Спосіб визначення helicobacter pylory

Спосіб визначення Hehcobacter pylori, що включає дослідження ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратів слизової оболонки з використанням фарбування зразка, який відрізняється тим, що зразок фарбують галоціанш-хромовим галуном і, якщо на фоні забарвлення бюптата відносно вмісту ДНК і РНК в ядрах і цитоплазмі виявляються також пучки мікробних тіл, що фарбуються в темно-синьочорний колір, реєструють присутність Hehcobacter pylori Методы диагностики Hehcobacter pylori // Харьковск Мед Журнал - 1996 - №3 - С 40-42) Але цей метод є складним, у використанні має високу собівартість Цитологічний метод заключається в фарбуванні бактерії в мазках-відбитках бюптатів слизової оболонки шлунка за Гімзою і за Грамом Для виключення псевдонегативних результатів досліджують не менше 3-4 препаратів, не менше 9 полів зору у кожному з визначенням ступеня обсемініння Даний метод зручний і простий в використанні, займає біля 3-х годин (Фадеенко Г Д Методы диагностики Hehcobacter pylori // Харьковск Мед Журнал -1996 - №3, - С 40-42) Percival A H і співавтори описали метод виявлення HP шляхом гібридизації ДНК в звичайних парафінових зрізах, доведені його специфічність і чутливість (Darwin Р Е , Sztem М В , Zheng Q -J , et al Immune Evasijn by Hehcobacter pylori Gastric spiral Bacteria Lacing Surfase Immunoglobuhn Deposition and Reactivity with Homologous Antibodies - Hehcobacter - 1996 - Vol 1 - №1 P 20-27) Відомо також визначення бактерії в ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратах бюптатів слизової шлунка або дванадцятипалої кишки При цьому використовують метод парафінової заливки, або фарбування за стандартними методиками Гімзи, Гепте, за Грамом, толуїдиновим синім (за Staler), гематоксиліном та еозином, акрідшовим помаранчевим, використовують посеребріння за Вартинг-Старрі (Талалай И В Актуальне вопросы диагностики хеликобактерной инфекции // Медицина сегодня и ю (О (О 61645 завтра -1998 - №1 (4) -С 95-100) редовищі полістиролу Simon А Е виділяє три ступеня обсеміншня При дослідженні взірця під мікроскопом ядра слизової оболонки шлунка слабку (+) до 20 мікротіл мікробів забарвлюються в темно-синьо-чорний бних тіл в полі зору при збільшенні 630, середню колір (++) - до 50 і високу - більше 50мкрб тіл Ефективність способу ілюструє такий приклад Даний спосіб діагностики HP є найбільш блиБюптати слизової оболонки дванадцятипалої зьким до того, що заявляється, тому його обрано в кишки та антрального відділу шлунка хворого на якості прототипу цукровий діабет із КЛІНІЧНИМИ симптомами гастро дуоденіту досліджували на Hehcobacter pylori споВідомо, ЩО інформативність дослідження басобом-прототипом та способом, що заявляється гато в чому залежить від забарвлення досліджуЗразок фіксували в 10% нейтральному формаліні, ваного зразка Найбільш інформативними виявипроводили через розчини етанолу 70°, 80°, 96°, лися забарвлення акрідшовим помаранчевим заливали в парафін при t° 56° Зрізи товщиною 5(85%), за Гімзою (79%), менше - за Грамом (72%) і бмкм фарбували для загального вивчення гематоза Вартінгом-Старрі (67%) ксиліном-еозином, пікрофуксином, на ДНК і РНК У зв'язку з вищевикладеним в основу винаходу галоціаніном за Ейнарсаном, шиф-йодною кислопокладено задачу підвищення точності діагностики тою, а також за Романовським-Пмзою - для виявHP шляхом підвищення інформативності