Спосіб та пристрій для концентрації і стабілізації сумішей кон’югованих естрогенів із сечі жеребних кобил

Даний винахід стосується способу і пристрою для концентрації й стабілізації кон'югованих естрогенів, одержуваних із сечі жеребних кобил, на твердих носіях для одержання вихідного матеріалу у фармацевтиці, який містить натуральну суміш ци х кон'югованих естрогенів як активний компонент. Естрогени призначають у медицині при гормональній замісній терапії. Зокрема, суміші естрогенів призначають для лікування і профілактики проблем перехідного віку, які з'являються у жінок унаслідок природної або штучної менопаузи. При цьому застосовують натуральні суміші кон'югованих естрогенів, що які присутні в сечі жеребних кобил, і використання яких особливо ефективно і прийнятно. Уміст твердої речовини в сечі жеребних кобил («pregnant mares urine», надалі скорочене "PMU") може коливатися природно в широкому діапазоні і становити в загальному випадку 40-90г сухої речовини на літр. Поряд із сечовиною й іншими речовинами, які входять до складу сечі, фенольна складова грубодисперсних домішок PMU досягає значень приблизно 2-5 вагових відсотків щодо сухої речовини. До цих фенольних складових належать крезол і, відомий як «HPMF», дигідро-3,4-[(3-гідроксифеніл)метил]-2(3Н)-фуранон. Вони можуть бути присутніми у вільній або кон'югованій формі. У PMU міститься натуральна суміш естрогенів, головним чином, у кон'югованій формі, наприклад, напівефірна натрієва сіль сірчаної кислоти (надалі скорочено "сульфат"). Уміст кон'югованих естрогенів («conjugated estrogen», надалі скорочено "СЕ") можна розрахувати за естрогенсульфатом, він може становити від 0,3 до 1 вагового відсотка щодо сухої речовини. Різні технології безпосередньої підготовки й одержання кон'югованого естрогену, який міститься в PMU, описані у наявному рівні техніки. Як правило, екстракти PMU, які містять кон'юговані естрогени, одержують екстракцією зі застосуванням органічних розчинників, які зовсім не сумісні з водою, або які лише незначно змішуються з нею, як, наприклад, етилацетат, н-бутанол або циклогексан. У випадку такої рідинної екстракції виникає, проте, безліч проблем, таких як сильне піноутворення, відкладення осаду, утворення емульсії і непевний поділ фаз. Зазвичай потрібно декілька стадій екстракції, що веде до втрат і лише часткового виділення естрогену. Тому для усунення цих недоліків у наявному рівні те хніки був запропонований ряд способів екстракції твердої фази. Для підготовки малих кількостей рідини сечі й плазми при аналітичному визначенні естрогенів за допомогою газової хроматографії Heikkinnen та ін. [Сlіn. Chem. 27/7, (1981), 1186-1189] і Shackleton та ін. [Clinica Chimica Acta 107 (1980), 231-243] описують екстракцію твердої фази естрогенів за допомогою картриджу з обробленим кремнієм силікагелем, що містить залишок октадецилкремнію (Sep-Pak C18-cartridge, виробник Waters Ass Inc Milford, MA, USA). При цьому естроген вимивається з картриджа метанолом. У 1968р. HL Bradlow [див «Steroids» 11 (1968), 265-272] для екстракції кон'югованих естрогенів із сечі запропонував використовувати Amberlite XAD-2R, нейтральну неполярну гідрофобну полістирольну смолу фірми "Rohm und Haas" Зазначена адсорбційна ємність незначна. За Бредлоу (Bradlow), сеча, за необхідності розведена, з малою швидкістю протікання спрямовувалася крізь колонку, яка містить смолу Естроген вимивається метанолом або етанолом. У пізніших патентних заявках описаний спосіб одержання екстракту, який містить натуральні суміші кон'югованого естрогену, твердофазною екстракцією суміші кон'югованих естрогенів із сечі жеребних кобил, наприклад, на силікагелі RP [WO 98/08525] або на неіонізованих напівполярних полімерних смолах, що адсорбують [WO 98/08526]. Поряд з вищеописаною оптимізацією безпосередньої, повної переробки сечі жеребних кобил (PMU) при одержанні натуральних сумішей кон'югованих естрогенів (СЕ), особливе значення мають етапи первісного зберігання до переробки, наприклад, забезпечення ретельного зберігання і поводження зі зібраною сечею на місці збору, що впливають на вихід і якість естроген-вмісної сировини, і виділення натуральної суміші кон'югованих естрогенів. У зв'язку з цим варто прагнути до оптимізації транспортування зібраної сировини, яка містить естроген, із місця збору до місця власне переробки й виділення кон'югованого естрогену. Для комплексної підготовки PMU, наприклад, твердофазної екстракції потрібний кваліфікований персонал, який спеціалізується в галузі хімії та фармацевтики, щоб виконувалися встановлені високі вимоги щодо чистоти і якості речовини або суміші речовин, використовуваних як фармацевтично активна речовина. Як правило, збір сечі (PMU) відбувається у звичайних умовах утримування жеребних кобил, тобто на кінних заводах, у сільській місцевості, а часто також у більш віддалених місцях. Як правило, у цьому випадку наявна лише проста інфраструктура, а збирання сечі (PMU) і маніпуляції з нею здійснюється звичайним персоналом, до якого не можна висувати високих вимог щодо поводження зі зібраною сечею. Однак кон'юговані естрогени (СЕ), виділювані у сполуках, таких як сеча жеребних кобил, є комплексною сумішшю, яка містить, зокрема, естронсульфат натрію, еквілінсульфат натрію, а також інші СЕ. Для виділення СЕ дуже важливо, щоб PMU була підготовлена, за можливістю, швидко у свіжому стані. При більш тривалому збереженні сеча швидко починає розкладатися. Сеча темніє, пахне аміаком, а вміст СЕ у ній дуже швидко зменшується. Швидкість розкладання залежить від умов зберігання і від ступеня чистоти. Тому зібрану сечу (PMU), коли мова йде про великі кількості рідини, необхідно транспортувати щодня з місця збору до центрального пункту переробки, щоб гарантувати , за можливості, швидке перероблення. Тому існує невідкладна потреба у прийнятних способах і пристроях, за можливості, більш дбайливих до продукту і простих у поводженні, призначених для концентрації і стабілізації кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться в сечі жеребних кобил, безпосередньо на місці збору сечі (PMU), а також для можливо більш ефективного транспортування від місця збору до місця переробки й ізолювання. Задача даного винаходу таким чином, полягає в розробці технологічного способу і пристрою для концентрації і стабілізації естрогенів (СЕ) зі зібраної сечі жеребних кобил (PMU), що усувають наведені вище недоліки і прийнятні для одержання натуральної суміші кон'югованих естрогенів. Зокрема, спосіб і пристрій для концентрації й стабілізації кон'югованого естрогену з PMU на місці збору сечі мають забезпечувати просте поводження із продуктом, щадну