Спосіб визначення показників апоптозу як критерію адекватності терапії склеродермії

Спосіб визначення показників апоптозу як критерію адекватності терапії склеродермії, що 3 рію адекватної терапії склеродермії, визначається рівень циркулюючих антинуклеарних антитіл у сироватці крові методом твердофазного імуноферментного аналізу та проводиться імуногістохімічне дослідження зрізів біоптатів ураженої шкіри з визначенням основних імуногістохімічних маркерів апоптозу шляхом приготування гістологічного препарату з біоптату шкіри з подальшою обробкою його моноклональними антитілами anti-(Fas) CD95 і Annexin V і подальшою кількісною оцінкою. За сукупністю клінічних і імуногістохімічних ознак діагностують захворювання. Причому патологічним вважається підвищення рівня CD95 позитивних лімфоцитів понад 16,53±0,5% і концентрації антитіл до Annexin V понад 4,47±0,54 нг/мл та наявність титру антинуклеарних антитіл від 1:500 та вище. Між сукупністю важливих ознак запропонованого способу та очікуваним технічним результатом, який може бути досягнутий, проявляється наступний причинно-наслідковий зв'язок: апоптоз форма загибелі клітини, що виявляється у зменшенні її розміру, конденсації і фрагментації хроматину, ущільненні зовнішньої і цитоплазматичної мембран без виходу вмісту клітини в навколишнє середовище. Програмована загибель у нормі є результатом реалізації генетичної програми або відповіддю на зовнішні сили і вимагає витрат енергії і синтезу макромолекул de novo. Є відомості, що при склеродермії генетично порушені надлишкові процеси апоптозу призводять до прогресування захворювання, яке можна вчасно діагностувати та запобігти. Проведений заявником аналіз рівня техніки, що включає пошук по патентних і науковотехнічних джерелах інформації, з виявленням джерел, які містять інформацію про аналоги технічного рішення, що заявляється, дозволяє встановити, що заявником не виявлені аналоги, які характеризуються всією сукупністю ознак, ідентичної всім суттєвим ознакам способу, який заявляється, зазначених у формулі корисної моделі. Тому можна стверджувати, що корисна модель відповідає умові патентоспроможності за критерієм "новизна". Спосіб полягає в наступному. Запропонований спосіб визначення показників апоптозу як критерію адекватної терапії склеродермії здійснюється наступним чином. Спочатку проводять стандартне клінічне обстеження хворого. Визначають титр антинуклеарних антитіл у сироватці крові методом твердофазного імуноферментного аналізу. Після виявлення візуально уражених на системну склеродермію ділянок, роблять біопсію ураженої шкіри та отримані на мікротому зрізи забарвлюють імуногістохімічно за допомогою моноклональних антитіл до CD95 і Annexin V з 58153 4 подальшою кількісною оцінкою. За сукупністю клінічних і імуногістохімічних ознак діагностують захворювання. Причому патологічним вважається підвищення рівня CD95-позитивних лімфоцитів понад 16,53±0,5% і концентрації антитіл до Annexin V понад 4,47±0,54 нг/мл та наявність титру антинуклеарних антитіл від 1:500 та вище. Відомості, які підтверджують можливість використання способу. Для проведення дослідження було вибрано 120 пацієнтів, які перебували на лікуванні в Кримському республіканському клінічному шкірно-венерологічному диспансері з різними термінами захворюваності осередкової склеродермією. Контрольну групу склали 20 здорових людей. Для проведення спостереження було виділено 3 групи хворих, з різною тривалістю захворювання. Першу групу склали 47 пацієнтів з тривалістю хвороби 6-12 місяців. Другу групу - 30 пацієнтів, з терміном хвороби 1-5 років. Третю - 43 пацієнта - з термінами протікання даної патології більше 5 років. Крім того, обстежено 20 практично здорових осіб, що не страждають цією патологією, котрі склали контрольну групу. Для обліку отриманих результатів ефективності вибраної терапії використовували наступні маркери: CD95 - рецептор на поверхні клітини, здатний запускати в клітині апоптоз після взаємодії з його лігандом або моноклональними антитілами до Fas, а також Annexin V-FITC, який використовується для визначення відсоткової частки клітин, які зазнали апоптозу. Як випливає з аналізу отриманих даних, до початку лікування у хворих на системну склеродермію мало місце посилення апоптозу - підвищення рівня CD95 позитивних лімфоцитів і антитіл до Annexin V-FITC (Таблиця). Досліджуючи кореляційні зв'язки між рівнем показників клітинного імунітету та показниками апоптозу, звернено увагу на наявність тісного зворотного кореляційного зв'язку - r>-0,5 - між показниками клітинного імунітету зменшення кількості CD3+, CD4+ - і показниками апоптозу -CD95 і Annexin V. Дана зворотній кореляційний зв'язок відображає ступінь деградації клітинного імунітету. Має місце інтенсифікація процесів апоптозу за рахунок загибелі клітин CD3+ і CD4+. Результати терапії перебували в чіткій залежності від активності апоптозу при склеродермічному процесі. Лікування, проведене в період індурації, виявилося більш ефективним, ніж у гострій і підгострій стадії при наявності запальної активності та переважання шкірної еритеми, однак стан атрофії змінювалася мало. Таким чином, запропонована методика оцінки адекватності проведеної терапії дозволяє швидко і ефективно оцінити динаміку змін при проведеній терапії. 5 58153 6 Таблиця Дані показників апоптозу у хворих на системну склеродермію залежно від тривалості захворювання (Mm) Показники CD 95 Annexin V Одиниці 10/л % нг/мол Тривалість хвороТривалість хвороТривалість хвороби 6-12 місяців би більше 5 роби 1-5 років (n=30) (n=47) ків(n=43) 0,82±0,01 0,83±0,01 0,88±0,01 25,01±0,21 25,03±0,13 27,65±0,75 23,5±0,45 24,1±0,34 36,7±0,8 Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Підписне Здорові (n=20) 0,33±0,07 16,53±0,5 4,47±0,54 Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601