Спосіб одержання засобу з антимікробною та імуностимулюючою активністю

1. Спосіб одержання засобу з антимікробною та імуностимулюючою активністю, що включає 3 27986 4 Згідно з корисною моделлю спосіб здійснюють екстрактивних речовин та суми окислювальних протягом принаймні 12 годин при 3-4 кратній фенолів у екстрактах, одержаних при різному екстракції сировини. співвідношенні сировини до екстрагенту наведені у Лопух великий застосовують як у народній табл.2. медицині, так і у сучасній фітотерапії. Як лікарську сировину для виготовлення лікувальних засобів використовують звичайно корінь лопуха великого. Вибір співвідношення сировини до екс Згідно з одними джерелами інформації [3] настої з кореня лопуха великого мають діуретичну, потогінну та противиразкову дію. Рекомендовано Вміст сполук у перера № їх застосування переважно при грипі та застудних Співвідношення сировина-екстрагент екстрактивні речови п/п захворюваннях. За іншими джерелами [4] настої з листя корін кореня лопуха великого проявляють діуретичну та 1 1:10 34,14 33,7 жовчогінну дію. 2 1:12 40,03 37,6 Авторами виявлено антимікробну активність 3 1:15 40,71 38,0 по відношенню до широкого спектру 4 1:20 41.29 38,9 мікроорганізмів та імуностимулюючу активність засобів не тільки з кореня, але й з нетривіальної Примітка: результати є середніми 5-х визначень. сировини - листя лопуха великого, одержаних шляхом екстракції 40% спиртом етиловим згідно з Дані таблиці 2 свідчать, що оптимальним є заявленим способом. співвідношення сировини до екстрагенту як 1:12Лопух великий широко росте на всій території 1:20. Зменшення співвідношення призводить до України і складає достатню сировинну базу для різкого зниження вмісту як екстрактивних речовин, здійснення заявленого способу. так і суми окислювальних фенолів у екстрактах, Експериментальним шляхом в якості крім того погіршується процес екстракції до екстрагенту було вибрано спирт етиловий за повного поглинання екстрагенту сировиною. здатністю вичерпно екстрагувати біологічно Збільшення співвідношення економічно активні речовини з сировини лопуха великого, крім недоцільне внаслідок незначного збільшення того, він належить до найпоширеніших вмісту екстрагованих речовин при надмірних екстрагентів, які використовуються у фітохімічних витратах екстрагенту. виробництвах. Оптимальна 40% концентрація Спосіб здійснюють наступним чином: екстрагенту вибрана дослідним шляхом. подрібнені листя або корінь лопуха великого Ефективність екстрагенту у різних концентраціях завантажують в екстрактор, заливають 40% оцінювали за наступними критеріями: вміст спиртом етиловим до дзеркала, екстрагують екстрактивних речовин та суми окислювальних протягом принаймні 12 години, екстракт зливають фенолів. Дані експерименту приведені в табл.1. у прийомник. Екстракцію однієї порції сировини повторюють принаймні ще двічі. Отримані Таблиця 1 екстракти (загальне співвідношення сировина:екстрагент 1:12-1:20) об'єднують, Вибір оптимального екстрагенту для отримання засобу за заявленим способом фільтрують та упарюють до густого екстракту. Екстракцію проводять при кімнатній температурі. Вихід екстрактивних речовин, % (в Експериментальне доведено, що для Вихід суми окислювальних фенолів, % (в перерахунку на абсолютно суху № Вид вичерпної екстракції абсолютно суху сировину) перерахунку на з сировини комплексу сировину) п/п екстрагенту біологічно активних речовин із заданим спектром листя корінь фармакологічної дії доцільно корінь порцію листя одну 1 вода 38,00 65,72 сировини піддавати екстракції 3-4 3,79 новими 2,11 рази 2 10%-спирт 48,53 59,79 порціями екстрагенту при заявленому сумарному 4,24 4,14 5 20%-спирт 34,79 61,37 співвідношенні3.12сировини до 4,64 екстрагенту. 