Спосіб діагностики кліщового енцефаліту

Спосіб діагностики кліщового енцефаліту шляхом виявлення антитіл в реакції зв'язування комплементу, який відрізняється тим, що як діагностикум використовують антиген, приготований методом сахарозо-ацетонової екстракції із вірусу кліщового енцефаліту штаму №2288, отриманого у вигляді мозкової суспензії лабораторних мишей, завдяки чому має більшу чутливість та специфічність порівняно з аналогічними методами, в яких застосовуються діагностикуми, приготовані з інших штамів даного вірусу. (19) (21) 20031110452 (22) 20.11.2003 (24) 15.11.2004 (46) 15.11.2004, Бюл. № 11, 2004 р. (72) Лозинський Ігор Миколайович, Білецька Галина Вацлавівна, Козловський Михайло Михайлович, Семенишин Оксана Богданівна, Друль Оксана Стефанівна, Федорук Володимир Ілліч (73) ЛЬВІВСЬКИЙ НАУКОВО-ДОСЛІДНИЙ ІНСТИТУТ ЕПІДЕМІОЛОГІЇ ТА ГІГІЄНИ МІНІСТЕРСТВА ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ, Лозинський Ігор Миколайович 3 71174 4 здійснюються наступним чином. вісину через 5-10хв. Дію бетапропіолактону нейтПриклад пасажування штаму. Безпородних біралізують 14% розчином гіпосульфіту натрію (на лих мишей вагою 6-8 грамів заражають у мозок по 10мл антигену додають 1,2мл 14% розчину гіпосу0,03мл вірусною суспензією штаму №2288. При льфіту). появі виражених паралічів на 4-5 добу мишей заОтримані цим методом антигени штамів бивають за правилами евтаназії, добувають асеп№2288 і Соф'їн, після контролю на залишкову інтично мозок і готують 10% завісину мозкової ткафекційність і нешкідливість для білих безпородних нини шляхом розтирання мозку у фар форовій мишей, сумісно із комерційним антигеном кліщовоступці із додаванням фізіологічного розчину. го енцефаліту виробництва Томського НПО "ВіріОтриману завісину мозкової тканини центрифугуон" (С.81, К.1751) використовували в РЗК для поють при 1000-1500об/хв протягом 10хв. Рідину, що рівняльного титрування сироваток 343 гарячкових утворилась над осадом, використовують для захворих і реконвалесцентів, одержаних в 1995 році раження наступної партії мишей, інфікований моз активного природного вогнища кліщового енцезок котрих використовується для приготування фаліту в Ра тнівському районі Волинської області. антигену. Постановку РЗК здійснювали загально прийнятим Приклад приготування антигену методом саметодом [6]. Результати титрування зведено у харозо-ацетонової екстракції. Із отриманої інфікотаблицю. ваної тканини мозку мишей на 8,5% охолодженому Як видно із таблиці 1, при виявленні сероконрозчині сахарози готують 20% завісину, додаючи версій у хворих і перехворілих на кліщовий енцена 1 мозок 0,4мл 5% розчину сахарози. Тричі завіфаліт з природного вогнища цієї інфекції в Волинсину обробляють охолодженим до -15°С хімічно ській області, сахарозо-ацетоновий антиген, чистим ацетоном: двічі із розрахунку 1 об'єм завіприготований із штаму №2288, виявився значно сини на 20 об'ємів ацетону, а третій раз невелику, чутливіший і специфічніший ніж сахарозодовільну кількість. Обробку ацетоном проводять ацетоновий антиген штаму Соф'їн та комерційний шляхом додавання по краплях підготовленої мозантиген кліщового енцефаліту виробництва Томкової суспензії в центрифужні стакани з охолоджеського НПО "Віріон". Він виявляє у вищому відсотним ацетоном при безперервному помішуванні ку число серопозитивних до вірусу кліщового енскляною паличкою. Кожного разу після обробки цефаліту осіб (83,7% проти 68,2 - 71,7%) і у вищих ацетоном суміш центрифугують на холоді 10хв. титрах (1:58,7 проти 1:33,8 - 1:34,1) комплементзпри 1800об/хв і надосадкову рідину видаляють. в'язуючі антитіла. Антиген міститься в осаді, котрий висушують під Таким чином, штам №2288 вірусу кліщового вакуумом до перетворення його в сухий порошок. енцефаліту, відповідаючи регламентованим параУтворений осад розчиняють боратним буферметрам відбору штамів-кандидатів для виробництним розчином рН9,0 до об'єму вихідної завісини ва імунобіологічних препаратів, забезпечує вищий мозку, ретельно розмішують скляною паличкою, діагностичний ефект порівняно з аналогічним ефезалишають на 18-20год. при +4°С для повної гідктом прототипних штамів. ратації, після чого центрифугують на холоді (-4°С) Використання цього штаму для приготування 1год. при 10000об/хв. Антигеном є рідина, що сахарозо-ацетонового діагностикуму дозволяє утворилась над осадом. Для інактивації антиген підвищити антигенну і біологічну активність діагнообробляють бетапропіолактоном 1:1000 протягом стикуму та підвищити достовірність діагностики 30хв. при кімнатній температурі, перемішуючи зазахворювань кліщовим енцефалітом в Україні. Таблиця 1 Результати титр ування в РЗК сироваток крові хворих і реконвалесцентів із Волинської області з антигенами різних штамів вірусу кліщового енцефаліту Сироватки крові Хворих на кліщовий енцефаліт та реконвалесцентів (343 проби) №2288 Абс % 287 83,7 Число серопозитивних і титри антитіл до антигенів: Соф'їн Комерційний Χ Χ Χ Абс % Абс % M±m M±m M±m 58,7+2,8 234 68,2 33,8+2,5 246 71,7 34,1+2,7 Примітка: X - середньоарифметична обернених значень титрів антитіл. Джерела інформації: 1. Виноград И.А. Арбовирусы в Украинской ССР и их медико-биологическое значение: Дис. дра мед. наук. -Львов, 1983. -505с. 2. Лозинський І.М., Виноград І.А. Арбовіруси та арбовірусні інфекції у лісостеповій зоні України// Мікробіол. журнал. -1998. -т.60, №2. -С.49-60. 3. Штам вірусу кліщового енцефаліту Flavivirus encephalitidem ixodicum Ν2288 для виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів. /І.М.Лозинський, Г.В.Білецька., М.М.Козловський, Є.Г.Рогочий. // Позитивне рішення Укрпатенту від 5 71174 6 23.06.2003р. про видачу деклараційного патенту 5. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. на винахід по заявці 2002119388. //Арбовирусы и арбовирусные инфекции. -М.: Ме4. Етіологічна та еколого-епідеміологічна хадицина, -1989. -335с. рактеристика арбовірусних інфекцій в Україні. 6. Арбовирусы (методы лабораторных и поле/І.А.Виноград, І.М.Лозинський, Г.В.Білецька та ін. // вых исследований). Под ред. С.Я. Гайдамович. Вісник Сумського Державного Університету, -2001. М.: Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского -№11. -с.41-48. АМН СССР, -1986. -С.140-146. Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601