Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю з цинеоловмісної рослинної сировини

Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю, що включає екстракцію рослинної сировини 96 % спиртом етиловим, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя шавлії лікарської, листя евкаліпту, яке в складі ефірної олії містить не менше 20 % цинеолу, та іншу цинеоловмісну сировину, екстракцію проводять або 96 % спиртом етиловим, або етилацетатом при співвідношенні сировини до екстрагенту 1:3-1:20, очищення проводять шляхом розчинення в 3-кратній кількості гексану або бензинкалоші та додавання 4 % розчину сульфату міді або цинку. Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної галузі, зокрема до одержання з листя шавлії лікарської, евкаліпту або іншої цинеоловмісної рослинної сировини біологічно активних засобів рослинного походження з антимікробною активністю. Відомий спосіб одержання хлорофіліпту прийнятий за прототип [1]. Зазначений спосіб полягає у екстракції листя евкаліпту прутовидного 96% спиртом в співвідношенні 1:12, упарюванні екстракту до 1/20 частини первинного об'єму, розведенні залишку, що утворився, у 3-х кратною кількістю води, очистці розчином сірчанокислої сірки у співвідношенні 9:1, екстрагуванні цільового продукту бензолом в співвідношенні 3:5, промиванні отриманого бензольного витяг промивають рівною кількістю води, упарюванні під вакуумом, обробці залишку 96% спиртом в співвідношенні 1:2 та висушуванні. Недоліками способу за прототипом можна вважати використання для екстракції тільки 96% спирту та імпортної сировини - листя евкаліпту, очистку з використанням токсичного розчинника бензола, крім того, додаткового використання 96% спирту для очистки, що ускладнює, здорожчує та робить більш небезпечним процес отримання екстракту. Завданням винаходу є створення способу одержання засобу рослинного походження з антимікробною активністю, який передбачає спиртову або етилацетатну екстракцію листя шавлії лікарської, евкаліпту або іншої цинеоловмісної сировини та подальшу очистку отриманого екстракту, що дозволить менше використовувати імпортну сировину - листя евкаліпту, зробити технологію більш безпечною та підвищити ефективність терапії інфекційних захворювань. Поставлене завдання вирішується таким чином, що спосіб одержання засобу з антимікробною активністю включає екстракцію рослинної сировини 96% спиртом або етилацетатом, фільтрацію, упарювання, очищення та сушку. Винаходом передбачено, що як рослинну сировину використовують листя шавлії лікарської, евкаліпту або іншої цинеоловмісної сировини, екстракцію проводять при співвідношенні сировини до екстрагенту 1:3 1:20, фільтрацію та упарювання одержаного рідко (19) UA (11) 89924 (13) C2 (21) a200903856 (22) 21.04.2009 (24) 10.03.2010 (46) 10.03.2010, Бюл.№ 5, 2010 р. (72) КОШОВИЙ ОЛЕГ МИКОЛАЙОВИЧ, ПЕРЕДЕРІЙ ЄВГЕНІЙ ОЛЕКСІЙОВИЧ, КУХТЕНКО ОЛЕКСАНДР СЕРГІЙОВИЧ, ДМИТРІЄВСЬКИЙ ДМИТРО ІВАНОВИЧ, ГУДЗЕНКО ОЛЕКСАНДР ПАВЛОВИЧ, БОНДАР СЕРГІЙ ІВАНОВИЧ, КОВАЛЬОВА АЛЛА МИХАЙЛІВНА, КОМІСАРЕНКО АНДРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ (73) КОМІСАРЕНКО АНДРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ (56) UA 60864 A, 15.10.2003 UA 79383 C2, 11.06.2007 RU 2 032 414 C1, 10.04.1995 JP 56008668 A, 29.01.1981 JP 56020597 A, 26.02.1981 3 89924 го екстракту до 1/20 - 1/22 попереднього об'єму, очищення 4% розчином міді або цинку сульфату, вилучення цільового продукту гексаном або бензин-калошею, упарювання та висушування. Експериментальним шляхом встановлено, що ефективним при здійсненні заявленого способу є використання співвідношення сировини до екстрагенту як 1:3 - 1:20. При цьому, якщо співвідношення менше 1:3, не забезпечується достатня екстракція БАР, що приводить до зниження фармакологічної активності та виходу цільового продукту. Навпаки, якщо співвідношення більше 1:20, це веде до ускладнення та подовження технологічного процесу, час упарювання та енерговитрати значно зростають. Оптимальне співвідношення 1:3 - 1:12 тому, що забезпечується достатня екстракція БАР, час упарювання мінімальний та дозволяє отримувати екстракт на стандартному обладнані. При цьому з сировини екстрагують хлорофіли, терпеноїди, флавоноїди, гідроксикоричні кислоти та інші фенольні сполуки. Згідно з заявленим способом упарювання проводять до 1/20 - 1/22 первинного об'єму. При більшому упарюванні залишок має більшу в'язкість та зменшується його текучість, що ускладнює роботу з екстрактом та збільшує його втрати у процесі виробництва. При меншому упарюванні значно збільшується витрата реагентів та розчинників в процесі очистки. Очистку екстракту в процесі здійснення заявленого способу проводять шляхом розчинення зконцентрованого екстракту в 3-х кратній кількості гексану або бензин-калоші, при додаванні рівної кількості 4% розчину міді або цинку сульфату та перемішуванні протягом 2-12 годин до рН 2-3 водного шару. Далі гексановий шар промивають рівною кількістю води та сушать, наприклад, в вакуум-циркуляторному апараті при зниженому тиску, до густого екстракту та при необхідності доводять спиртом до рідкого. Після очистки екстракт містить терпенові сполуки та порфірини. Заявлений спосіб забезпечує отримання екстракту цинеоловмісної рослинної сировини у вигляді густої, в'язкої, темно-зеленої рідини. 