Вакцинний штам fusobacterium necropнorum-хс

Штам Fusobactenum necrophorum-XC, який депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 139 від 05 08 2002 року та використовується для виробництва шактивованої асоційованої вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин, володіє стабільними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями і є патогенним для білих мишей Винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи, зокрема до нового штаму анаеробного мікроорганізму, що використовується для виготовлення вакцини проти некробактерюзу сільськогосподарських тварин Аналогом винаходу є лабораторний штам Fusobactenum necrophorum BN - 2, що був використаний для виготовлення анатоксин-вакцини проти некробактерюзу [2] До недоліків даного штаму мікроорганізму можна віднести те, що він використовується для виділення токсину при виробництві анатоксин-вакцини, а профілактичний ефект такої вакцини невисокий -33,3% [3] Прототипом винаходу є колекційний штам Fusobactenum necrophorum 2030A, що зберігається в колекції кафедри епізоотології та інфекційних хвороб Московської Державної академії ветеринарної медицини та біотехнологм (м Москва) [4] Подібними ознаками прототипу із заявленим штамом є те, що він високо токсигенний та патогенний для білих мишей і при культивуванні на кров'яному агарі викликає гемоліз еритроцитів, а також володіє подібними морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями [1] Подібним також є те, що цей штам використовується для виробництва шактивованої асоційованої вакцини проти некробактерюзу великої рогатої худоби - "Нековак" [4] ВІДМІННИМИ ознаками прототипу від заявленого штаму є слідуючі - штам задепонований в колекції мікроорганізмів Російської Федерації і на Україні даного штаму мікроорганізмів немає, - для виробництва вакцини використовується бульйонна 2-х добова культура Fusobactenum necrophorum 2030А - вакцина "Нековак", компонентом якої є антиген із штаму, що взятий за прототип, не завжди має бажаний ефект при вакцинації великої рогатої худоби і не забезпечує високої імуногенності у щепленого поголів'я ИМетою даного винаходу є вакцинний штам Fusobactenum necrophorum - ХС ("Херсонський"), який володіє стабільними морфологічними, культурально-бюхімічними та патогенними властивостями і виділений з матеріалу відібраного від великої рогатої худоби з ознаками некробактерюзу в одному із господарств Херсонської області Штам Fmobactenum necrophorum ~ ХС, отриманий шляхом культивування ізоляту з вражених ділянок дистальних ВІДДІЛІВ КІНЦІВОК великої рогатої худоби, співробітниками лабораторії анаеробних інфекцій ГОМУААН Штам Fmobactenum necrophorum - ХС депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнологм і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 139 від 5 08 2002р Морфологічні властивості, У мазках із бульйонних та агарових культур, штам Fmobactenum necrophorum - ХС має вигляд довгих ниток, що формують зплетіння, рідше короткими ланцюжками Бактерія за Грамом фарбується негативно, спор та капсул не утворює При фарбуванні за Муромцевим, має вигляд тонких довгих ниток з чітко вираженою мілкою зернистістю 00 00 ю 58877 Культуральні властивості При культивуванні на середовищі Кітта-Тароцці (рН=7,4±0,2), штам Fusobacterium necrophorum - ХС через 24±6 години викликає значне помутніння середовища, при подальшому культивуванні утворюється кришковидний осад на дні пробірки, при цьому ріст супроводжується утворенням газу, що має неприємний гнилісний запах Оптимальна температура культивування 36-37°С На кров'яному та глюкозо-сироватковому агарі штам Fusobacterium necrophorum - ХС утворює дрібні росинчасті колонії до 1мм в діаметрі, що через 4-5 діб стають добре видимими сіруватобілого кольору з рівними або злегка зазубреними краями На кров'яному агарі утворює зону гемолізу, Ферментативні властивості Штам Fusobacterium necrophorum - ХС ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, не ферментує фруктозу, маніт, дульцит, утворює індол та сірководень Таблиця 1 БІОХІМІЧНІ властивості штаму Fmobactenum necrophorum - X C + + + + + + Глюкоза Мальтоза Фруктоза Галактоза Сахароза Маніт Дульцит Утворення індолу Утворення сірководню crophorum - ХС патогенний для великої рогатої худоби, кролів та білих мишей У кролів на 4-5 день при підшкірному введенні семидобової бульйонної культури в дозі 1см3 викликає некроз на МІСЦІ введення та загибель тварин на 8-12 добу, 100%-ну загибель білих мишей викликає в дозі 0,5смта КІЛЬКІСТЮ мікробних клітин 4б8х10 мк/см Стабільність вірулентності встановлена шляхом 8-х кратних пасажів та лабораторних спостережень на протязі ряду років Винахід ілюструється наступними прикладами Приклад 1 Штам Fmobactenum necrophorum ХС (культура 1), отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок дистальних ВІДДІЛІВ КІНЦІВОК великої рогатої худоби, відселекційований, як такий, що володє характерними для роду Fusobacterium, родини Bactenodaceae морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями Був патогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні двохдобової бульйонної культури в дозі 0,5см3 по 10 тварин на кожне