4 30%-спирт 35,73 61,74 Об'єднання одержаних екстрактів4,71 4,46 забезпечує 5 40%-спирт 40,49 62,74 збільшення кількісного виходу та якості готового 5,93 4,99 6 50%-спирт 32,30 56,59 продукту при зменшенні витрат вихідної сировини 2,70 4,80 7 60%-спирт 38,37 46,15 за рахунок її вичерпної екстракції. 2,81 5,08 Вихід цільового продукту з листя лопуха 8 70%-спирт 28,70 38,63 3,36 4,80 9 80%-спирт 30,40 28,96 великого складає 36-41% від повітряно-сухої маси 3,57 5,03 10 96%-спирт 30,77 9,47 сировини з втратою маси при висушуванні 22-24%, 2,71 2,19 а з кореня - 33-38% з втратою маси при висушуванні - 22-23%. Примітка: результати є середніми 5-х визначень. Характеристика кінцевого продукту, одержаного за заявленим способом: За даними табл.1 використання в якості Густий екстракт листя лопуха великого - темно екстрагенту спирту етилового 40% концентрації коричнева густа маса з сильним кислуватим найоптимальніше з точки зору вмісту як запахом, гірко-кисла на смак. Легко розчинний у екстрактивних речовин так і суми окислювальних гарячій воді, розчинний у холодній воді та не фенолів. розчинний в 96% спирті етиловому та хлороформі. Співвідношення сировина-екстрагент також Густий екстракт кореня лопуха великого було вибрано експериментальним шляхом. Вміст коричнева густа маса з легким приємним 5 27986 6 специфічним запахом, терпкувато-солодко-кисла Приклад 4. Дослідження антимікробної на смак. Легко розчинний у гарячій воді, розчинний активності засобів у формі густих екстрактів листя у холодній воді та не розчинний в 96% спирті та кореня лопуха великого, одержаних за етиловому та хлороформі. заявленим способом, проводились методом Спосіб ілюструється прикладами. дифузії в агар (метод „колодязів") з використанням Приклад 1. 5кг подрібненого та просіяного двошарової заливки чашок. Як тест-культури крізь сито №1000 листя лопуха великого використовували музейні штами бактерій та завантажують у екстрактор, заливають 57л 40% грибів: Staphylococcus aureus АТСС 25923, АТСС спирту етилового (з врахуванням коефіцієнту 6538, Echerichia coli ATCC 25922, Bacillus subtillis поглинання екстрагенту), екстрагують протягом 12 ATCC 6633, Candida albicans ATCC 885/653, годин, екстракт зливають в прийомник. Екстракцію Streptococcus pyogenes Disk-1 та клінічні штами - 2 проводять ще двічі порціями по 20л 40%-спирту штами Staphylococcus aureus, Staphylococcus етилового. Отримані екстракти (загальне epidermidis, 2 штами Streptococcus pyogenes, співвідношення сировина-естрагент 1:12) в обсязі Echerichia coli, Candida krosera. 57л об'єднують, фільтрують та упарюють до густої В якості критерію оцінки антимікробної консистенції (вміст вологи 22,42%). Екстракцію активності обрано діаметр зон затримки росту здійснюють настоюванням при кімнатній мікроорганізмів під впливом досліджуваних температурі. засобів. Результати дослідження приведені в Вихід цільового продукту складає 40,40% від табл.3. повітряно-сухої маси сировини. Аналогічним чином екстракції піддають 5кг подрібненого кореня лопуха. Одержують 58л Вивчення антимікробної активності засобів у формі густих екстрактів об'єднаного екстракту, який фільтрують та упарюють до густої консистенції (вміст вологи заявленим способом, по відношенню до музейних та