дбайливість до продукту, а також, за можливості, більш ефективне транспортування підготовленої у такий спосіб естроген-вмісної сировини з місця збору до місця власне переробки й ізолювання натуральної суміші кон'югованих естрогенів. Несподівано було виявлено, що кон'юговані естрогени (СЕ) на твердих носіях (адсорбентах) зв'язані дуже стабільно, і триваліший час стійкі без яких-небудь ознак розкладання. Тому даний винахід стосується способу для практичної, децентралізованої концентрації і стабілізації сумішей кон'югованих естрогенів (СЕ) зі сечі жеребних кобил (PMU), тобто, зокрема, при стійловому утримуванні і/або при утримуванні поблизу пасовищ, який відрізняється тим, що - натуральну суміш кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться у сечі жеребних кобил (PMU), концентрують і стабілізують на твердому носії (адсорбенті); - задана максимальна загальна кількість зібраної рідини сечі зі збірника подається насосом безупинно або дискретно, зі заданою швидкістю протікання, за необхідності, крізь сито, крізь вертикально розташований картридж, а рідина сечі, яка стікає, розділяється, при цьому - картридж заповнений придатним адсорбентом, (постійно) оточеним рідиною і призначений для адсорбції визначеної кількості суміші кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться в рідині сечі, і при цьому - як кінцева крапка контролю для завантаження адсорбенту задана максимальна загальна кількість рідини сечі, подана насосом, і яка узгоджується із максимальною ємність завантаження адсорбенту для кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться в рідині сечі. Термін "практичний" при цьому значить, що спосіб придатний для умов практичного збору на місці і може здійснюватися навченим персоналом, завдяки тому, що він нескладний і майже виключає можливість неправильного обслуговування. Термін "децентралізований" при цьому значить, що спосіб може бути здійснений на конкретному пункті збору сечі без спеціального хімічного й фармацевтичного устатк ування, тобто, зокрема, за місцем стійлового утримування і/або поблизу пасовищ. Під терміном "картридж" слід розуміти вид закритої колонки з лініями підведення і відведення, що закриваються, а також із приєднувальними елементами, наприклад, швидкорозсувними з'єднаннями Таким чином, термін "картридж" охоплює в рамках даного винаходу також колонки, що застосовуються зазвичай, наприклад, у лабораторіях, в експериментальних цеха х і, відповідно, на хімічних підприємствах і обладнані як зазначено вище за винаходом. Сировина і, відповідно, вихідний матеріал, отримані згідно способу за винаходом, використовуються переважно у фармацевтиці, як активний компонент містять натуральну суміш кон'югованих естрогенів з PMU, суміш натуральних естрогенів, які містяться в PMU, практично цілком концентрується на адсорбенті (носієві), і її можна стабілізувати через тривалий час при нормальних умовах навколишнього середовища за місцем збору. Після повного (максимального) завантаження картридж можна легко замінити картриджем із незавантаженим адсорбентом. Картриджі із завантаженим адсорбентом також можна зберігати ще тривалий час за місцем при температурі навколишнього середовища або, бажано, охолодженими приблизно до 4°С, а за певних умов навіть піддавати глибокому охолодженню до -20°С, наприклад, до накопичення певної кількості завантажених картриджів із урахуванням доцільності транспортування до центрального пункту переробки. Транспортування можна здійснювати при температурі навколишнього середовища, як описано вище, для зберігання, або може проходити при охолодженні й, навіть, при глибокому охолодженні. Власне переробка й ізолювання натуральної суміші кон'югованих естрогенів (СЕ) може здійснюватися потім у центральному пункті переробки звичайним для даного адсорбенту способом, наприклад, промиванням і вимиванням СЕ з адсорбенту і подальшою обробкою елюата традиційним способом. Наприклад, елюат після цього для подальшої обробки цього концентрату значною мірою або цілком звільняється органічним розчинником. Для одержання суміші твердих речовин, яка не містить елюент, бажано можна також використовува ти інші способи сушіння, наприклад, розпилювальне сушіння, сушіння із псевдорозрідженим шаром, сублімаційне сушіння або вакуумне сушіння. Як суміш естрогенів, яка містить елюент, так і одержаний із неї концентрат або твердий продукт, одержаний у результаті розпилювального сушіння, можна відомим способом випускати у вигляді твердих або рідких форм лікарських препаратів, наприклад, у вигляді таблеток, драже, або капсул із емульсією. Разом зі способом за винаходом, винахід стосується також пристрою, використовуваного при цьому способові, який оптимально враховує прості умови на місці застосування способу і гарантує просте та дбайливе поводження із продуктом. Цей пристрій за винаходом придатний для практичної, децентралізованої концентрації і стабілізації, тобто при стійловому утримуванні або при утримуванні поблизу пасовищ. Нижче пояснюються важливі для здійснення способу параметри. Конструктивні або, відповідно, апаратні особливості варіанта втілення пристрою, придатного для здійснення способу за винаходом зазначені нижче в докладному описі пристрою, який доповнює загальний опис здійснення способу. Для способу за винаходом зібрана PMU може використовуватися як така, і щодня зібрана кількість PMU вміщується спочатку до збірника. За необхідності, рекомендується відокремити грубі механічні забруднення, такі як солома, сіно або т.п., наприклад, за допомогою простого сита з великими дірками при заповненні збірника свіжою PMU. Для скорочення кількості мікробів і вірусів у зібраній у збірнику сечі, рекомендується додавати до неї консерванти, герміциди, бактерицидні і/або противогельмінтні засоби. PMU регулярно відкачують насосом зі збірника, залежно від кількості сечі, що надходить, один або два рази щодня, наприклад, за допомогою шланга, до картриджа, який містить адсорбент. Цей картридж має, як правило, такі габарити і вагу, що дозволяють персоналу середньої фізичної сили здійснювати маніпуляції з ним. За способом рекомендується, щоб внутрішні габарити картриджа для прийнятого шару адсорбенту були такими, щоб він міг приймати приблизно від 30 до 50 літрів адсорбенту, a PMU має бажано проходити від входу до ви ходу шля х довжиною приблизно від 80 до 120см. За винаходом, адсорбція кон'югованих естрогенів на адсорбенті відбувається шляхом контакту PMU з адсорбентом, при цьому рідина сечі подається згори або знизу до вертикально розташованого картриджа, який містить адсорбент, і там вона перебуває у контакті з адсорбентом протягом часу, достатнього