fusobactenum necrophorum проводили по їх типізації з протинекробактерюзними сироватками в РИГА Досліджено 5 різних епізоотичних штамів F necrophorum, які були найбільш репрезентативними представниками роду Fusobactenum серед виділених по морфологічним, культуральним, біохімічним та вірулентним властивостям Сироватки були виготовлені нами шляхом пперімунізацй кролів, вищезазначиними штамами Результати наведені у таблиці 4 Таблиця 4 Показники антигенної спорідненості штамів F necrophorum Штам F F F F F necrophorum ДН-97 necrophorum- K necrophorum XC necrophorum ЧН-2000 necrophorum ДОН Максимальні титри в PA з сироватками F necrophorum F necrophorum F necrophorum F necrophorum К ДН-97 XC ЧН-2000 1 2048 1 124 1 512 1 32 1 124 1 2048 1 32 1 512 1 512 1 32 1 2048 1 32 1 124 1 512 1 32 1 2048 1 512 1 512 1 512 1 32 Як видно з таблиці 4, титри антитіл в протинекробактерюзних сироватках до гомологічних штамів F necrophorum в РИГА становили 1 2048 Високо вираженою серологічною спорідненістю між собою володіли штами F necrophorum ДН-97, F necrophorum XC, F necrophorum ДОН Титри антитіл в перехресній РИГА між цими антигенами становили 1 512 Результати досліджень свідчать про те, що запропонований штам Fusobactenum necrophorum ДН-97 володіє високою патогенністю, має антигенну спорідненість з іншими епізоотичними штамами Fusobactenum necrophorum, а також придатний для виробництва вакцини проти некробактерюзу, Запропонований штам може бути використаний для виробництва вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин Джерела інформації 1 Определитель бактерий Берджи /под ред Комп'ютерна верстка Т Чепелева F necrophorum ДОН 1 512 1 512 1 512 1 32 1 2048 Дж Хоулта, Н Крита, П Снита и др Перевод с англ акад РАН ГА Заварзина - 9-е изд в 2-х томах-1997-800с 2 Самоловов А А , С В Лопатин, В А Чурбанов, А В Киселев Конструирование и оценка вакцин для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных Сб науч тр РАСХИ -Новосибирск -1997 С 108-113 3 Самоловов А А , Лопатин С В Некробактериоз крупного рогатого скота и пути решения проблемы //Аграрная Россия - 2001 -№3- С 34-37 4 Федосеенко В А Усовершенствование средств специфической профилактики некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец Автореф дис - канд вет наук 16 00 03Моск гос акад вет медицины и биотехнологии им К И Скрябина М -1998 - 16с Підписано до друку 05 09 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна