Спосіб моделювання внутрішньоутробної дії антигенів

Спосіб моделювання внутрішньоутробної дії антигенів шляхом введення плодам, які отримані від лабораторних щурів-самок лінії Вістар, на 18-ту добу після запліднення шляхом лапаротомії, черезматково, черезоболонково, в навколоплідні води 0,05 мл розчину антигену, який відрізняється тим, що як антиген використовують інактивовану (вбиту) спліт-вакцину Ваксігрип 2009/2010 у розведенні 1:1 фізіологічним розчином. (19) (21) u201102218 (22) 25.02.2011 (24) 26.09.2011 (46) 26.09.2011, Бюл.№ 18, 2011 р. (72) ВОЛОШИН МИКОЛА АНАТОЛІЙОВИЧ, МАТВЄЙШИНА ТЕТЯНА МИКОЛАЇВНА, ГРІНІВЕЦЬКА НАТАЛІЯ ВАЛЕРІЇВНА, БУРЕГА ЮРІЙ ОЛЕКСІЙОВИЧ, ТАЛАНОВА ОЛЬГА СЕРГІЇВНА (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, ВОЛОШИН МИКОЛА АНАТОЛІЙОВИЧ, МАТВЄЙШИНА ТЕТЯНА МИКОЛАЇВНА, ГРІНІВЕЦЬКА НАТАЛІЯ ВАЛЕРІЇВНА, БУРЕГА 3 63020 антигену, що забезпечить більш фізіологічне моделювання внутрішньоутробної антигенної дії з урахуванням краніокаудального напрямку формування лімфоїдної тканини, асоційованої зі шлунково-кишковим трактом та прилеглими органами, що дозволить уникнути стресу плода, а також отримати більш точні експериментальні дані і дозволить адекватніше аналізувати закономірності змін будови органів шлунково-кишкового тракту та асоційованої з ними лімфоїдної тканини у відповідь на антигенну дію. Поставлена задача вирішується тим, що у способі, який полягає у введенні плодам, які отримані від лабораторних щурів-самок лінії Вістар, на 18-ту добу після запліднення шляхом лапаротомії, черезматково, черезоболонково, в навколоплідні води 0,05 мл розчину антигену, новим є те, що вводять інактивовану (вбиту) спліт-вакцину Ваксігрип 2009/2010 у розведенні фізіологічним розчином 1:1. До складу вакцини Ваксігрип 2009/2010 входять віруси грипу, культивовані на курячих ембріонах, розщеплені з використанням октоксинолу-9, інактивовані формальдегідом, очищені. Потім вірусні протеїни, а саме гемаглютинін та нейрамінідазу, вилучають для створення вакцини Ваксігрип 2009/2010. Самостійно ці протеїни неспроможні викликати захворювання, однак проявляють необхідну антигенну дію. Одна доза вакцини (0,5 мл) Ваксігрип 2009/2010 містить: A/Brisbane/59/2007(H1N1) A/Brisbane/I 0/2007(H3N2) B/Brisbane/60/2008 15 мкг 15 мкг 15 мкг Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Введення речовин перорально є більш фізіологічним, ніж внутрішньоплідне введення та викликає менший інтраопераційний стрес у експериментальних тварин. Введення антигену в навколоплідні води призводить до потрапляння його до травного тракту. Отже таким чином досягається імунізація тварин. Доведено, що плід заковтує до 1/3 об'єму навколоплідних вод за добу (J.C. Browne, L. Dixon, 1982). Виходячи з цього, весь антиген повинен потрапити до шлунковокишкового тракту плода, отже його дія буде пролонгованою та не трапиться дезінтеграції антигену. Доказом цього є потрапляння суспензії китайської туші через декілька годин після введення в навколоплідні води до просвіту тонкої кишки та 4 початкових відділів товстої (Карзов М.