Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю з трави підмаренника справжнього

Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю з трави підмаренника справжнього шляхом попередньої обробки рослинної сировини хлороформом, багаторазовою екстракцією отриманого шроту органічним розчинником з наступним концентруванням, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують траву підмаренника справжнього (Galium verum L.), екстракцію здійснюють етилацетатно-спиртовою сумішшю (8:2) з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі при загальному співвідношенні сировина : екстрагент 1:10-1:15 при постійно підтримуваній температурі 70-75 °С протягом 12 годин. (19) (21) u201105767 (22) 10.05.2011 (24) 12.12.2011 (46) 12.12.2011, Бюл.№ 23, 2011 р. (72) ГОРЯЧА ОЛЬГА ВОЛОДИМИРІВНА, КАШПУР НАТАЛІЯ ВАЛЕРІЇВНА, ІЛЬЇНА ТЕТЯНА ВАСИЛІВНА, ВОЛЯНСЬКИЙ АНДРІЙ ЮРІЙОВИЧ, КОМІСАРЕНКО АНДРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ, АБДУЛКАФАРОВА ЕЛЬМІРА РАМІЗІВНА, ГРУДЬКО ІРИНА ВОЛОДИМИРІВНА, ОЧКУР ОЛЕКСАНДР ВАСИЛЬОВИЧ, КОВАЛЬОВА АЛЛА МИХАЙЛІВНА, АНДРУСЕНКО ОЛЕКСАНДР ВАСИЛЬОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 розчинників (гексану або бензин-калоші), що здорожчує, ускладнює виконання способу та робить більш небезпечним процес отримання екстракту [3]. Задача корисної моделі полягає у створенні способу одержання засобу рослинного походження шляхом екстракції трави підмаренника справжнього, в результаті чого одержують засіб з антимікробною активністю. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі одержання антимікробного засобу шляхом попередньої обробки рослинної сировини хлороформом, багаторазовою екстракцією отриманого шроту органічним розчинником з наступним концентруванням, згідно з корисною моделлю як рослинну сировину використовують заготовлену у фазі цвітіння траву підмаренника справжнього, екстракцію здійснюють етилацетатно-спиртовою сумішшю (8:2) при загальному співвідношенні сировина : екстрагент. 1:10-1:15, при постійно підтримуваній температурі 70-75 °С з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі протягом 12 годин. Корисною моделлю передбачено, що як рослинна сировина використовується трава підмаренника справжнього. Підмаренник справжній (Galium verum L.) - багаторічна трав'яниста рослина родини маренові (Rubiaceae Juss.), широко використовується у народній медицині з лікувальною метою як сечогінний, кровоспинний, протизапальний, антисептичний, знеболюючий і седативний засіб. Знежирення рослинної сировини хлороформом проводили для видалення ліпофільного комплексу. Нами експериментально доведено, що спектр біологічної активності засобу, одержаного за заявленим способом, обумовлений фенольними сполуками, які не екстрагуються хлороформом. Експериментальним шляхом встановлено, що ефективним при здійсненні заявленого способу є використання співвідношення сировини до екстрагента як 1:10 - 1:15. При цьому, якщо співвідношення менше 1:10, то не забезпечується достатня екстракція БАР, що призводить до зниження фармакологічної активності та виходу цільового продукту. Якщо співвідношення більше 1:15, то це призводить до ускладнення та подовження технологічного процесу, збільшення використання розчинника та енерговитрат. Отриманий екстракт трави підмаренника справжнього - це густа, в'язка маса бурого кольору. Всі параметри заявленого способу визначено експериментальним шляхом з урахуванням біологічної активності одержаного засобу, ефективності, доступності та нешкідливості реактивів, практичного відтворення способу у промислових умовах. Сукупність ознак заявленого способу є новою, невідомою з джерел інформації. 65519 4 Заявлений спосіб здійснюють наступним чином. Заготовлену у фазі цвітіння і подрібнену траву підмаренника справжнього піддають вичерпній екстракції хлороформом при загальному співвідношенні сировина : екстрагент 1:10-1:12 та загальній тривалості екстракції - 28-32 годин при температурі 55-60°С з подальшою фільтрацією одержаного хлороформного екстракту. Висушений на повітрі при кімнатній температурі шрот вичерпно екстрагують у замкненому циклі етилацетатно-спиртовою сумішшю (8:2) при загальному співвідношенні сировина : екстрагент 1:10-1:15 протягом 12 годин при постійно підтримуваній температурі 70-75 °С. Одержаний екстракт упарюють у вакуумі до густого екстракту. Вихід цільового продукту складає 14,90 % від повітряно-сухої ваги сировини. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 1 кг заготовленої у фазі цвітіння і подрібненої повітряно-сухої трави підмаренника справжнього завантажили у циркуляційний екстрактор, залили 10 л хлороформу та вичерпно екстрагували при постійно підтримуваній температурі 5560 °С протягом 30 годин. Одержаний знежирений шрот сушили на повітрі при кімнатній температурі, потім завантажили в циркуляційний екстрактор, залили 10 л етилацетатно-спиртової суміші (8:2) та екстрагували протягом 12 годин при постійно підтримуваній температурі 70-75 °С. Одержаний екстракт відфільтрували і концентрували під вакуумом до одержання густого продукту. Вихід цільового продукту склав 14,90 %. Приклад 2. Антимікробну активність екстракту з трави підмаренника справжнього, одержаного за заявленим способом, вивчали, використовуючи методи дифузії в агар та серійних розведень [4, 5]. Для оцінки активності екстракту використовували стандартні штами мікроорганізмів, регламентовані ВООЗ для вивчення антибактеріальної дії препаратів: Staphylococcus aureus АТСС 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus vulgaris ATCC 4636, Bacillus subtilis ATCC 6633, С albicans 885663. Для визначення антимікробної активності культури мікроорганізмів вирощували на м'ясопептонному агарі при температурі 37 °С. Термін культивування мікроорганізмів складав 24 години. Для кількісної оцінки антимікробної активності екстракту та визначення мінімальної пригнічуючої ріст мікроорганізмів концентрації використовували метод серійних розведень. Екстракт з трави підмаренника справжнього використовували у вигляді 2 % спиртового розчину. Результати проведених досліджень наведені в таблиці. 5 65519 6 Таблиця Вивчення антимікробної активності екстракту з трави підмаренника справжнього, одержаного за заявленим способом Тест-штами мікроорганізмів S. aureus ATCC 25923 Е. cоlі АТСС 25922 P. aeruginosa ATCC 27853 P. vulgaris ATCC 4636 B. subtilus ATCC 6633 C.albicans ATCC 885-663 Діаметр зон затримки росту, мм 30,3±0,4 12,1±0,2 20,2±0,3 13,1±0,2 20,0±0,3 10,0±0,1 *МБсК, мкг/мл **МБцК, мкг/мл 62,5 250 125 250 125 250 125 500 250 500 250 500 Примітка: *МБсК - мінімальна бактеріостатична концентрація; **МБцК - мінімальна бактерицидна концентрація Аналіз даних таблиці свідчать, що екстракт з трави підмаренника справжнього, одержаний за заявленим способом, проявляє антимікробну активність по відношенню до усіх тест-штамів мікроорганізмів. Діаметри зон затримки росту складають 10-30 мм, що вказує на чутливість мікроорганізмів до екстракту. Досліджуваний екстракт виявив слабку дію лише по відношенню до C.albicans. Таким чином, заявлено спосіб одержання екстракту з трави підмаренника справжнього з антимікробною активністю. Заявлений спосіб простий, економічний, передбачає використання доступної вітчизняної сировини, може бути здійснений на будь-якому фармацевтичному підприємстві зі стандартним обладнанням. Екстракт, одержаний за заявленим способом, проявляє виражену антимікробну активність і є перспективним для створення нових лікарських засобів зазначеної дії. Джерела інформації 1. Патент на винахід 44927, Україна, МПК (2006) А61К36/18, А61Р17/02 (2007.01). Спосіб одержання ранозагоювального та антимікробного Комп’ютерна верстка В. Мацело засобу. Заявка 99052778, Заявл. 20.05.1999; Опубл. 15.03.2002, Бюл. № 3. 2. Патент на винахід 77347, Україна, МПК (2006) А61К36/185, А61К127/00 (2007.01), А61Р29/00, А61Р31/00, А61Р13/00. Спосіб одержання засобу з протизапальною, антимікробною та діуретичною дією із листя груші. Заявка а200503996, Заявл. 26.04.2005; Опубл. 15.11.2006, Бюл. № 11. 3. Патент на винахід 89926, Україна, МПК (2006) А61К36/61 (2006.01), А61Р31/00. Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю з листя евкаліпту. Заявка а200903866, Заявл. 21.04.2009; Опубл. 10.03.2010, Бюл. № 5. 4. Микробиология: Метод. рек. для студ. фармац. высш. учеб. завед. // И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, М.М. Великая, Л.С. Стрельников, H.Е. Шевелева, Л.Ф. Силаева, М.Ю. Стегний, О.Г. Гейдерих, Н.И. Филимонова. - X.: Изд-во НФаУ; Золотые страницы, 2004. - 144с. 5. Вивчення специфічної активності протимікробних лікарських засобів: Метод. реком. / Волянський Ю.Л., Гриценко І.С., Широбоков В.П. і співавт. -Київ, - 2004.-40С. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601