Спосіб визначення атерогенного потенціалу крові

Спосіб визначення атерогенного потенціалу крові, що включає взяття 5мл крові, отримання сироватки, напластовування фізіологічного розчину, центрифугування, видалення сироватки з-під сольового шару, додавання до неї преципітанту, визначення оптичної щільності отриманої суміші, центрифугування, видалення надосадної рідини, отримання сумарної фракції ліпопротеїдів низької та дуже низької щільності (атерогенних ліпопротеїдів) та розрахунок результатів, який відрізняється тим, що фенілгідразони визначаються в атерогенних ліпопротеїдах, для чого на отриману сироватку напластовують 0,6мл фізіологічного розчину, центрифугують 15 хвилин при 8000g, визначають оптичну щільність виділеної з-під сольового розчину сироватки і додають до неї преципітант у співвідношенні 1:10, визначають оптичну щільність отриманого розчину, через 10-15 хвилин A 2 71717 1 3 71717 4 на мілілітр сироватки крові або на кількість ліпопдіагностики та лікування прогресуючого атероротеїдів низької та дуже низької щільності. склерозу. Кількість гідроперекисів ліпідів низької та дуже В основу винаходу поставлене завдання рознизької щільності оцінюють згідно того, що в нормі робки способу визначення атерогенного потенціавміст гідроперекисів ліпідів в ліпопротеїдах низької лу крові, в якому шляхом зміни дій, режимів та та дуже низької щільності є 1,08-5,40 Д232/мл крозастосовуваних речовин забезпечується зменві, в той час, коли у хворих на прогресуючий атешення використання сироватки крові та підвищенросклероз цей показник вищий за 5,40 Д232/мл ня специфічності та точності визначення атерокрові. генного потенціалу крові. Однак цьому способу притаманні такі недоліДля цього спосіб передбачає отримання з 2мл ки: по-перше, використовується значна кількість сироватки крові осаду, який містить ліпопротеїди сироватки крові; по-друге, визначається вміст тільнизької та дуже низької щільності, тобто атерогенки гідроперекисів ліпідів без урахування змін ліпоні ліпопротеїди, і в цьому осаді визначення кількопротеїдної молекули в цілому, проте як останнє сті модифікованих вільнорадикальними процесами відіграє важливу роль в придбанні ліпопротеїдами білків - фенілгідразонів. Новим в способі є те, що атерогенних властивостей. Дані обставини ведуть фенілгідразони визначаються в атерогенних ліподо зниження точності, та тим самим до зниження протеїдах низької та дуже низької щільності, внаефективності діагностики та лікування ішемічної слідок чого підвищується специфічність, точність хвороби серця. діагностики і тим самим - ефективність лікування Найбільш близьким по технічній суті способу, хворих на ішемічну хворобу серця (коронарний що пропонується є спосіб "Метод определения атеросклероз). окислительной модификации белков сыворотки Спосіб пояснюється наступним чином: крови человека (см. статью Дубинина Е.Е., БурмиЗ 5мл крові, взятої натщесерце, отримують стров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.Г. Вопросы ме2мл сироватки, на яку шприцем напластовують дицинской химии, М., Медицина, 1995г., С.24-26.)", 0,6мл фізіологічного розчину та центрифугують що полягає в тому, що для аналізу використову15хв. при 8000g. Сироватку обережно шприцем ють 0,1мл сироватки крові людини. Осадження видаляють з-під сільового шару та в ній визначабілків сироватки крові здійснюється за допомогою ють кількість ліпопротеїдів низької та дуже низької (0,9мл) 20% розчину трихлороцтової кислоти щільності. Для цього вимірюють оптичну щільність (ТХО). До денатурованих білків додають рівний сироватки при довжині хвилі 700нм в кюветі 0,5см об'єм (1мл) 0,1М 2,4-ДФГ (2,4проти води (д1). Додають до неї преципітант, надінітрофенілгідразин), який розчинено в 2Н НСІ і приклад фірми "Cormay", у співвідношенні 1:10, та етиловому спирті, і утримують в киплячій бані до через 4 хвилини визначають оптичну щільність в повного розчинення 2,4-ДФГ. В контрольну пробу тих же умовах проти води (д2). Різниця д2-д1 (Д1) додають замість 2,4-ДФГ рівний об'єм 2Н НСl. Інвизначає оптичну щільність ліпопротеїдів низької кубацію здійснюють при кімнатній температурі та дуже низької щільності. Потім вимірюваний розпротягом 1г. Потім проби центрифугують при чин центрифугують 15 хвилин при 4000g. Надоса6000g протягом 15-20хв. Осад промивають 3 рази дну рідину зливають. В осад додають рівний об'єм розчином етанол-етилацетат (1:1), центрифугують (1мл) 0,1М 2,4-ДФГ (2,4-дінітрофенілгідразин, який при 6000g протягом 15-20хв., для екстракції ліпідів розчинено в 2Н НСl і етиловому спирті, і утримуі 2,4-ДФГ, який не реагував з карбонільними грують в киплячій бані до повного розчинення 2,4пами окислених білків. Отриманий осад підсушуДФГ). В контрольну пробу додають замість 2,4ють з метою усунення