В., 1991). Процес становлення лімфоїдної тканини, асоційованої з шлунково-кишковим трактом та прилеглими органами, відбувається в краніокаудальному напрямку. Тому за допомогою методу ентеральної пролонгованої імунізації плодів шляхом введення антигену до навколоплідних вод можна більш адекватно прослідкувати зміни, що відбуваються у формуванні місцевого імунітету. Вакцина Ваксігрип 2009/2010 має виражений токсичний, ад'ювантний та пірогенний ефекти, що дає можливість змоделювати процес, близький до патологічного. З іншого боку, введення інактивованої вакцини Ваксігрип 2009/2010 виключає можливість виникнення інфекційного чи онкологічного процесу у піддослідної тварини та, як наслідок, спотворення та недостовірність результатів експериментального дослідження. Зменшення інтенсивності інтраопераційного стресу у поєднанні з підвищенням ефективності простеження змін у формування місцевого імунітету, а також відсутність розвитку інфекційного чи онкологічного процесу у піддослідної тварини після введення інактивованої вакцини Ваксігрип 2009/2010 є актом гуманного поводження з експериментальними тваринами і повністю відповідає засадам «Європейської конвенції з захисту хребетних тварин, які використовуються в експериментальних та інших наукових цілях» (Страсбург, 18.03.86). Вакцина Ваксігрип є стандартизованою, тобто однорідною, тому розрахована доза може використовуватися протягом всього експерименту. Таким чином, сукупність вищезазначених позитивних чинників, забезпечить отримання більш точних експериментальних даних і дозволить більш точно й достовірно аналізувати закономірності змін будови органів та асоційованої з ними лімфоїдної тканини у відповідь на антигенну дію. Спосіб здійснюють таким чином. Плодам, які отримані від лабораторних щурів-самок лінії Вістар, на 18-ту добу після запліднення шляхом лапаротомії, черезматково, черезоболонково, в навколоплідні води вводиться 0,05 мл розведеної у рівних об'ємах (1:1) фізіологічним розчином вакцини Ваксігрип 2009/2010. Антиген вводять в область рота, подразнюючи при цьому верхню губу плода голкою з метою викликання ковтального рефлексу. При розведенні вакцини Ваксігрип 2009/2010 з фізіологічним розчином у рівних об'ємах, а саме по 0,025 мл відповідно, смертність серед потомства не перевищувала допустиму межу - 30 % і становила 23,35 % , при цьому всі самки в післяопераційному періоді вижили (див. табл.). 5 63020 6 Таблиця Порядковий номер посліду Послід № 1 Послід № 2 Послід № 3 Послід № 4 Послід № 5 Послід № 6 Послід № 7 Послід № 8 Послід № 9 Послід № 10 Послід № 11 Послід № 12 Послід № 13 Послід № 14 Послід № 15 Послід № 16 Послід № 17 Кількість плодів шт. 7 7 11 9 7 8 10 8 8 9 7 5 9 7 9 10 6 Кількість живонаро-джених, шт. 7 1 11 9 2 3 9 8 7 5 5 5 6 7 6 8 6 Загальна смертність при введенні в навколоплідні води 0,05 мл вакцини Ваксігрип 2009/2010 у розведенні фізіологічним розчином 1:1- 23,35 %. Виходячи з наведених даних, можна зробити висновок, що при введенні 0,05 мл розчину вакцини Ваксігрип 2009/2010 у розведенні з фізіологіч Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Кількість мертвонароджених, шт. 6 5 5 1 1 4 2 3 3 2 Смертність, % відсутня 85,71 % відсутня відсутня 71,43 % 62,5 % 10 % відсутня 10 % 44,44 % 28,57 % відсутня 33,33 % відсутня 33,33 % 20 % відсутня Смертність самок відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня відсутня ним розчином 1:1 в навколоплідні води, смертність потомства не перевищує 23,35 % при повній відсутності смертності серед самок, а отже цей шлях введення антигену є оптимальним з метою експериментальних досліджень. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601