для адізорбції естрогенів, доти поки залишкова сеча не залишить картридж з протилежного боку При цьому PMU подається до картриджа, наприклад, згори або знизу таким чином, що адсорбент постійно оточений рідиною, щоб, за можливістю, виключити небажаний сухий режим картриджа. Час контакту і,. Відповідно, швидкість протікання обумовлюються конкретним адсорбентом, і, у випадку адсорбентів, придатних для способу (= швидкість завантаження) має лежати у діапазоні від 3 до 10 об'ємів адсорбувального шару (ВV)/годину, бажано від 4 до 6 об'ємів адсорбувального шару/годину. Придатні швидкості завантаження, наприклад, від 4,5 до 5,5 об'ємів адсорбувального шару/годину. Окремі значення часу контакту й швидкості протікання зазначені для особливо бажаних адсорбентів нижче при описі цих адсорбентів. Максимальна загальна кількість рідини сечі, яка проходить крізь картридж, може залежати від адсорбційної ємності даного адсорбенту, і, у випадку адсорбентів, придатних для даного способу, має становити від 20 до 60 об'ємів адсорбувального шару, бажано від 30 до 40 об'ємів адсорбувального шару. Як правило, максимальна загальна кількість рідини сечі, що може проходити крізь картридж при його завантаженні, має становити від 900 до 2000 літрів. Конкретне підсумкове значення для даного типу картриджів чітко вказується обслуговуючому персоналові на місці збору. Для виміру кількості рідини сечі, що поданої насосом крізь картридж, можна використовувати простий витратомір, бажано, наприклад, водяний годинник. Після досягнення максимального завантаження, за необхідності, можна переключатися на паралельний другий картридж і продовжувати здійснювати процес адсорбції в ньому. Якщо задане для картриджа підсумкове значення досягнуте, картридж з адсорбованими СЕ промивається, бажано, наприклад, водою і/або іншим придатним промивним розчином, поки не буде перекрита подача рідини Після цього перекривається лінія подачі й відводу рідини, а потім, наприклад, за допомогою простого швидкорозсувного з'єднання, припиняється подача рідини до картриджа Після цього завантажений картридж можна видалити і зберігати у певному місці до транспортування до центрального пункту переробки, а свіжий, незавантажений картридж можна підключити до лінії подачі рідини. Картридж після завантаження його PMU, наприклад, перед заміною цілком завантаженого PMU або картриджа, а також перед досягненням повної ємності завантаження після будь-яких окремих часткових етапів завантаження, бажано можна промивати ще водою і/або іншим придатним водним промивним розчином, приміром, лужним промивним розчином, наприклад, розведеним водним розчином їдкого натру (наприклад, водяним 0,5-2Н NaOH), щоб видалити залишки рідини сечі з картриджа Кількість промивного розчину не є критичною і вибирається бажано таким чином, щоб вона була достатньою для видалення залишків сечі з картриджа, без помітного вимивання кон'югованих естрогенів У якості оптимального вказується, прикладом, застосування від 1-го до 3-х, бажано близько 2-х об'ємів промивної рідини на об'єм шару адсорбенту. При цьому промивна вода або промивний розчин подаються крізь картридж, який містить адсорбент, зі швидкістю протікання від 3 до 10, бажано від 5 до 7 об'ємних частин промивної води на 1 об'ємну частину адсорбенту/годину Адсорбент у картриджі, завантажений СЕ, може служити сировиною або, відповідно, вихідним матеріалом для виділення чистого СЕ при одержанні лікарських засобів, які містять натуральні суміші кон'югованих естрогенів. У варіанті винаходу картридж після промивання водою і/або промивним розчином для наступної стабілізації адсорбованого СЕ можна промивати на завершення ще і розчином-консервантом, наприклад, розчином, який містить консервант, водним розчином з регульованим рН і/або водним розчином солі, перш ніж картридж буде витягнутий із пристрою і замінений новим. Для запобігання стерилізації колонки, зокрема, при збереженні або транспортуванні без охолодження, можна використовувати звичайні консерванти і, наприклад, також герміциди, бактерицидні і/або противогельмінтні засоби. Значення рН промивної води обумовлюється використовуваним адсорбентом Як розчини солей можна використовувати водні розчини неорганічних солей різної концентрації, приведені для прикладу в таблиці III.1. Застосування розчинів солі, зокрема, рекомендовано також у тих випадках, коли завантажені СЕ картриджі мають зберігатися охолодженими або сильно охолодженими. Бажаними є розчини повареної солі з концентраціями солі приблизно від 10 до 35 вагових відсотків, бажано від 25 до 33 вагових відсотків. У бажаному варіанті здійснення способу за винаходом зібрану сечу, перш ніж її буде відкачано зі збірника до картриджа, бажано звільняють від слизових і високодисперсних твердих речовин. Бажано, якщо рідина сечі зі збірника спочатку пропускається крізь один або кілька фільтрів грубого очищення, перш ніж и буде відкачано крізь картридж. У такий спосіб можна пропускати PMU, приміром, щонайменше крізь один відомий видільний пристрій, наприклад, крізь фільтрувальну установку, щонайменше з одним глибоким фільтром або намивним фільтром. Як видільний пристрій може служити, наприклад, глибокий фільтр із шаром піску або стандартний фільтрувальний картридж, або можна використовувати стандартний намивний фільтр або пластинчастий фільтр, свічковий фільтр, фільтрувальний мішок, а також фільтраційні труби. Фільтри можна використовувати окремо або разом, а також у будь-якій комбінації один з одним, наприклад, у вигляді ряду послідовно і/або паралельно з'єднаних елементів. До рідини сечі (PMU) бажано перед фільтрацією можна додавати ще і допоміжний фільтрувальний засіб. Придатні такі допоміжні фільтрувальні засоби, які зв'язують карбонат кальцію і/або муцини і поліпшують у такий спосіб фільтрацію сечі. За необхідності, до фільтра додатково може бути підключений ще і сепаратор часток, наприклад, у випадку підключення пісковідокремлювача, де як фільтр використовується шар піску. Для фахівців принципи і, відповідно, технологія фільтрації загальноприйняті. Тому, беручи до уваги задачу, розв'язувану за винаходом, варто враховува ти загальноприйняті принципи освітлювального фільтрування при використанні винаходу. Освітлювальне фільтрування має за свою мету очищення рідкої фази, таким чином, для нього чистота фільтрату є істотною оцінною величиною при досягненні мети процесу. Процес поділу реалізується в основному за рахунок взаємодії між фільтрувальним матеріалом і суспензією. На це варто звертати увагу як при виборі фільтрувального матеріалу при моделюванні процесу, так і при технологічному розрахункові фільтрувальних апаратів. У