Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю з листя евкаліпту

Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю, що включає екстракцію рослинної сировини - листя евкаліпту прутовидного - 96 % спиртом етиловим, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя евкаліпту, яке в складі ефірної олії містить не менше 20 % цинеолу, екстракцію проводять або 96 % спиртом етиловим, або етилацетатом при співвідношенні сировини до екстрагенту 1:3-1:20, очищення проводять шляхом розчинення в 3-кратній кількості гексану або бензин-калоші та додавання 4 % розчину сульфату міді. (19) (21) a200903866 (22) 21.04.2009 (24) 10.03.2010 (46) 10.03.2010, Бюл.№ 5, 2010 р. (72) КОШОВИЙ ОЛЕГ МИКОЛАЙОВИЧ, КУХТЕНКО ОЛЕКСАНДР СЕРГІЙОВИЧ, КОВАЛЬОВА АЛЛА МИХАЙЛІВНА, КОМІСАРЕНКО АНДРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ, ГЛАДУХ ЄВГЕНІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ (73) КОМІСАРЕНКО АНДРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ (56) UA 79383 C2, 11.06.2007 RU 0 032 414 C1, 10.04.1995 JP 56020597 A, 26.02.1981 JP 2000060437 A, 29.02.2000 JP 8059491 A, 05.03.1996 3 су, збільшення використання розчинника, час упарювання та енерговитрати значно зростають. Оптимальне співвідношення 1:3-1:12 тому, що забезпечується достатня екстракція БАР, час упарювання мінімальний та дозволяє отримувати екстракт на стандартному обладнанні. При цьому з сировини екстрагують хлорофіли, терпени, флавоноїди, гідроксикоричні кислоти та інші фенольні сполуки. Згідно з заявленим способом упарювання проводять до 1/20-1/22 первинного об'єму. При більшому упарюванні залишок має більшу в'язкість та зменшується його текучість, що ускладнює роботу з екстрактом та збільшує його втрати в процесі виробництва. При меншому упарюванні значно збільшується витрата реагентів та розчинників в процесі очистки. Очистку екстракту в процесі здійснення заявленого способу проводять шляхом розчинення сконцентрованого екстракту в 3-х кратній кількості гексану або бензин-калоші, при додаванні рівної кількості 4% розчину міді сульфату та перемішуванні протягом 2-12 годин доки рН водного шару не досягне 2-4. Далі гексановий шар промивають рівною кількістю води та сушать, наприклад, в вакуум-циркуляторному апараті при зниженому тиску, до густого екстракту та при необхідності доводять спиртом до рідкого. Після очистки екстракт містить терпенові сполуки та порфіни. Заявлений спосіб забезпечує отримання екстракту листя евкаліпту у вигляді густої, в'язкої, темно-зеленої рідини. Заявлений спосіб здійснюють шляхом екстракції подрібненого листя евкаліпту 96% спиртом етиловим або етилацетатом при співвідношенні сировина:екстрагент - 1:3-1:20, фільтрації отриманого екстракту та упарюванні до 1/20-1/22 попереднього об'єму, отриманий кубовий залишок розчиняють у 3-х кратній кількості гексану або бензинкалоші, для очистки додають рівну кількість 4% розчину сульфату міді, промивають гексановий шар рівною кількістю води та упарюють під вакуумом до густого екстракту. Екстракт являє собою густу, в'язку рідину темно-зеленого кольору, зі специфічним запахом. Вихід готового продукту 812%. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1. 1кг подрібненого шляхом вальцювання до розмірів часток 2,5-3,0мм сухого листя евкаліпту екстрагували 3л 96% етилового спирту протягом доби, екстракцію проводили тричі. Одержані екстракти об'єднували (7,6л), упарювали при температурі 85 C під вакуумом у вакуумциркуляційному апараті при розрідженні 690мм рт.ст. до об'єму залишку 0,4л. Кубовий залишок розчиняли в 1,2 літрах гексану, додавали 1,6л 4% розчину сульфату міді та перемішували протягом 5 годин до тих пір, поки рН водного шару досяг 2,9. 89926 4 Далі гексановий шар промивали рівною кількістю води очищеної (1,2л), водний шар відокремлювали, а гексановий шар упарювали під вакуумом. Вихід готового продукту - 10,5%. Приклад 2. Вивчення антибактеріальної активності екстракту, отриманого заявленим способом проводили методом дифузії в агар та методом послідовних розведень у рідкому живильному середовищі [2]. Відповідно до рекомендацій ВООЗ для оцінки активності препарату використовували рефренс-штамы Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus 6538 ATCC, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus vulgaris NCTC 4636, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Pseudomonas aeruginosa 9027 ATCC, Basillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans 885/653 ATCC. Встановлено, що екстракт виявляє активність по відношенню до штамів Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Basillus subtilis, Candida albicans та Streptococcus pyogenes, тобто екстракт виявляє антимікробну активність по відношенню до грам-позитивних та грам-негативних бактерій та грибів. Найбільшу активність екстракт виявляє у вигляді 1% спиртового розчину. Таким чином заявлено новий спосіб одержання засобу з антимікробною активністю, який відзначається рядом переваг: 1) простота виконання та можливість здійснення на стандартному обладнанні в промислових умовах України; 2) використання в якості екстрагента як спирту етилового, так і етилацетату, тобто спосіб доступний та має гибку технологію; 3) в процесі очистки відмовились від використання токсичного розчинника бензола та проведена його заміна на гексан або бензин-калошу, що робить технологію більш безпечною; 4) при промисловому використанні заявленого способу зменшується використання спирту етилового та при необхідності спосіб дозволяє відмовитись від цього розчинника, що дозволить фармацевтичним підприємствам підвищити економічну ефективність виробництва; 5) перспективність використання одержаного екстракту як лікарської субстанції для одержання різних лікарських форм; 6) тривалий термін зберігання засобу, одержаного заявленим способом. Джерела інформації 1. Пат. №5242 Україна, МПК А61К35/78. Спосіб одержання хлорофіліпту / В.Л. Надтока, Н.Г. Божко, А.О. Грижко. - №2753048/SU; Заявл. 25.04.79; Опубл. 28.12.94, Бюл. №7-1. 2. Доклінічні дослідження лікарських засобів: Метод рекоменд. / За ред. чл.-кор. АМН України ОБ. Стефанова. - K.: Здоров'я, 2002. - C. 79-95, 292-306. 5 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 89926 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601