клінічних шт 22,87%). Вихід цільового продукту складає 37,41% від Діаметри зон затримки рост повітряно-сухої маси сировини. № п/п Вид мікроорганізму густого екстракту листя лопуха, Приклад 2. По 5кг подрібнених та просіяних 200мкг/мл крізь сито №1000 листя та кореня лопуха великого Музейні штами мікроорганізмів окремо завантажують у різні екстрактори, листя 1 S.aureus ATCC 25923 14,80 заливають 72л 40% спирту етилового (з 2 S.aureus ATCC 6538 14,80 врахуванням коефіцієнту поглинання екстрагенту) 3 E.coli ATCC 25922 13,60 а корінь 65л 40% спирту етилового (з врахуванням 4 В.subtillis ATCC 6633 12,40 коефіцієнту поглинання екстрагенту), екстрагують 5 С.albicans ATCC 85/653 13,80 протягом 12 годин, екстракти зливають в 6 S.pyogenes Dick-1 12,40 прийомники. Екстракцію проводять аналогічно Клінічні штами мікроорганізмів двічі порціями по 20л 40%-спирту етилового. 7 S.aureus 13,80 Отримані екстракти (загальне співвідношення 8 S.aureus 16,20 сировина-екстрагент 1:15) у обсязі 71л для листя 9 S.epidermidis 22,80 та 73л для кореня об'єднують, фільтрують і 10 S.pyogenes 13,80 упарюють до густої консистенції (вміст вологи 11 S.pyogenes 17,80 22,14% для листя та 22,58% для кореня). 12 E.coli 12,20 Екстракцію здійснюють настоюванням при 13 C.krosera 12,20 кімнатній температурі. Вихід цільового продукту складає для листя Примітка: - затримка росту мікроорганізмів не виявлена; результа 41,10% від маси повітряно-сухої сировини, для кореня - 38,25%. Аналіз даних табл.3 свідчить, що густі Приклад 3. По 5кг подрібнених та просіяних екстракти листя та кореня лопуха великого, крізь сито №1000 листя і корінь лопуха великого одержані за заявленим способом, виявили досить окремо завантажують у екстрактори, заливають виражену антимікробну активність по відношенню 77л - листя (з врахуванням коефіцієнту до музейних та клінічних штамів мікроорганізмів, а поглинання екстрагенту) та 70л - корінь (з її спектр достатньо широкий. Причому засіб з врахуванням коефіцієнту поглинання екстрагенту) листя лопуха великого проявляє антимікробну 40% спирту етилового, екстрагують протягом 12 активність дещо вищу та по відношенню до годин, екстракти зливають у прийомники. більшого переліку патогенних мікроорганізмів, ніж Екстракцію проводять ще двічі порціями по 30л засіб з кореня лопуха. Найбільш виражена 40%-спирту етилового. Отримані екстракти антимікробна активність густого екстракту листя (загальне співвідношення сировина-екстрагент лопуха великого спостерігалась по відношенню до 1:20) в обсязі для листя 95л та для кореня 97л S.epidermidis, S.pyogenes та S.aureus, а густого об'єднують, фільтрують, упарюють у вакуумі до екстракту кореня лопуха великого - до густої консистенції (вміст вологи 22,36% для листя S.epidermidis та B.subtillis ATCC 6633. та 22,52% для кореня). Екстракцію здійснюють Приклад 5. Дослідження впливу засобів у настоюванням при кімнатній температурі. формі густих екстрактів листя і кореня лопуха Вихід цільового продукту складає для листя великого, одержаних за заявленим способом, на 41,87% від маси повітряно-сухої сировини, для імунну систему проводили за методом Ткореня - 39,05%. 