більшості випадків відділена тверда речовина істотно впливає на хід процесу. Таким чином, варто враховувати вплив твердих речовин і їхню схильність до утворення містків (частки спираються на фільтрувальний матеріал, але не закупорюють його), коржі, що наростають на фільтрах, погіршують роботу фільтрувального матеріалу. У випадку фільтрації намивними фільтрами коржі на фільтрах, обумовлюють структур у залишків на фільтрах, у той час як придатні фільтрувальні матеріали після початкової стадії виконують лише опорну функцію. Місце виділення твердої речовини - це наступна істотна відзнака процесів фільтрації. При поверхневій фільтрації відділення твердої речовини відбувається на поверхні фільтрувального матеріалу за рахунок просівання, тобто завдяки співвідношенню розмірів часток твердої речовини і пір фільтрувального матеріалу. На противагу цьому, при глибокій фільтрації частки твердої речовини проникають до фільтрувального матеріалу й осаджуються всередині нього. Використовувані в картриджі адсорбенти можуть являти собою будь-які неорганічні або органічні адсорбенти, які мають достатню адсорбційну ємність для натуральних сумішей кон'югованих естрогенів, які містяться в PMU. Тому як адсорбенти в картриджах для способу за винаходом можна бути використовувати полімерні адсорбувальні смоли, силікагель, силікагель RP або, бажано, напівполярні полімерні адсорбувальні смоли. Гідрофобні силікагелі, використовувані в картриджі як адсорбент, відомі як реверс-фазні силікагелі (Reverse-Phase-Kieselgele, скорочено "силікагелі RP"), це хімічно модифіковані силікагелі, які несуть гідрофобні функціональні групи або, відповідно, ліганди. У такий спосіб придатні, приміром, оброблені кремнієм силікагелі RP, які містять у якості гідрофобних функціональних груп залишки ноктадецилдиметилсилілоксиду, н-октилдиметилсилілоксиду або диметилгідроксисилілоксиду. Придатні, наприклад, оброблені кремнієм силікагелі зі середніми розмірами зерен від 15 до 500мкм. Як найбільш оптимальний зазначений, наприклад, силікагель із середніми розмірами зерен у діапазоні 0,05-0,3мм, який містить залишки диметилгідроксилсилілоксиду, наприклад, «Силікагель 60/похідне диметилсилану", фірми Merck. Бажано пропускати рідину сечі крізь картридж, який містить силікагель, з такою швидкістю протікання, щоб часу контакту було досить для адсорбції естрогенів. Прийнятні, приміром, швидкості протікання, які відповідають проходженню від 5 до 20 об'ємних частин PMU на 1 об'ємну частину силікагелю/годину. Адсорбція відбувається бажано при кімнатній температурі. Бажане регулювання швидкості протікання рідини сечі крізь реактор за рахунок його роботи при незначному надлишковому тискові (регулюванням продуктивності насоса). Кількість застосовуваного гідрофобізованого силікагелю може варіюватися залежно від виду використаного силікагелю і вмісту твердої речовини у зібраній рідині сечі. У випадку використання попередньо фільтрованої PMU, тобто звільненої від слизу і твердих речовин, приміром, одну об'ємну частину гідрофобізованого силікагелю можна завантажувати 80-ма об'ємними частинами PMU, яка пройшла попередню обробку, без помітного віднесення естрогенів рідиною сечі. Напівполярні полімерні адсорбувальні смоли, використовувані в картриджі як адсорбент, являють собою, бажано, пористі органічні неіонізовані полімери, які, на противагу неполярним гідрофобним полімерним адсорбувальним смолам, мають проміжну полярність (наприклад, з дипольним моментом активної поверхні смоли в діапазоні від 1,0 до 3,0, зокрема, від 1,5 до 2,0 Дебая) і частково гідрофільну структур у, наприклад, полікарбонатна смола на основі складних ефірів. Бажане використання макропористих напівполярних смол, бажано, з макроретикулярною структурою, із середнім діаметром пір у діапазоні від 50 до 150, бажано від 70 до 100 Å, і з питомою поверхнею в діапазоні від 300 до 900, бажано від 400 до 500м 2/г. У якості особливо рекомендованих зазначені макропористі сітчасті аліфатичні полікарбонатні смоли на основі складних ефірів, зокрема, наприклад, сітчасті поліакрилові смоли на основі складних ефірів Amberlite XAD-7® фірми «Rohm und Haas». Бажано пропускати рідину сечі крізь картридж, який містить силікагель, з такою швидкістю протікання, щоб часу контакту було досить для адсорбції естрогенів. Прийнятні, наприклад, швидкості протікання, які відповідають проходженню від 3 до 10, бажано від 5 до 7 об'ємних частин PMU на 1 об'ємну частину адсорбувальної смоли/годину. Адсорбція бажано проводиться при кімнатній температурі. Бажане регулювання швидкості протікання рідини сечі крізь реактор за рахунок його роботи при незначному надлишковому тискові (регулюванням продуктивності насоса). Кількість застосовуваної напівполярної адсорбувальної смоли може варіюватися залежно від виду використаних адсорбувальних смол і вмісту твердої речовини в зібраній рідині сечі. При використанні PMU, наприклад, одну об'ємну частину адсорбувальної смоли, приміром, аліфатичну полікарбонатну смолу на основі складних ефірів, можна завантажувати 80 об'ємними частинами PMU, яка пройшла попередню обробку, без помітного віднесення естрогенів рідиною сечі. Поряд із вищезгаданими адсорбентами можуть бути використані й інші адсорбувальні смоли або силікагелі інших типів. Як адсорбувальні смоли при цьому прийнятні як неполярні, напівполярні, так і полярні адсорбувальні смоли. Кількість сечі, яку можна відкачувати крізь адсорбент, обумовлюється насамперед адсорбційною ємністю. Прикладом застосовуваних адсорбувальних смол є такі стандартні типи полімерів, як адсорбенти Amberlite на основі стиролдивінілбензолу (наприклад, типи XAD-1180, XAD-2, XAD-4, XAD-16), на основі акрилу (наприклад, XAD-7) або з високополярною основною структурою, яка містить азот і кисень (наприклад, XAD-12). Інші адсорбувальні смоли - це смоли Dowex (співполімери стирол і дивінілбензол), такі як, наприклад, Dowex 112, Dowex Optipore, Dowex Optipore V 493; Lewatite (сітчасті полістироли), наприклад, Lewatit ОС 1064, Lewatit ОС 1066 або Lewatit ОС 1163, поліамінаніонна смола, наприклад, смоли Dowex. Придатні адсорбувальні смоли, зокрема, XAD-7, 493, а також Lewatite ОС 1064, ОС 1066 і ОС 1163, бажано Dowex Optipore V XAD-16 (тип ХП), XAD 118 і Dowex Optipore. Поряд із вищеописаним способом за винаходом, винахід стосується також пристрою, використовуваного при цьому способові, який оптимально враховує прості умови на місці використання і гарантує дбайливе поводження із продуктом. За винаходом, пристрій відрізняється його придатністю до практичного, децентралізованого використання, зокрема, до використання в умовах утримування в стійлі або поблизу