Спосіб визначення титру сполучення антибіотиків

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения титра сочетания антибиотиков, предусматривающий титрование препаратов антибиотиков методом двухкратных серийных разведений. При этом титрование осуществляется безотносительно его очередности, т.е. вначале определяется титр каждого из антибиотиков, а затем титр сочетания. Таким образом метод является только количественным, т.к. не позволяет получить данные об изменении титра сочетания при изменении очередности титрования, что в свою очередь не позволяет сделать вывод о предпочтительном порядке введения антибиотиков больному, хотя такой порядок может иметь существенное значение (1). В основу изобретения поставлена задача разработать такой способ определения титра сочетания антибиотиков, по результатам которого можно было бы определить порядок введения антибиотиков больному. Поставленная задача решается тем, что в способе определения титра сочетания антибиотиков, предусматривающем титрование препаратов антибиотиков методом двухкратных серийных разведений, согласно изобретению титрование осуществляют на фоновой суббактериостатической дозе поочередно каждого из антибиотиков. Таким образом при получении различных значений титра сочетания порядок введения будет определять большее. Другими словами больному антибиотики должны быть введены так: сначала тот антибиотик, на фоновой суббактериостатической дозе которого было полученсбольшее значение титра сочетания. Кроме того для обеспечения ускоренного осуществления способа и его упрощения согласно изобретению в качестве препаратов антибиотиков используют стандартные диагностические диски с антибиотиками. Пример конкретного выполнения способа. Берут два ряда пробирок, первый ряд -20 пробирок, второй ряд - в зависимости от активности препарата, используемого в сочетании в отношении испытуемой культуры, которая сенсибилизирует микроорганизм. Первая пробирка первого ряда содержит 2 мл мясо-пептонного бульона (МПБ) либо другой среды, остальные пробирки по 1 мл питательной среды. В первую пробирку ' первого ряда кладут 2 диска с веществом, к которому сенсибилизируется культура, в последующие 17 пробирок кладут по одному диску с тем же химиотерапевтическим веществом. В первую пробирку кладут 1 диск с химиотерапевтическим веществом, который сенсибилизирует культуру, выдерживают в термостате при температуре 37°С 10-15 минут, взбалтывают, переносят 1 мл из первой пробирки во вторую, взбалтывают, из второй пробирки 1 мл в третью, взбалтывают и т.д. до 16-й пробирки, из 16-й пробирки 1 мл удаляют, 17-я, 18-я, 19-я и 20-я пробирки -контрольные. В 17-й пробирке имеется 1 диск с веществом к которому сенсибилизируется культура, в 18-ой пробирке имеется 1 диск с тем же веществом, в 19-ю кладут 1 диск с веществом, которое сенсибилизирует культуру, 20-я пробирка - контроль роста культуры. Во все пробирки наливают по 0,1 мл либо 2 капли пастеровской пипеткой взвеси суточной агаровой культуры исследуемого микроорганизма, эмульгированного в изотоническом растворе хлорида натрия. Разведение делают по оптическому стандарту- 1 млрд микробных тел в 1 мл с последующим разведением 0,1 мл в 5 мл изотонического раствора или бульона. Получается взвесь 20 млн микробных тел в 1 мл. В каждую пробирку, начиная с последней, закапывают по 0,1 мл либо 2 капли пастеровской пипеткой приготовленной взвеси, кроме 18-й и 19-й. 17-я - контроль суббактериостатической дозы вещества, 18-я и 19-я - контроль на стерильность дисков, 20-я - контроль роста культуры. Во втором ряду пробирок титруют вещество, которое входит в сочетание и сенсибилизирует культуру. Берут ряд пробирок, первая содержит 2 мл, остальные - по одному мл. Количество пробирок берется по необходимости связанной с чувствительностью культуры к препарату. В первую пробирку кладут диск с веществом, которое сенсибилизирует культуру, выдерживает 10-15 мим в термостате, взбалтывают и 1 мл переносят из пробирки в пробирку до предпоследней, откуда 1 мл удаляют, закапывают культуру по 0,1 мл либо 2 капли пастеровской пипеткой во все пробирки, начиная с последней. Все пробирки со штативом кладут в термостат на 18-24 часа, вынимают и учитывают исследования по разнице титра сочетания и титра вещества, которое сенсибилизирует культуру. Если препарат, входящий в сочетание, к которому сенсибилизируется культура, обладает значительным воздействием на нее, то для выяснения титра сочетания и входящих в сочетание ингредиентов также берутдва ряда пробирок: в первый ряд - 20 пробирок, второй - в зависимости от активности химиотерапевтического вещества, входящее в сочетание которое сенсибилизирует культуру. Суббактериостатическую дозу вещества, к которому сенсибилизируется культура определяют накануне. Определение суббактериостатической дозы вещества, к которому сенсибилизируется культура. В штатив помещают 10-15 пробирок. Первая пробирка содержит 2 мл питательной среды, остальные - по 1 мл. В первую пробирку кладут 1 диск с химиотерапевтическим веществом, к которому сенсибилизируется культура, к примеру, тетрациклин. Диск тетрациклина содержит 30 микрограмм активного вещества. Концентрация в первой пробирке - 15 мкг/мл ставят в термостат на 10-15 минут, вынимают, встряхивают; из первой пробирки 1 мл переносят во вторую, встряхивают, из второй 1 мл переносят в 3-ю, встряхивают и т.