Спосіб ранньої діагностики вогнищевої склеродермії за допомогою маркерів cd95 та apo2.7

Спосіб ранньої діагностики вогнищевої склеродермії за допомогою маркерів CD95 та АРО2.7, який включає використання проточної цитометрії та маркера-рецептора CD-95 як індуктора апоптозу, який відрізняється тим, що додатково використовують маркер-антиген АРО2.7 (так званий 7А6), який з'являється на мембрані мітохондрії на ранніх стадіях при апоптозі клітин. (19) (21) u201014571 (22) 06.12.2010 (24) 11.07.2011 (46) 11.07.2011, Бюл.№ 13, 2011 р. (72) ПІСАРЄВ АНАТОЛІЙ АРКАДІЙОВИЧ, КОЛБАСІН ПАВЛО МИКОЛАЙОВИЧ, НІКОЛАШИН ГЕННАДІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, КОЛБАСІНА ЛЮДМИЛА ПАВЛІВНА, БАБАНІН ВОЛОДИМИР АНАТОЛЬОВИЧ (73) ПІСАРЄВ АНАТОЛІЙ АРКАДІЙОВИЧ, КОЛБА 3 Спосіб визначення показників вогнищевої склеродермії на ранніх стадіях захворювання включає застосування наступних маркерів: CD95 рецептор поверхні клітини, здатний запускати в ній апоптоз після взаємодії його з Fas-лігандом або моноклональними антитілами до Fas, APO2.7 для визначення відсоткової частки клітин, які зазнали апоптозу. Методика заснована на властивості антигену АРО2.7 (так званого 7А6) з'являтися на мембрані мітохондрії апоптозну клітин. Експресія АРО2.7 визначається на ранніх стадіях апоптозу, приблизно за три-чотири тижні в порівнянні з прототипом. Так само АРО2.7 може виявлятися в клітинах після впливу радіації, обробки лікарськими засобами або зв'язування CD-95 з Fas-лігандом. Живі клітини негативні або слабопозитивні до цього антигену. Проведений заявником аналіз рівня техніки, який включає пошук за патентними і науковотехнічними джерелами інформації, з виявленням джерел, що містять інформацію про аналоги технічного рішення, яке заявляється, дозволяє встановити, що заявником не виявлені аналоги, які характеризуються всією сукупністю ознак, ідентичною всім суттєвим ознакам способу, що заявляється, вказаних у формулі корисної моделі. Тому можна стверджувати, що корисна модель відповідає умові патентоспроможності за критерієм «новизна». Крім того, корисна модель промислово застосовна, тому що технічне рішення, що заявляється, дозволяє використовувати його при ранній діагностиці вогнищевої склеродермії. Можливість здійснення корисної моделі, що заявляється, підтверджується нижченаведеним описом її практичної реалізації. Заявлюваний спосіб ранньої діагностики вогнищевої склеродермії за допомогою маркерів CD95 та АРО2.7 включає використання проточної цитометрії та маркера-рецептора CD-95 як індуктора апоптозу, а також додаткове використовування маркера-антигену АРО2.7 (так званого 7А6), який з'являється на мембрані мітохондрії на ранніх стадіях при апоптозі клітин. Спосіб здійснюють наступним чином. Для проведення дослідження вибирають 60 пацієнтів з вогнищевою склеродермію. Контрольну групу складають 20 здорових людей. Для проведення спостереження виділяють 3 групи хворих, з різною тривалістю захворювання: - першу групу складають 22 пацієнта, з тривалістю хвороби 2 місяці; - другу групу складають 17 пацієнтів, з тривалістю хвороби 4 місяці; - третю групу складають 21 пацієнт, з терміном захворювання 6 місяців. Крім того, обстежено 20 практично здорових осіб, що не страждають цією патологією, які складають контрольну групу. Автори заявлюваного способу скористалися сучасною технологією швидкого оптичного вимірювання параметрів клітинних процесів, які три 61096 4 вають в ній, - проточної цитометрії. В даний час проточна цитометрія застосовується для виявлення певних клітин в досліджуваних зразках (як бактеріальних і грибкових, так і власних клітин організму людини), визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів, а також моніторування стану вірусного процесу у ВІЛ-інфікованих пацієнтів. Для обліку отриманих результатів ефективності терапії за даним способом використовують наступні маркери: CD95 - рецептор поверхні клітини, здатний запускати в ній апоптоз після взаємодії його з Fas-лігандом або моноклональними антитілами до Fas, АРО2.7 - для визначення відсоткової частки клітин, які зазнали апоптозу. Ця методика заснована на властивості антигену АРО2.7 (так званого 7А6) з'являтися на мембрані мітохондрії апоптозної клітини. Експресія АРО2.7 визначається на ранніх стадіях апоптозу. Так само АРО2.7 може виявлятися в клітинах після впливу радіації, обробки лікарськими засобами або зв'язування CD-95 з Fas-лігандом. Живі клітини негативні або слабопозитивні до цього антигену. Матеріалом дослідження заявлюваного способу є уражені вогнищевою склеродермією ділянки шкіри пацієнтів. Аналіз отриманих даних показує, що у хворих на вогнищеву склеродермію має місце посилення апоптозу (підвищення рівня CD95 та експресії АРО2.7). Ступінь деградації клітинного імунітету відбивається у зворотному кореляційному зв'язку між показниками клітинного імунітету (зменшення кількості CD3 + і CD4 +) і показниками апоптозу (зростання CD95 і АРО2.7). Інтенсифікація патологічного процесу має місце за рахунок загибелі клітин CD3 + і CD4 +. Сприятлива динаміка з боку патологічного процесу у зв'язку з запропонованою ранньою діагностикою починала виявлятися до кінця другого тижня від початку лікування. Покращився загальний стан хворих, зменшилося оніміння в осередках ураження, свербіж, парестезії, поступово ліквідовувалися запальні явища в набряково-ериматозній фазі. У стадії індурації шкіра ставала м'якшою, еластичнішою, стали утворюватися ділянки атрофії. До кінця курсу у всіх хворих основної групи констатовано досить високий ступінь клінічного поліпшення. Найкращі результати отримані у хворих з бляшковою формою склеродермії, особливо при локалізованому процесі - клінічна ремісія 30 % у порівнянні з 17 % пацієнтів з поширеним процесом (відмінності достовірні р