дослілення мікробів Hehcobacter pylori При дослідженні джуваного зразка зразку видно, що в муцині бокалоподібних клітин Задача, яку покладено в основу винаходу, вивміщуються Н Pylon, що фарбуються в синій корішується тим, що у відомому способі визначення лір Але на загальному синьому фоні тіла мікробів Hehcobacter pylori, що включає дослідження ГІСТОпроглядаються не дуже ясно, і в циліндричному ЛОГІЧНИХ препаратів слизової оболонки органу з епітелії вони не видні (див Фіг 1) використанням фарбування зразка, згідно з винаходом, його фарбують галоціанш-хромовими квасВивчення препаратів, пофарбованих галоціацями і якщо на фоні забарвлення бюптата відносніном за Ейнарсоном (на ДНК і РНК), дозволило не но вмісту ДНК і РНК в ядрах і цитоплазмі тільки оцінити вміст ДНК і РНК в клітинах слизової виявляються пучки мікробних тіл, що фарбуються оболонки, але й ВІДМІТИТИ, ЩО В муцині на поверхні в темно-синьо-чорний колір, реєструють присутслизової оболонки, в муцині бокалоподібних кліність Hehcobacter pylori тин, а де-ні-де і у власній пластинці слизової оболонки, тобто за базальною мембраною епітелію, Підвищення точності діагностики досягають за відмічається наявність груп формувань, розміри рахунок того, що галоціанш-хромові квасці є дуже яких відповідають розмірам мікробів (фіг 2) Зробдобрими ядерними, тобто ДНК, фарбниками (ГА лено припущення, що галоціанін фарбує також і Меркулов Курс п ато ги етологической техники / мікробну ДНК, що дуже добре контрастує Медицина, Ленінград - 1969 - С 279-280) і ядра тіл мікробів добре виявляються Hehcobacter pylori При аналізі і співставленні мікропрепаратів інвиявляють на поверхні слизової, в мукоцитах, а в ших бюптатів слизової оболонки за Романовськимтяжких випадках - у власній пластині слизової Гимзою та галоціаніном за Ейнарсоном, виявлено оболонки ідентичність позитивних оцінок, але остання методика виявляє мікробні тіла Hehcobacter pylori краБільш ТОГО Є МОЖЛИВІСТЬ навіть встановити ще ступінь тяжкості інфікування, підраховуючи КІЛЬКІСТЬ мікробних ТІЛ в полі зору Приклад представлено в фотографіях, де Спосіб виконують таким чином Фіг 1 Бюптат слизової оболонки 12-палоі кишки хворого Б Наявність мікробних тіл Hehcobacter Розчиняють 5г хромових квасців у ЮОмл дисpylori в муцині бокалоподібних епітеліальних клітильованої води, добавляють 0,15г галоцюніну та тин Фарбування за Романовським-Гимзою 36 піддають повільному нагріванню при частому збо1000 втуванні Кип'ятять протягом 3-5 хвилин Охолоджують, фільтрують й доливають до первинного Фіг 2 Бюптат слизової оболонки 12-палоі кишобсягу (тобто до ЮОмл) дистильованою водою ки хворого Б Наявність мікробних тіл Hehcobacter Фарбуючий розчин краще за все зафарбовує в pylori в муцині бокалоподібних епітеліальних кліперші тижні після свого приготування (до 4 тижнів) тин Фарбування галоціаніном за Ейнарсоном 36 Для фарбування придатні парафінові й замороже400 ні зрізи, перші депарафінують, фарбують у профіТаким чином, спосіб, що заявляється, дозвольтрованому барвнику 24-28 годин, промивають у ляє більш точно, ніж за відомими, визначити HP в воді (10-15 хвилин), проводять через спирти, пабіологічних зразках за рахунок підвищення їх інрафін розчинюють ксилолом або карболформативності ксилолом, з'єднують зріз з покривним склом в се 61645 Фіг. 1 Фіг. 2 Комп'ютерна верстка О Воробей Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119