д. Из предпоследней 1 мл удаляют. Последняя пробирка - контроль роста культуры. Во все пробирки закапывают по 2 капли пастеровской пипеткой либо 0,1 мл градуированной пипеткой культуру, содержащую 20 млн микробных тел в 1 мл, ставят в термостат на 18-24 часа, на следующий день учитывают. Выбирают концентрацию, которая дает задержку роста культуры на ++. Это является суббактериостатической рабочей дозой для основного исследования. В 50 мл флаконе получают суббактериостатическую концентрацию вещества к которому сенсибилизируется культура и разливают по пробиркам: 3 пробирки по 2 мл и 20 пробирок по 1 мл. Пробирки в штативе помещают в термостат на сутки. Если часть пробирок проросли, их заменяют не проросшими. Еще разливают 20 пробирок по 1 мл и 3 пробирки по 2 мл той же питательной среды, но без химиотерапёвтических веществ и также помещают в термостат на сутки. Определение титра сочетания химиотерапёвтических веществ. Берут 20 пробирок. Первая пробирка содержит 2 мл суббактериостатической дозы вещества, к которому сенсибилизируется культура. Остальные по 1 мл вещества, к которому сенсибилизируется культура, кроме последних двух пробирок они содержат ту же среду без химиотерапевтических веществ. В первую пробирку кладут 1 диск с веществом, которое сенсибилизирует культуру. Первую пробирку помещают в термостат на 10-15 мин,, вынимают из термостата и встряхивают пробирку, из 1-й пробирки 1 мл переносят во вторую, встряхивают, из 2-й пробирки 1 мл переносят в 3-ю, встряхивают и т.д. до 16-й пробирки. Из 16-й пробирки 1 мл удаляют. 17-я и 18-я пробирки содержат суббактериостатическую дозу вещества, к которому сенсибилизируется культура. 17-я пробирка является контролем суббактериостатической концентрации вещества, к которому сенсибилизируется культура. Она должна указывать, что разведение суббактериостатической концентрации в исследовании подобраны правильно. 18я пробирка является контролем на стерильность суббактериостатической концентрации. 19-я пробирка контроль на стерильность диска с веществом, которое сенсибилизирует культуру. 20-я - контроль роста культуры. Во все пробирки, кроме 18-й и 19-й вводят 0,1 градуированной пипеткой, либо 2 капли пастеровской пипеткой взвесь суточной агаровой культуры, приготовленной по оптическому стандарту, содержащие 20 млн микробных тел в 1 мл. Культуру можно разводить 100 тыс. микробных тел в 1 мл и более. С увеличением разведения культуры исследование становится более чувствительным. Во втором ряду пробирок титруют вещество, которое входит в сочетание и сенсибилизирует культуру. Берут ряд пробирок, первая содержит 2 мл. остальные - по одному мл. Количество пробирок берется по необходимости связанной с чувствительностью культуры к препарату. В первую пробирку кладут диск с веществом, которое сенсибилизирует культуру, выдерживают 10-15 мин в термостате, взбалтывают и 1 мл переносят из пробирки в пробирку до предпоследней, откуда 1 мл удаляют, закапывают культуру по 0,1 мл, либо 2 капли пастеровской пипеткой во все пробирки, начиная с последней. Все пробирки со штативом кладут в термостат на 18-24 часа, вынимают и учитывают исследования по разнице титра сочетания и титра сочетания и титра вещества, которое сенсибилизирует культуру. Если титровать не на фоновой дозе химиотерапевтического вещества к которому сенсибилизируется культура, а на фоне того вещества которое сенсибилизирует культуру, то наблюдается ослабление действия сочетания. Благодаря способу определения титра двух химиотерапевтических веществ, у которых при совместном воздействии на культуру микроорганизмов обнаруживается явление сенсибилизации одним химиотерапевтическим веществом к другому, выявляется новая закономерность повышения чувствительности ранее устойчивых культур к химиотерапевтическим веществам, что противоречит литературным данным в то же время является безошибочным. Таким образом, создается возможность лечить больных людей, животных и растений веществами, к которым их культуры были устойчивыми. Лечение животных и консервация продуктов питания, не представляет опасность передачи устойчивых форм микроорганизмов людям.