7 27986 8 розеткоутворення, який оснований на простий у виконанні, передбачає застосування несподіваному розеткоуворенні лімфоцитів екстрагенту, дозволеного для використання у людини з еритроцитами барана. Гепаризовану хіміко-фармацевтичному виробництві. Спосіб кров з ліктьової вени, розбавляли розчином екологічно безпечний і може бути здійснений в Рінгера в співвідношенні 1:2, наслоювали на промислових умовах з використанням градієнт плотності фікол-велографін (1,077) та стандартного обладнання. центрифугували 15хв при 3000об/хв. Отримане В результаті здійснення способу одержують лімфоцитарне кільце переносили в мірну засіб з вираженою антимікробною та центрифужну пробірку і відмивали фізичним імуностимулюючою активністю при використанні в розчином - отримували чисту суміш лімфоцитів якості сировини як листя, так і кореня лопуха крові людини. великого. Одержаний засіб практично Вплив густих екстрактів листя та кореня нетоксичний, позбавлений алергенної дії. Він може лопуха великого на імунітет вивчали в бути застосований як діюча речовина лікарських концентраціях 1,25%; 0,62%; 0,5%; 0,3%. В якості засобів у різних лікарських формах для препаратів порівняння використовували рекутан профілактики і лікування захворювань, що та настоянку ехінацеї. передбачають застосування антимікробних До 0,1мл чистої суміші лімфоцитів додавали засобів та зміцнення імунної системи. 0,02мл розведених екстрактів та препаратів Джерела інформації: порівняння, інкубували протягом 15хв при 1. Патент 76063, Україна, МПК (2006) температурі 37°С. Потім додавали 0,1мл 1% А61К36/185, А61Р31/00, заявл.04.01.2005, суміші еритроцитів барана, інкубували протягом опубл.15.06.2006, Бюл. №6. 10хв при температурі 37°С. Зупинку реакції 2. Патент 77347, Україна, МПК (2006) проводили шляхом центрифугування протягом 2хв А61К36/185, А61К127/00 (2006.01), А61Р29/00, при 1500 об/хв. Після чого під мікроскопом А61Р31/00, А61Р13/00, заявл.26.04.2005, підраховували кількість лімфоцитів та опубл.15.11.2006, Бюл. №11. розеткоутворюючих клітин (Т-РУК) (лімфоцитів, що 3. Современная фитотерапия. / Под ред. В. приєднали 3 і більш еритроцитів). Результати Петкова. - София, «Медицина и физкультура», вивчення впливу засобів у формі густих екстрактів 1988. - С.315-316. листя та кореня лопуха великого, одержаних за 4. Фитотерапия в клинике внутренних заявленим способом, на клітинний ланцюг імунної болезней. // Б.А.Самура, В.Ф. Черных, И.П.Банный системи приведені в табл.4. и др. // X.: Изд-во НФаУ, «Золотые страницы», Аналіз даних табл.4 свідчить, що густий 2003. - с.336. екстракт листя лопуха великого у концентрації 0,3% та густий екстракт кореня у концентрації 0,5% більш впливали на клітинну ланку імунної системи, ніж препарати порівняння - рекутан та настоянка ехінацеї. Також густий екстракт листя в концентрації 0,5% показав кращі результати з Трозеткоутворення, ніж рекутан та незначно поступався ефекту настоянки ехінацеї, а густий екстракт кореня в концентрації 1,25-0,62% впливав на клітинний імунітет на рівні референспреператів. Таблиця 4 Вивчення впливу засобів у формі густих екстрактів листя та кореня лопуха великого, одержаних за заявленим способом, на клітинний ланцюг імунної системи № п/п 1 2 Субстанції, що вивчалися густий екстракт листя лопуха густий екстракт кореня лопуха Контроль Т-РУК (%) Концентрації експериментальних проб Рекутан Н-ка ехінацеї досліджуваних екстрактів, % 1,25 0,62 0,50 0,30 64,00 67,67 70,74 63,40 65,40 70,70 72,18 58,68 63,38 65,48 65,20 65,36 66,28 62,16 Примітка: результати є середніми 5-х визначень. Дані проведених експериментів свідчать про наявність вираженої імуностимулюючої дії у засобів, одержаних за заявленим способом. Таким чином, заявлено спосіб одержання засобу з антимікробною та імуностимулюючою дією з листя або кореня лопуха великого. Спосіб