розчинника етанолДФГ рівний об'єм 2Н НСl. Інкубацію здійснюють етилацетату і розчиняють в 8М розчині сечовини. при кімнатній температурі протягом 1г. Потім проСечовину додають до осаду в об'ємі 4мл і утримуби центрифугують при 6000g протягом 15-20хв. ють в киплячій бані протягом 5хв. до повного розОсад промивають три рази розчином етанолчинення. Оптичну щільність дінітрофенілгідразоетилацетат (1:1), центрифугують при 6000g протянів, що утворилися, реєструють на гом 15-20хв., для екстракції ліпідів і 2,4-ДФГ, який спектрофотометрі при довжині хвилі 370нм. не реагував з карбонільними групами окислених Результат визначення фенілгідразонів дають в білків. Отриманий осад підсушують з метою усуодиницях екстинції на мл сироватки крові. Кільнення розчинника етанол-етилацетату і розчинякість фенілгідразонів оцінюють згідно того, що в ють в 8 М розчині сечовини. Сечовину додають до нормі вміст цього показника в крові людини є 3,5осаду в об'ємі 4мл і утримують в киплячій бані 5,5 Д370/мл крові, в той час, коли у хвори х на пропротягом 5хв. до повного розчинення. Оптичну гресуючий атеросклероз цей показник вищий за щільність дінітрофенілгідразонів (X1), що утвори5,5 Д370/мл крові. лися, реєструють на спектрофотометрі при довжиОднак цьому способу притаманні наступні нені хвилі 370нм. доліки: цей спосіб не є специфічним для визнаРезультат визначення фенілгідразонів дають в чення атерогенного потенціалу крові, тому, що одиницях екстинції на оптичну щільність ліпопровизначається загальний вміст продуктів вільноратеїдів низької та дуже низької щільності. дикального окислення білків сироватки крові - феХ1/Д1 нілгідразонів, який залежить від цілого ряду різних де: патологічних чинників і притаманний багатьом заX1 - оптична щільність фенілгідразонів; хворюванням. Дані обставини ведуть до зниження Д1 - оптична щільність ліпопротеїдів низької та точності, та тим самим до зниження ефективності дуже низької щільності. 5 71717 6 Кількість фенілгідразонів оцінюють згідно того, Хворий Д., 55 років, діагноз: ішемічна хвороба що в нормі вміст цього показника в крові людини є серця, стенокардія напрягу, атеросклероз. 0,35-0,65 Д370/оптичну щільність ліпопротеїдів Коронарографія зафіксувала атеросклеотичнизької та дуже низької щільності, або умовних ний стеноз коронарних артерій, що прогресує. одиниць в той час, коли у хворих на ішемічну хвоПо вищеописаному способу було проведено робу серця з прогресуючим перебігом цей показдослідження. Отримані слідуючі результати: X1 ник вищий за 0,65 умовних одиниць. 1,81ум. од., Д1 - 1,35 ум. од. Спосіб пояснюється наступними прикладами: Розрахунок:[1,81:1,35]=1,34ум. од. Приклад 1 Вміст фенілгідразонів - 1,34, що є показником Хворий С., 53 роки, діагноз: ішемічна хвороба значно підвищеного атерогенного потенціалу кросерця, стенокардія напрягу, атеросклероз. ві, що напевно призводить до прогресуючого пеКоронарографія зафіксувала атеросклеротичребігу ішемічної хвороби серця. ний стеноз коронарних артерій без подальшого Треба підкреслити, що коронарографічні допрогресування. слідження є травматичні та небезпечні для пацієнПо вищеописаному способу було проведено тів, і показані до використовування не всім хворим дослідження. Отримані слідуючі результати: X1 на прогресуючий атеросклероз. Так протипоказан0,51ум. од., Д1 - 1,22 ум. од. ня для цієї процедури мають хворі з значною гіРозрахунок:[0,51:1,22]=0,42ум. од. пертрофією міокарду, з стенокардією IV функціоВміст фенілгідразонів - 0,42, що становить нонального класу, зі значною серцевою рму. недостатністю та недостатністю кровообігу, а таПриклад 2 кож з тяжкими порушеннями серцевого ритму та Хворий 3., 50 років, діагноз: ішемічна хвороба ін. серця, стенокардія напрягу, атеросклероз. На порівняння з прототипом, запропонований Коронарографія зафіксувала атеросклеротичспосіб дозволяє підвищити точність діагностики за ний стеноз коронарних артерій, що має тенденцію рахунок того, що продукти вільнорадикального до збільшення. окислення білків визначаються саме в атерогенних По вищеописаному способу було проведено ліпопротеїдах, перекисна модифікація яких надає дослідження. Отримані слідуючі результати: X1 їм атерогенних властивостей та сприяє їх вбудову 0,91ум од., Д1 - 1,24ум. од. в коронарні судини, що призводить до прогресуРозрахунок:[0,91:1,24]=0,73ум. од. вання ішемічної хвороби серця (коронарного атеВміст фенілгідразонів - 0,73, що є показником росклерозу). Таким чином точність діагностики підвищенного атерогенного потенціалу крові, що атерогенного потенціалу крові сприяє підвищенню може призводити до прогресуючого перебігу ішеефективності лікування хворих на ішемічну хворомічної хвороби серця. бу серця. Приклад 3 Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601