пасовищ, для концентрації і стабілізації сумішей кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться у сечі жеребних кобил (PMU), на твердому носи (адсорбенті), при цьому пристрій включає: - вертикально розташований картридж, (постійно) оточений рідиною, для адсорбції визначеної кількості суміші кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться в рідині сечі жеребних кобил, заповнений придатним для цього адсорбентом, і при цьому картридж має або а) одну підвідну лінію, розташовану знизу, й одну відвідну лінію, розташовану згори або b) одну підвідну лінію, розташовану згори, і одну відвідну лінію, розташовану знизу, - а також установлені перед картриджем у суворо визначеній послідовності і з'єднані між собою за допомогою шлангопроводу - насос, струмомір і витратомір Пристрій за винаходом призначений для здійснення вищеописаного способу практичної, децентралізованої концентрації і стабілізації кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться в PMU. Бажаний пристрій може включати також два паралельно приєднаних картриджі, які можуть працювати один за одним або по черзі. Розміри картриджа, використовуваного у пристрої за винаходом, його висота і діаметр можуть варіюватися у широкому діапазоні. Однак, щоб не погіршува ти придатність пристрою при використанні на практиці, картридж повинен мати такі розміри і вагу, щоб з ними міг маніпулювати персонал середньої фізичної сили, наприклад, при заміні завантажених картриджів свіжими, незавантаженими картриджами. Тому, наприклад, внутрішні розміри картриджа мають бути такими, щоб картридж міг уміщати шар адсорбенту від 30 до 50 літрів, при цьому внутрішня висота становить, наприклад, від 80 до 120см Внутрішній діаметр картриджа становить від 10 до 25см. Фахівці здатні точно визначити розміри картриджа для забезпечення оптимальних умов експлуатації. Картридж, використовуваний у пристрої за винаходом, має бути виконаний бажано з міцного, зносостійкого і хімічно стійкого матеріалу, використовуваного при виготовленні пристроїв для хімічної промисловості, наприклад, удароміцного хіміко-лабораторного скла, пластмаси і/або металу, наприклад, листової сталі. У пристрої за винаходом можна використовувати будь-які прості та міцні насоси, такі як, наприклад, мононасос, насос зі шлангом або мембранний насос. Для пристрою за винаходом найбільш оптимальним виявився, наприклад, насос зі шлангом. У пристрої за винаходом можна бути використовувати будь-які прості і міцні струмоміри, наприклад, ротаметр, витратомір з поворотними лопатями або індуктивний струмомір. Для пристрою за винаходом в якості струмоміра найбільш оптимальним виявився, наприклад, ротаметр із поплавцем. У пристрої за винаходом для виміру кількості відкачаної крізь картридж рідини сечі можна використовува ти будь-які прості і міцні витратоміри, такі як, наприклад, водяній годинник або індуктивні витратоміри. Для пристрою за винаходом як витратомір найбільш оптимальним виявився, наприклад, водяний годинник. У бажаному варіанті пристрою за винаходом між насосом і витратоміром додатково встановлений принаймні один або кілька фільтрів грубого очищення, наприклад, глибокий фільтр або намивний фільтр. При фільтруванні йдеться, наприклад, про глибокий фільтр із допомогою шаром піску або стандартний фільтрувальний картридж, або стандартний намивний фільтр або пластинчастий фільтр, свічковий фільтр, фільтрувальний мішок, а також фільтрувальні труби. Перед фільтром грубого очищення може бути також установлений віддільник часток, наприклад, у випадку шару піску, використовуваного як фільтр грубого очищення, установляються пісковідокремлювач. У варіантах пристрою фільтри можна установлювати по одному і по декілька, а також у будь-якій комбінації один з одним, наприклад, ряд послідовним рядом і/або паралельно. Бажане здійснення цих варіантів відрізняється тим, що фільтр грубого очи щення являє собою модуль із двох паралельно з'єднаних фільтрів грубого очищення, які можуть працювати окремо по черзі та дозволяють робити заміну на свіжі фільтри грубого очищення при пристрої, що працює. Наступний бажаний варіант здійснення відрізняється тим, що фільтрувальний пристрій являє собою модуль, який складається з ряду вузлів гр убого очищення, які складаються із фільтрів грубого очищення (наприклад, фільтрувальних мішків) і одного або двох глибоких фільтрів і двох підключених до них, з'єднаних паралельно абсолютних фільтрів (наприклад мембранних фільтрів), при цьому абсолютні фільтри можуть працювати окремо по черзі і дозволяють робити заміну на свіжі фільтри грубого очищення при пристрої, що працює. Далі, до пристрою за винаходом з метою контролю правильної роботи фільтра грубого очищення між насосом і фільтром грубого очищення встановлюється установлюється а ще один манометр встановлюється у ділянці після фільтра грубого очи щення, бажано відразу за струмоміром. Далі пристрій за винаходом у бажаному варіанті здійснення пояснюється за допомогою Фіг.1, на якій схематично показаний пристрій для стабілізації і концентрації СЕ з PMU. С хематичне зображення процесу фільтрації сирої сечі представлено на Фіг.2. Спосіб і пристрій за винаходом виявляють ряд переваг, найважливіші з яких зазначені нижче. Концентрацію СЕ, тобто завантаження адсорбційної колонки можна здійснювати безпосередньо за місцем збору. Завдяки цьому виключається необхідність щоденного транспортування великої кількості рідини сечі до центрального пункту переробки. Завантаження може відбуватися безупинно за більш довгий час, аж до декількох тижнів, доти, поки адсорбційна колонка не буде насичена, наприклад, у випадку адсорбувальної смоли XAD-7 кількість адсорбованої сечі складає приблизно 35 об'ємів шару. Звільнена від СЕ залишкова сеча залишається на місці, де для утилізації відходів наявне спеціальне устаткування. Транспортуванню підлягає тільки завантажена колонка, тобто лише приблизно 1/35 частина первісної ваги рідини сечі. Транспортування може відбуватися з великими інтервалами часу. Транспортування може здійснюватися і протягом більш тривалого часу, наприклад, до декількох тижнів Завдяки гарній стабільності СЕ на адсорбційній колонці, не слід очікувати якого-небудь розкладання. Відпадає необхідність обробки великої кількості сечі сепаратором і пристроєм ультрафільтрації, тому що відділення наявних у вихідній сечі слизу й осадів здійснюється за допомогою міцних і таких, що не потребують обслуговування, намивних або глибоких фільтрів (наприклад, пісковий фільтр, фільтрувальний картридж, намивний фільтр, пластинчастий фільтр, свічковий фільтр, фільтрувальний мішок або фільтрувальні труби), які у разі потреби