Спосіб оцінки стану адаптації за допомогою маркерів апоптозу cd95 ta аро2.7

Спосіб оцінки стану адаптації за допомогою маркерів апоптозу CD95 та АРО2.7, що включає аналіз периферичної крові пацієнтів з використанням проточної цитометрії та маркера-рецептора 3 лігандом або моноклональними антитілами до Fas, APO2.7 - для визначення відсоткової частки клітин, які зазнали апоптозу. Методика заснована на властивості антигену АРО2.7 (так званого 7А6) з'являтися на мембрані мітохондрії апоптозних клітин. Експресія АРО2.7 визначається на ранніх стадіях апоптозу, приблизно за один-два тижня в порівнянні з прототипом. Так само АРО2.7 може виявлятися в клітинах після впливу радіації, обробки лікарськими засобами або зв'язування CD-95 з Fas-лігандом. Живі клітини негативні або слабо позитивні до цього антигену. Проведений заявниками аналіз рівня техніки, який включає пошук за патентними і науковотехнічними джерелами інформації, з виявленням джерел, що містять інформацію про аналоги технічного рішення, яке заявляється, дозволяє встановити, що заявником не виявлені аналоги, які характеризуються всією сукупністю ознак, ідентичною всім суттєвим ознакам способу, що заявляється, вказаних у формулі корисної моделі. Тому можна стверджувати, що корисна модель відповідає умові патентоспроможності за критерієм «новизна». Крім того, корисна модель промислово застосовна, тому що технічне рішення, що заявляється, дозволяє використовувати його при ранньої діагностики вогнищевої склеродермії. Можливість здійснення корисної моделі, що заявляється, підтверджується нижчеприведеним описом її практичної реалізації. Заявлений спосіб оцінки стану адаптації за допомогою маркерів апоптозу CD95 та АРО2.7 CD95 та АРО2.7 включає використання проточної цитометрії та маркера-рецептора CD-95 як індуктора апоптозу, а також додаткове використовування маркера-антигену АРО2.7 (також званого 7А6), який з'являється на мембрані мітохондрії на ранніх стадіях при апоптозі клітин. Спосіб здійснюють наступним чином. При знаходженні дітей на санаторнокурортному етапі проводять лікування та обстеження. Здійснюють забір периферичної крові і досліджують цитохімічні показники в нейтрофілах, далі аналізують отримані результати. Для проведення дослідження вибирають 30 пацієнтів з порушенням адаптаційних процесів на ранніх стадіях захворювання. Контрольну групу складають 10 здорових дітей. Автори заявленого способу скористалися сучасною технологією швидкого оптичного вимірювання параметрів клітинних процесів, які тривають в ній - проточної цитометрії. В даний час проточна цитометрія застосовується для виявлення певних клітин в досліджуваних зразках (як бактеріальних і грибкових, так і власних клітин організму людини), визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів, а також моніторування стану вірусного процесу у ВІЛ-інфікованих пацієнтів. Для обліку отриманих результатів ефективності терапії за даним способом використовують наступні маркери: CD95 - рецептор поверхні клітини, 61752 4 здатний запускати в ній апоптоз після взаємодії його з Fas-лігандом або моноклональними антитілами до Fas, АРО2.7 - для визначення відсоткової частки клітин, які зазнали апоптозу. Ця методика заснована на властивості антигену АРО2.7 (також званого 7А6) з'являється на мембрані мітохондрії апоптозної клітини. Експресія АРО2.7 визначається на ранніх стадіях апоптозу. Так само АРО2.7 може виявлятися в клітинах після впливу радіації, обробки лікарськими засобами або зв'язування CD-95 з Fas-лігандом. Живі клітини негативні або слабо позитивні до цього антигену. Матеріалом дослідження заявленого способу є периферична кров дітей, які знаходилися на санаторно-курортному етапі реабілітації. Аналіз отриманих даних показує, що у дітей на початковій стадії відхилень процесів адаптації має місце посилення апоптозу (підвищення рівня CD95 та експресії АРО2.7, що говорить про розвиток процесів дизадаптації. Ступінь деградації клітинного імунітету відбивається у зворотному кореляційному зв'язку між показниками клітинного імунітету (зменшення кількості CD3+ і CD4+) і показниками апоптозу (зростання CD95 і АРО2.7). Інтенсифікація патологічного процесу має місце за рахунок загибелі клітин CD3+ і CD4+. Як випливає з аналізу отриманих даних, у хворих дітей з відхиленням від норми стану адаптації шляхом визначення показників маркерів апоптозу нейтрофілів периферичної крові мало місце посилення апоптозу (підвищення рівня CD95 позитивних лімфоцитів і АРО2.7). Досліджуючи кореляційні зв'язки між рівнем показників клітинного імунітету та показниками апоптозу, ми звернули увагу на наявність тісного зворотного кореляційного зв'язку (r> -0,5) між показниками клітинного імунітету (зменшення кількості CD3+, CD4+) і показниками апоптозу (підвищення рівня CD95 і АРО2.7). Дані зворотного кореляційного зв'язку відображають ступінь деградації клітинного імунітету. Має місце інтенсифікація процесів апоптозу за рахунок загибелі клітин CD3+ і CD4+. Відхилення від норми стану адаптації шляхом визначення показників маркерів апоптозу нейтрофілів периферичної крові перебувало в чіткій залежності від проведених лікувальних заходів на етапі санаторно-курортної реабілітації. Застосування запропонованого способу оцінки стану адаптації у дітей тривало і часто хворіючих, що заключається у визначенні показників маркерів апоптозу CD95 та АРО 2.7 підтверджується наступними прикладами його виконання. Приклад 1 Дитина С., 13 років була прийнята до санаторію. Було проведено дослідження запропонованим способом. Показники апоптозу нейтрофілів периферичної крові становили - 0,34±0,07 ум. од. для CD95 та 4,57±0,55 ум. од. для АРО 2.7, що відповідає нормі та нормально вираженим процесам адаптації. Приклад 2 5 61752 Дитина Л., 15 років була прийнята до санаторію. Було проведено дослідження запропонованим способом. Показники апоптозу лейкоцитів периферичної крові становили 0,75±0,04 ум. од. для CD95 та 17,4±0,78 ум. од. для АРО 2.7. Зростання показників апоптозу нейтрофілів периферичної крові свідчило про процеси дезадаптації, що розвинулися. Запропонований спосіб дозволяє вирішувати проблему оцінки стану адаптації і може бути широко використаний на санаторно-курортному етапі лікування дітей, тривало і часто хворіючих. Таким чином, можна констатувати, що заявлений спосіб дозволяє виявити перші ознаки відхи Комп’ютерна верстка А. Крулевський 6 лення від норми стану адаптації шляхом визначення показників маркерів апоптозу нейтрофілів периферичної крові на ранніх стадіях захворювання - за 1-2 тижня в порівнянні з прототипом, що значно покращує результати і проведення лікувальних заходів на етапі санаторно-курортної реабілітації. З огляду на все вищезгадане можна констатувати, що задача, поставлена в дійсній корисній моделі - розробка способу оцінки стану адаптації шляхом визначення показників маркерів апоптозу нейтрофілів периферичної крові - виконана з досягненням технічного результату - раннє виявлення патологічного процесу. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601