введення, гинуло 90-100% тварин, при 100% збереженні у контролі Приклад 2 Штам Fmobactenum necrophorum ХС (культура 2), отриманий шляхом культивування ізоляту з уражених ділянок легень великої рогатої худоби, що володіє характерними для роду Fusobactersum, родини Bactenodaceae морфологічними та культурально-бюхімічними властивостями, але був слабо патогенним для білих мишей, оскільки при підшкірному та внутрішньочеревному введенні бульйонної культури в дозі 0,5см по 10 тварин на кожне введення, гинуло 10-20% тварин при 100% збереженні у контролі Порівняльна характеристика властивостей прототипу та випробуваних і вищезазначених прикладів наведені в таблиці 2 Патогенні властивості Штам Fmobactenum neТаблиця 2, Порівняльна характеристика властивостей прототипу та штамів Fusobacterium necrophorum Штами F necrophorum2030 F necrophorum-XC (культура 1) F necrophorum-XC (культура 2) Морфологія Термін культиH П вування штаму + + + 2 доби 2 доби 2 доби Примітка Н - нитчаста форма, П - поліморфна форма Імуногенні властивості, Із штаму Fmobactenum necrophorum AC була виготовлена моновакцина для встановлення імуногенності штаму у дослідах на білих мишах та кролях Лабораторних тварин щепили підшкіряно ДВІЧІ з інтервалом 14 діб у дозах білих мишей по 0,5см3, кролів по 1,0см3 з конщентрацією мікробних клітин 4млрд мк/см 3 На 10-ту добу після другого щеплення провели госпре Гемоліз еритро Наявність токсину Патогенність для білих мишей + + + 9/10 10/10 + 2/10 ЦИТІВ + зараження дослідних та контрольних (не щеплені) тварин бульйонного культурою штаму Fusobacterium necrophorum ХС в дозі 0,5см3 та концентрацією мікробних клітин 4,6x108 Тварини із дослідної групи залишилися живими у порівнянні із 100%вою загибеллю в контролі Титри антитіл у сироватці крові кролів, щеплених моновакциною із штаму Fusobacterium necrophorum КС наведені у таблиці З 58877 Таблиця З Динаміка титрів антитіл в РИГА у кролів, щеплених моновакциною із штаму Fusobactenum necrophorum XC Група тварин Термін дослідження Контроль Титри Антитіл не виявлено 1 4-1 16 1 32-1 64 ВИХІДНІ дані Після 1-ГО щеплення на 7-у добу на 14-у добу Після 2-ГО щеплення на 7-у добу на 14-у добу на 30-у добу Антитіл не виявлено Отже, встановлено, що моновакцина із штаму Fusobactenum necrophorum - ХС є імуногенною Крім того, вакцина не викликає поствакцинальних ускладнень і викликає імунологічну ВІДПОВІДЬ та формування специфічних антитіл Антигенні властивості Визначення антигенної спорідненості штаму Fusobactenum necrophorum ХС з іншими епізоотичними штамами Fusobactenum necrophorum проводили по їх типізації з про Дослід ід 1 256-1 512 1 512-1 1024 1 256-1 512 0,6-1,2 1,5-1,8 2,4-2,7 2,7-3,0 2,4-2,7 тинекробактерюзними сироватками в РИГА Досліджено 5 різних епізоотичних штамів F necrophorum, які були найбільш репрезентативними представниками роду Fusobactenum серед виділених по морфологічним, культуральним, біохімічним та вірулентним властивостям Сироватки були виготовлені нами шляхом пперімунізацм кролів, вищезазначиними штамами Результати наведеш у таблиці 4 Таблиця 4 Показники антигенної спорідненості штамів F necrophorum Штам F F F F F necrophorum ДН-97 necrophorum K necrophowm-KC necrophorum ЧН-2000 necrophorum ДОН F necrophorum ДН-97 1 2048 1 124 1 512 1 124 1 512 Максимальні титри в PA з сироватками F necrophorum F necrophorum F necrophorum К XC ЧН-2000 1 124 1 512 1 32 1 2048 1 32 1 512 1 32 1 2048 1 32 1 512 1 32 1 2048 1 512 1 512 1 32 Як видно з таблиці 4, титри антитіл в протинекробактерюзних сироватках до гомологічних штамів F necrophorum в РИГА становили 1 2048 Високо вираженою серологічною спорідненістю між собою володіли штами F necrophorum - ХС та F necrophomm ДН-97 і F necrophorum ДОН Титри антитіл в перехресній РИГА між цими антигенами становили 1 512 Результати досліджень свідчать про те, що запропонований штам Fmobactenum necrophorum ХС володіє високою патогенністю, має антигенну спорідненість з іншими епізоотичними штамами Fmobactenum necrophorum, а також придатний для виробництва вакцини проти некробактерюзу Запропонований штам може бути використаний для виробництва вакцини проти некробактеріозу сільськогосподарських тварин Джерела Інформації 1 Определитель бактерий Берджи /под ред F necropho Rum ДОН 1 512 1 512 1 512 1 32 1 2048 Дж Хоулта, Н Крига, П Снита и др Перевод с англ акад РАН ГА Заварзина - 9-е изд в 2-х томах 1997 -800с 2 А А Самоловов, С В Лопатил, В А Чурбанов, А В Киселев Конструирование и оценка вакцин для профилактики некробактериоза крупного рогатого скота // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных Сб науч тр РАСХИ-Новосибирск - 1997 С 108-113 3 Самоловов А А , Лопатин С В Некробактериоз крупного рогатого скота и пути решения проблемы//Аграрная Россия -2001 - №3 -С 34-37 4 Федосеенко В А Усовершенствование средств специфической профилактики некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец Автореф дис канд, вет наук 16 00 03 Моек гос акад вет медицины и биотехнологии им К И Скрябина М -1998 -16с 58877 Комп'ютерна верстка О В Курасв Підписано до друку 05 09 2003 Тираж 39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна