Спосіб моделювання цитотоксичної дії термічно ушкодженої біологічної тканини

Спосіб моделювання цитотоксичної дії термічно ушкодженої біологічної тканини, що включає інкубацію у водному екстракті термічно ураженої біологічної тканини ізольованих нативних лейкоцитів із наступним визначенням реакції цитолізу, який відрізняється тим, що попередньо подріб 3 3000об/хв. тривалістю 30 хв., після чого на предметному склі змішують у рівних об'ємах, наприклад, від 20 до 50 мкл включно, нативну кров, отриманий водний тканинний екстракт і розчин флуорохрому акридину оранжевого у розведенні 1:10000, накривають скельцем, витримують при температурі 37 °C впродовж 2 год., після чого мікропрепарат досліджують у люмінесцентному мікроскопі. Перелік фігур: Фіг. 1 - термічно оброблений подрібнений субстрат кріоліофілізованої шкіри свині. Фіг. 2 - загальний вигляд подрібненого субстрату кріоліофілізованої шкіри свині - контроль. Фіг. 3 - реакція токсино-модульованого лейкоцитолізу, індукованого водним екстрактом термічно обробленого тканинного субстрату кріоліофілізованої шкіри свині. Фіг. 4 - реакція токсин-модульованого лейкоцитолізу, індукованого водним екстрактом інтактного тканинного субстрату кріоліофілізованої шкіри свині. Спосіб здійснюють наступним чином. Попередньо подрібнений субстрат кріоліофілізованої шкіри свині шаром в 1 см піддають термічній обробці при температурі 190-200 °C упродовж 3 год., після чого охолоджують до кімнатної температури. По завершенні термічної обробки субстрат набуває коричневого кольору. Далі його настоюють на чистій воді у співвідношенні 1:200 впродовж 1 год. Суміш центрифугують при швидкості обертання 3000 об/хв. тривалістю 30 хв., після чого на предметному склі змішують у рівних об'ємах, наприклад, від 20 до 50 мкл включно, нативну кров, отриманий водний тканинний екстракт і розчин флуорохрому акридину оранжевого у розведенні 1:10000, накривають скельцем, витримують при температурі 37 °C впродовж 2 год. Виготовлений мікропрепарат досліджують у люмінесцентному мікроскопі, звертаючи увагу на рівень лейкоцитолізу. Кількісну оцінку цитотоксичної дії термічно ушкодженої біологічної тканини здійснюють за рівнем інтенсивності люмінесценції ядерної субстанції пошкоджених лейкоцитів. Приклад 1. Подрібнений субстрат кріоліофілізованої шкіри свині шаром в 1 см помістили у су 62894 4 хожарову піч і витримували при температурі 195°C упродовж 3 год. Охолоджений до кімнатної температури субстрат кріоліофілізованої шкіри набув коричневого кольору (фіг. 1). Наважку його в 5 мг змішали з 1 мл чистої води, що відповідало співвідношенню 1:200, і екстрагували впродовж 1 год. Суміш центрифугували при швидкості обертання 3000 об/хв. упродовж 30 хв. На предметному склі 20 мкл нативної крові змішали з аналогічними об'ємами надосаду з водного тканинного екстракту і розчину акридину оранжевого у розведенні 1:10000, накрили скельцем, витримали при температурі 37 °C упродовж 2 год., після чого мікропрепарат досліджували в люмінесцентному мікроскопі. Контрольний препарат готували із інтактного тканинного субстрату (фіг. 2). Приклад 2. За запропонованим способом змоделювали цитотоксичну дію термічно ушкодженої біологічної тканини – подрібненого субстрату кріоліофілізованої шкіри. При цьому звертали увагу на рівень лейкоцитолізу, який коректно відображав токсичність термічно обробленого шкірного кріоліофілізованого субстрату (фіг. 3, 4). Оцінку його цитотоксичної дії здійснили за рівнем інтенсивності люмінесценції ядерної субстанції пошкоджених лейкоцитів, який знижувався адекватно токсичності дослідного субстрату. Завдяки застосуванню для виготовлення токсичної субстанції стандартизованого препарату кріоліофілізованої ксеношкіри - шкіри свині і можливості стандартизації подальшої термічної обробки отриманий водний екстракт термічно обробленого тканинного субстрату забезпечує гарантований рівень точності, відтворюваності та інформативності експериментальної моделі. Таким чином, запропонований спосіб забезпечує вищий, ніж за відомим способом, рівень точності, відтворюваності та інформативності експериментальної моделі, і може бути використаний за призначенням в експериментальній патології. Джерело інформації: Дем'яненко В.В., Бігуняк В.В., Гудима А.А. / Лейкоцитоліз як критерій індивідуальної непереносимості алогенного субстрату //Здобутки клінічної та експериментальної медицини. Тернопіль: Укрмедкнига, 2003. Вип.8. – С. 5 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 62894 6 Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601