можна легко замінити. Нижче винахід пояснюється докладніше за допомогою ілюстрацій і прикладів, які не обмежують його обсяг Фігури Фіг.1 Схематичне зображення пристрою для стабілізації і концентрації СЕ з PMU, елементи пристрою відповідають таким позначенням (1)= підведення рідини сечі зі збірника, (2)= насос, наприклад, насос зі шлангом, (3)= сполучні лінії, (4)= манометр, (5)= триходовий кран, (6)= швидкорозсувні з'єднання (7)= запірні вентилі, (8)= фільтр, (9)= стр умомір з поплавцем (ротаметр), (10)= витратомір, наприклад, водяний годинник, (11)= картридж, колонка, (12)= адсорбувальний шар, (13)= відвід. Фіг.2 Схематичне зображення процесу фільтрації сирої сечі, при якому фільтрувальна установка складається з модуля у вигляді ряду вузлів грубого очищення, які складаються з фільтрів грубого очищення (наприклад, фільтрувальних мішків) і одного або двох фільтрів глибокого шару і приєднаних до нього двох паралельно включених абсолютних фільтрів (наприклад, мембранних фільтрів). Приклади Приклад 1: Загальна технологічна інструкція з концентрації та стабілізації кон'югованих естрогенів (СЕ), які містяться у сечі жеребних кобил (PMU), безпосередньо на місці збору PMU адсорбцією на картриджі, який містить адсорбент. Зібрана PMU крізь вирву, оснащену ситом, подається до збірника. Сито має ячійки великого розміру і служить для відділення лише грубих механічних забруднень , таких як солома, сіно і т.д.. Спосіб пояснюється на наступному прикладі у випадку використання адсорбувальної колізнки (у вигляді картриджа) з напівполярною адсорбувальною смолою. Якщо застосовуються картриджі з іншими адсорбентами, при їхньому використанні, зокрема, варто враховувати особливість переробки завантаженого картриджа залежно від виду даного адсорбенту. Процес завантаження і заключне промивання картриджа на місці збору сечі проводяться за пунктами А) і В) або лише незначно коригуються залежно від конкретного місця або адсорбенту. A) Адсорбція PMU, яка містить естрогени, на адсорбенті Адсорбція СЕ з PMU здійснюється на адсорбційній установці, такій, як спрощено показана для прикладу на Фіг.1. Задана загальна кількість PMU, обумовлена ємністю картриджа або адсорбційної колонки, при температурі навколишнього середовища, після того, як вона минула сито, і якщо необхідно, профільтрована, цілком або порціями із заданою швидкістю протікання відкачується крізь колонку або, відповідно, картридж, заповнений адсорбентом. Як адсорбент може бути використана, наприклад, напівполярна акрилефірна адсорбувальна смола (Amberlite XAD-7 фірми "Rohm und Haas", розмір зерен від 0,3 до 1,2мм, дипольний момент 1,8 Дебая, середній діаметр пір 80 ангстрем, питома поверхня приблизно 450м 2/г сухої речовини) або інші придатні адсорбенти. Після досягнення заданої максимальної завантажувальної кількості PMU підвідна лінія PMU на колонці або відповідно на картриджі перекривається і, за необхідності, подача переключається від завантаженої колонки або, відповідно, від картриджа на паралельно приєднану вільну колонку або картридж. Естрогени з PMU цілком адсорбуються на такій завантаженій адсорбційній колонці. B) Промивання завантаженої адсорбційної колонки Завантажена адсорбційна колонка і, відповідно, картридж промиваються після закінчення процесу адсорбції необов'язково водою або іншим водним промивним розчином, наприклад, лужним промивним розчином, таким, зокрема, як розведений розчин їдкого натру (наприклад, 0,5-2Н NaOH). При цьому промивна вода або промивний розчин при температурі навколишнього середовища зі заданою швидкістю протікання, наприклад, близько 5,5 об'ємів шару на годину, відкачується крізь колонку або відповідно крізь картридж. Промивна рідина, яка витікає, скидається. C) Зберігання й транспортування Для транспортування і, відповідно, для проміжного зберігання завантажену адсорбційну колонку і, відповідно, картридж після закінчення процесу адсорбції і, відповідно, після необов'язкового промивання (таким саме або іншим водним, або, за необхідності, лужним промивним розчином, таким як, зокрема, розведений розчин їдкого натру, наприклад, 0,5-2Н NaOH), відключають від водної магістралі, від'єднують від завантажувального пристрою і зберігають у призначеному для цього місці. Зберігання здійснюється при температурі навколишнього середовища, наприклад, від 15 до 30°С, у звичайному складі або у прохолодному приміщенні при температурі приблизно до 4°С. Якщо рідина в адсорбційній колонці захищена від заморожування, її можна зберігати також при більш низьких температурах, наприклад, сильно охолоджувати приблизно до -20°С. Завантажені колонки і, відповідно, картриджі транспортують регулярно з інтервалами від декількох днів до декількох тижнів з місць збору і зберігання до центрального пункту переробки, де гарантовані компетентна хімічна переробка й виділення кон'югованих естрогенів. D) Десорбція кон'югованого естрогену з адсорбційної колонки або, відповідно, картриджа Переробка завантажених колонок або, відповідно, картриджів відбувається одним з відомих для даного адсорбенту способів відділення від домішок й ізолювання СЕ. У випадку використання напівполярної адсорбувальної смоли типу Amberlite, наприклад, XAD 7, переробка може відбуватися як [описано в міжнародній патентній заявці WO 98/08526]. При цьому, наприклад, елюат із заданою швидкістю течії подається крізь попередньо нагріту до 45°С колонку або, відповідно, картридж. Елюат, який протікає, уловлюється фракціями. Перша фракція складає близько 1 об'єму шару, а фракції, що залишилися, відповідно, складають приблизно 0,75 об'єму шару. Окремі фракції досліджують за допомогою РХВР щодо вмісту у них естронсульфату, крезолу і HPMF. Першу фракцію збирають, доти поки елюат не змінить забарвлення від безбарвного до ясно-жовтого. Ця фракція зазвичай містить лише сліди естрогенсульфату. Після того, як елюат проходить перший об'єм шару, колір елюата змінюється до темно-коричневого. У наступних фракціях, від 2 до 4, міститься зазвичай від 80 до 98% загальної кількості естрогенів, адсорбованих на колонці. Фракції, які залишилися, містять лише незначну кількість естрогенсульфату. При цьому чітко помітна зміна інтенсивності забарвлення. За необхідності, залишкові фракції можна піддавати подальшій переробці після відгону розчинника і подальшого виділення СЕ. Основні фракції, які містять кон'югований естроген, мають високий уміст TS (TS= суха речовина, визначається за РХВР) естронсульфату і вільні від крезолу та HPMF, таким чином, ці фракції являють собою екстракти, уже готові для одержання галенових препаратів. Е) Регенерація колонок з адсорбувальною смолою Регенерація завантажених