4 Заявлений спосіб здійснюють шляхом екстракції подрібненого листя шавлії лікарської, евкаліпту або іншої цинеоловмісної сировини лікарської 96% спиртом етиловим або етилацетатом при співвідношенні сировина:екстрагент - 1:3 - 1:20, фільтрації отриманого екстракту та упарюванні до 1/20 - 1/22 попереднього об'єму, отриманий кубовий залишок розчиняють у 3-х кратній кількості гексану або бензин-калоші, для очистки додають рівну кількість 4% розчину міді або цинку сульфату, промивають гексановий шар рівною кількістю води та упарюють під вакуумом до густого екстракту. Екстракт є густою, в'язкою рідиною темнозеленого кольору, зі специфічним запахом. Вихід готового продукту 8-12%. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1. 1кг подрібненого шляхом вальцювання до розмірів часток 2,5-3,0мм сухого листя шавлії лікарської екстрагували 3л 96% етилового спирту протягом доби, екстракцію проводили тричі. Одержані екстракти об'єднували (7,9л), упарювали при температурі 85 С під вакуумом у вакуумциркуляційному апараті при розрідженні 690мм рт.ст. до об'єму залишку 0,4л. Кубовий залишок розчиняли в 1,2 літрах гексану, додавали 1,6л 4% розчину сульфату цинку та перемішували протягом 6 годин до рН 2,6 водного шару. Далі гексановий шар промивали рівною кількістю води очищеної (1,2л), водний шар відокремлювали, а гексановий шар упарювали під вакуумом. Вихід готового продукту - 11,3%. Приклад 2. Вивчення антибактеріальної активності екстрактів, отриманих заявленим способом проводили методом дифузії в агар та методом послідовних розведень у рідкому живильному середовищі [2]. Відповідно до рекомендацій ВООЗ для оцінки активності препарату використовували референс-штами Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus 6538 ATCC, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus vulgaris NCTC 4636, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Pseudomonas aeruginosa 9027 ATCC, Basillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans 885/653 АТСС (табл.). Taблиця Результати вивчення антибактеріальної активності 1 % спиртових розчинів екстрактів листя евкаліпту (1) та шавлії лікарської (2), отриманих заявленим способом № з/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Мікроорганізм S. aureus 25923 S. aureus 6538 Е. coli 25922 Proteus vulgaris 4636 В. subtilis 6633 P. aeruginosa 27853 P. aeruginosa 9027 S. pyogenes 2432 Candida albicans 885/653 Очищ. CuSO4 1 2 17* 18 19 19 20 12 14 10 21 19 16 15 17 16 21 19 20 18 Примітка. * - діаметр зони затримки росту мікроорганізму, мм. Екстракти Очищ. ZnSO4 1 2 22 20 22 21 21 15 15 14 22 22 20 16 21 16 23 20 21 20 Очищ. FeSO4 1 2 15 12 15 13 12 12 11 10 16 17 12 12 12 14 15 15 15 14 5 89924 Встановлено, що екстракти виявляють активність по відношенню до штамів Staphylococcus aureus, Basillus subtilis, Candida albicans та Streptococcus pyogenes, тобто екстракт проявляє антимікробну активність по відношенню до грампозитивних та грам-негативних бактерій та грибів. Найбільшу ефективність екстракт має у вигляді 1% спиртового розчину. Крім того встановлено, що екстакти, які очищували при використанні цинку сульфату виявляли більш сильну антимікробну активність до дослідних мікроорганізмів. Таким чином заявлено новий спосіб одержання засобів з антимікробною активністю, який відзначається рядом переваг: 1) простота виконання та можливість здійснення на стандартному обладнані в промислових умовах України; 2) використання як сировини листя шавлії лікарської, яку можна культивувати в кліматичних умовах України та європейської частини СНД, що дозволить використовувати вітчизняну сировину; 3) використання як екстрагент спирт етилового або етилацетат, тобто спосіб доступний та має гнучку технологію; 4) у процесі очистки відмовились від використання токсичного розчинника бензола та проведено його заміну на гексан або бензин-калошу; Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 6 5) доведено можливість та доцільність заміни міді сульфату на цинку сульфат, що робить технологію більш безпечною та підвищує біологічну активність екстракту; 6) при промисловому використанні заявленого способу зменшується використання спирту етилового та, при необхідності, спосіб дозволяє відмовитись від цього розчинника, що дозволить фармацевтичним підприємствам підвищити економічну ефективність виробництва; 7) перспективність використання одержаних екстракту як лікарської субстанції для одержання різних лікарських форм; 8) тривалий термін зберігання засобу, одержаного заявленим способом. Джерела інформації: 1. Пат. № 5242 Україна, МПК А61К35/78. Спосіб одержання хлорофіліпту / В.Л. Надтока, Н.Г. Божко, А.О. Грижко. - № 2753048/SU; Заявл. 25.04.79; Опубл. 28.12.94, Бюл. № 7-1. 2. Доклінічні дослідження лікарських засобів: Метод рекоменд. / За ред. чл.-кор. АМН України О.В. Стефанова. - К.: Здоров'я, 2002. – С.79-95, 292-306. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601