колонок і, відповідно, картриджів відбувається звичайним для даного адсорбенту способом. У випадку використання напівполярної адсорбувальної смоли типу Amberlite, наприклад, XAD 7, регенерація може відбуватися як [описано в міжнародній патентній заявці WO 98/08526]. Для регенерації колонку або, відповідно, картридж промивають, наприклад, спочатку один раз сумішшю етанол/вода, яка містить 50 вагових відсотків етанолу при рН12, потім 10-відсотковим водним розчином цитрату натрію і ще раз сумішшю етанол/вода і, нарешті, дистильованою водою. Уся регенерація відбувається для зазначеної у прикладі адсорбувальної смоли при температурі 45°С, при цьому регенерувальний розчин і промивний розчин також можна подавати до колонки або, відповідно, до картриджа знизу або згори Колонку або, відповідно, картридж можна завантажувати неодноразово, приблизно до 40 разів, і регенерувати знову. Приклад 2: Тести стабільності завантажених адсорбційних колонок для визначення можливості десорбції СЕ Для дослідження стабільності колонок, тобто стабільності адсорбованих СЕ (conjugated estrogens, кон'югованих естрогенів), проводили тести стабільності адсорбційних колонок, завантажених вихідною сечею. Для цього адсорбційні колонки завантажували як звичайно, потім адсорбувальну смолу ви тягали із колонки і зберігали при двох температурах різний час. Після спливання часу зберігання адсорбат вимивали й піддавали дослідженню на вміст у ньому СЕ і домішок. Одержаний результат порівнювали з результатами вимивання контрольних проб, тобто проб без зберігання. А) Проведення досліджень Адсорбція відбувалася в 3-літровій колонці, завантаженій відомим способом напівполярною адсорбувальною смолою типу XAD 7 (напівполярна поліакрилова адсорбувальна смола на основі складних ефірів, а саме Amberlite XAD-7 фірми «Rohm und Haas», розмір зерен від 0,3 до 1,2мм, дипольний момент 1,8 Дебая, середній діаметр пір 80 ангстрем, питома поверхня приблизно 450м 2/г сухої речовини). Для цього попередньо ультрафільтровану кобилячу сечу (походження з Польщі) у кількості 90л (=30 об'ємів шару) при кімнатній температурі зі швидкістю протікання 5 об'ємів шару/годину завантажували до колонки. Естрогени, які містяться в PMU, адсорбували цілком на такій завантаженій колонці з напівполярною адсорбувальною смолою Після завершення завантаження колонку з сечею кобил додатково промивали 3 літрами води і завантажену смолу витягали з колонки, розділяли на 10 проб по 300мл і їх переносили до дрібніших колонок. Одну пробу відкладали. Далі робили наступне: 1. Негайне елюювання контрольної проби, тобто без зберігання. 2 . Зберігання інших проб при 4°С або, відповідно, при 25°С. 3 . Елюювання проб 1 (4°С) і 2 (25°С) після тижневого зберігання. 4 . Елюювання проб 3 (4°С) і 4 (25°С) після двотижневого зберігання. 5 . Елюювання проб 5 (4°С) і 6 (25°С) після п'ятитижневого зберігання. 6 . Елюювання проб 7 (4°С) і 8 (25°С) після восьмитижневого зберігання. Елюювання здійснювали відомим способом, завантажену адсорбувальну смолу промивали спочатку водним розчином їдкого натру. Після кожного етапу промивання дана промивна рідина досліджувалася за допомогою РХВР на вміст у ній естронів (у вигляді сульфату), еквіліну, крезолу і HPMF. При елюацїї використовували лужну суміш вода/етанол (30 вагових відсотків, рН12) із додаванням їдкого натру, й елюювання смоли здійснювалося при температурі 45°С. Елюат збирали фракціями, й окремі фракції знову досліджували за допомогою РХВР на вміст у них естрону, крезолу і HPMF. Першу фракцію збирали, доти, поки елюат не змінював забарвлення із безбарвного на ясно-жовте Ця фракція містить лише сліди естрону (естрогенсульфату). Після того, як елюат проходить перший об'єм шару, колір елюата змінюється на інтенсивний темно-коричневий У наступних фракціях, з 2 по 4, міститься від 80 до 98% загальної кількості кон'югованих естрогенів, адсорбованих на колонці. Фракції, які залишилися при регенерації смоли (при нагріванні до 45°С, із дотриманням зазначеної послідовності - 50 вагових відсотків етанолу, рН12, 10 вагових відсотків цитрату натрію і вода), містять лише незначну кількість естрогенсульфату. При цьому чітко помітна зміна інтенсивності забарвлення. В) Результати Одержані результати тестів на стабільність колонок для окремих проб показані в таблицях з I.0 по I.9 і, відповідно, об'єднані в таблиці І.10 і пояснюються нижче. Завантаження колонки або, відповідно, картриджа сечею, див таблицю І.0, а також елюювання контрольної колонки, таблиця І.1, показують звичайний процес адсорбції і десорбції. Одержано підвищені значення для крезолу і НPMF у елюаті, що можна пояснити не зовсім ламінарним режимом течії в колонці або, відповідно, дуже високим вмістом крезолу у вихідній сечі, майже 1000мг/л. У таблицях з І.2 по І.9 наведені результати при елююванні після одно-, двох-, п'яти- і, відповідно, восьмитижневого зберігання. Головним чином, було встановлено, що адсорбовані гормони (СЕ) десорбують, як правило, кількісно. Зокрема, після тижневого терміну зберігання при 25°С, кількісна десорбція встановлюється тільки при 50% етаноловій регенерації, при цьому мова йде лише про десорбцію залишкових кількостей СЕ, і найбільша частина могла виділитися вже раніше, саме при десорбції. Залежність десорбції від часу і температури зберігання не встановлена, у всякому разі, вона може бути обумовлена лише неоптимальними умовами проходження в колонках малих розмірів. Однак, у всіх випадках елюат не містив крезол і HPMF. Для досягнення оптимальних результатів незалежно від терміну зберігання варто звернути увагу на оптимальне проходження колонки. Тому колонка або, відповідно, картриджі постійно мають бути під рідиною, тобто варто уникати сухого режиму. Результати після 5-тижневого зберігання, таблиці від 16 до 17, показали ефективний процес елюювання для температури 4°С, при Т=25°С компоненти гормонів у регенераті ще зустрічаються Уміст HPMF і крезолу в елюаті дуже незначний в обох випадках. Несподівано дуже гарні результати досягнуті також після тривалого зберігання, чудові результати для випадку восьмитижневого зберігання наведені в таблицях від І.8 до І.9, піки елюювання для естрону і еквіліну дуже круті й, відповідно, гострі, тобто обсяги елюата СЕ малі. Уміст крезолу і HPMF прямує до нуля. У таблиці І.10 наочно узагальнені результати всіх досліджень. Сума, наприклад, умісту естрону в елюаті та регенераті у всіх випадках складає приблизно 1055мг±4% і відповідає очікуваному балансу. У підсумку, було встановлено, що при термінах зберігання завантаженої смоли XAD-7 від одного до восьми тижнів при температурах 4°С і 25°С виявлені розходження параметрів елюату, висоти і ширини піків гормонів, проте, у цілому сумарний уміст гормонів в елюаті зберігається щодо вмісту естрону в діапазоні 1055мг±4%. З цього можна зробити висновок, що якісні розходження, які спостерігаються, можна пояснити в основному тільки неоднорідними умовами протікання при використанні малих колонок, а їхню появу можна усун ути у випадку використання колонок або картриджів відповідних розмірів, які визначаються практично. Приклад 3 Тести стабільності зі завантаженими адсорбційними колонками при визначенні кількості мікробів Мікробіологічна якість і придатність натуральних вихідних матеріалів для виготовлення фармацевтичних препаратів здобуває останнім часом усе більше значення. Тому здійснювалися аналізи для визначення кількості мікробів у пробах після п'яти- і, відповідно, восьмитижневого зберігання колонок за традиційною методикою (Pharmacoepia …). Результати визначення кількості мікробів наведеш в таблиці II. Загальну кількість мікробів при температурі зберігання 4°С можна вважати незначною. У випадку температури зберігання 25°С промивна вода колонок мала від 1,2 до 4,6×106 мікробів, у елюаті виявлено від 80 до 170 мікробів. Однак варто звернути увагу на те, що збережені адсорбційні колонки раніше не піддавалися ані промиванню, ані консервації, так що спочатку існувала підвищена небезпека утворення мікробів. При збереженні без охолодження рекомендується робити ґрунтовне промивання завантажених колонок щонайменше водою, бажана, однак, додаткова обробка стабілізуючими і, відповідно, промивними розчинами-консервантами, наприклад, розчином кухарської солі. Приклад 4; Тести стабільності сильно охолоджених, завантажених адсорбційних колонок Залежно від сезону й/або регіону в процесі зберігання або при транспортуванні завантажені колонки або, відповідно, картриджі можуть піддаватися впливу температури нижче точки замерзання, що може привести до небажаних наслідків, тому що водний вміст колонок і, відповідно, картриджів застигає. Відповідні дослідження показали, що процес заморожування, імовірно, негативно впливає на елюювання знову розморожених колонок або, відповідно, картриджів. Якщо термостатування колонок зробити не можна, або якщо зберігання відбувається при більш низьких температурах, для запобігання заморожування рекомендується робити останнє промивання не водою, а відповідними охолодними сумішами. А) Проведення досліджень Деякі з безлічі можливих охолодних сумішей для пояснення наведені в таблиці III.1., у наведених нижче дослідженнях був обраний розчин кухарської солі. При додаванні 23г NaCl на 100г води точка замерзання становить -21°С. Завантаження колонок проводили звичайним способом. Після закінчення завантаження сечею проводили промивання 3-ма об'ємами шару водою, після цього проводили промивання 2-ма об'ємами шару 33відсотковим розчином NaCl. Після цього колонку зберігали протягом 9 днів при -19°С у низькотемпературній холодильній камері. В) Результати Навіть через 9 днів зберігання при -19°С вміст колонок залишався рідким, а саме, без ознак можливого часткового замерзання. Переробка стовпчика, тобто основне промивання, елюювання і регенерація проходили нормально. Загальний уміст гормонів на TS становив приблизно 22 вагових %. Результати наведені в таблиці III.2. Негативні впливи високого вмісту NaCl на вміст СЕ і відділення крезолу і HPMF не були виявлені. У підсумку можна вважати, що стабілізація завантажених сечею колонок і, відповідно, картриджів за допомогою рідкої охолоджувальної суміші, наприклад, водним розчином кухарської солі, і зберігання з охолодженням, наприклад, до -20°С, навіть протягом від 1,5 до 2 тижнів, впливає добре. Уміст колонок і, відповідно, картриджів залишається рідким, переробка колонок і, відповідно, картриджів при виділенні СЕ промиванням, елюювання і регенерація проходять нормально. Негативний ефект не був зафіксований і при високому вмісті NaCl. Приклад 5; Концентрація і стабілізація сечі в практичному тесті A) Загальні відомості Практичний тест показав, що при достатньому вмісті гормону в сечі досягаються гарні результати не тільки в лабораторних умовах, але й в умовах виробництва Дослідження проводили так, як їх проводять в пунктах збору в будь-якому місці B) Проведення досліджень Свіжу сечу достатньої якості збирали на кінному заводі. Від 3 кобил збирали по від 15 до 20л сечі на день з кожної кобили протягом 10 днів, усього приблизно від 150 до 200л. Тому для адсорбції обраний 5-літровий адсорбційний стовпчик. Щоденне завантаження сечею, крім вихідних, проводилося в дослідженнях за наступним планом: Початок збору сечі у вихідні Понеділок: завантаження сечі за суботу, неділю і понеділок З вівторка до п'ятниці: завантаження сечі даного дня Понеділок: завантаження сечі за суботу, неділю і понеділок Вівторок: елюювання Завантаження сечі зі швидкістю завантаження приблизно 4,5 об'ємів шару/годину відбувалося безпосередньо на колонку, лише бавовняна свіча з границею поділу 20мкм служила фільтром грубого очищення. Між окремими завантаженнями жодне промивання водою не провадилося. У попередніх дослідженнях через бавовняну свічу можна подавати до 450л сечі без утрати тиску. Однак, у цьому практичному тесті фільтрація виявилася скрутною через несподівано високий уміст в осаді карбонату кальцію і/або муцину. Після від 40 до 50л відбувалося блокування з підвищенням тиску приблизно 4бар, що вимагало заміни фільтра. Тому, залежно від умісту карбонату кальцію і/або муцину, рекомендується додавати допоміжні фільтрувальні засоби. Оскільки свіча дозволяла пропускати осад >20мкм, добавок до адсорбувальних стовпчиків не робили. С) Результати Уміст гормонів Результати цього практичного тесту представлені в таблиці IV Уміст естронів і еквіліну в сирій сечі був досить високим і складав 123мг/л і, відповідно, 74мг/л, що відповідають сечі середньої і високої якості Несподівано високим виявився вміст у свіжій сечі крезолу 531мг/л, що не спостерігалося дотепер У цьому випадку варто враховува ти склад кормів Хоча, головним чином, переважає підвищений уміст крезолу, в одиничному випадку це може викликати ускладнення. Тому при переробці рекомендується робити більш тривале промивання лужним розчином, щоб мінімізувати вміст крезолу в етаноловому елюаті. В іншому адсорбція і десорбція проходили як звичайно. У елюаті явно виражена характеристика естрону й еквіліну. У елюаті 2 і 3 знаходиться більше 95% естрону/еквіліну. Уміст гормонів становить приблизно 30 вагових відсотків від TS. Таким чином, при дослідженнях підтверджені всі припущення, й у складних умовах досліджень досягнута бажана концентрація гормонів >15 вагових відсотків від TS.