Спосіб лікування і/або поліпшення дисемінованого внутрішньосудинного згортання крові

Реферат: Винахід стосується способу лікування і/або поліпшення дисемінованого внутрішньосудинного згортання крові (ДВЗ) та способу зниження імовірності смерті у пацієнтів, які страждають на ДВЗ, шляхом введення тромбомодуліну пацієнтам, що страждають дисемінованим внутрішньосудинним згортанням крові, у яких активність антитромбіну у плазмі становить 40 % або менше. UA 97961 C2 (12) UA 97961 C2 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ Даний винахід стосується терапевтично ефективного засобу для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, який як активний інгредієнт містить тромбомодулін. Даний винахід також стосується способу відбору пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, яким призначають тромбомодулін. ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Дисеміноване внутрішньосудинне згортання (надалі іноді скорочено ДВЗ) являє собою один з видів хвороб згортання, і є захворюванням, при якому утворюються великі кількості речовин, прискорюючих згортання крові, як результат пошкодження тканин, викликаного різними захворюваннями, так, що діяльність згущувальної системи надзвичайно посилена, і утворюються дрібні тромби в системі кровоносних судин, і вони забивають дрібні судини, і, в той же час, витрачаються тромбоцити або фактори згортання, необхідні для контролю кровотечі, тим самим спричиняючи аномальне згортання. У випадку ДВЗ, фактори згортання крові скупчуються в мікросудинах нирок і легенів, викликаючи ішемію, і, в результаті, в багатьох випадках має місце порушення циркуляції і шок. У зв'язку з цим, може спостерігатися прискорене дихання, диспное, тахікардія, брадикардія, похолодання кінцівок, олігурія, судоми і подібне. У деяких випадках, такий шоковий стан може закінчитися раптовою смертю. Одночасно, споживання факторів згортання і тромбоцитів приводить до кровотечі, в зв'язку з чим може мати місце багровіння на шкірі, петехії, гемоптоз, гематемезис, гематурія, кров в калі, носові кровотечі і подібне. Як терапевтичний засіб при ДВЗ використовувалися гепарин, антитромбін (який також називають антитромбін III; надалі іноді скорочено AT або AT III), і подібне. З іншого боку, тромбомодулін відомий як речовина, яка специфічно зв'язується з тромбіном, таким чином, інгібуючи його коагуляційну активність, і одночасно значною мірою стимулює здатність тромбіну активувати білок С. Також відомо, що тромбомодулін володіє потужною інгібуючою дією відносно згортання крові. Також було відомо, що тромбомодулін продовжує час згортання крові під дією тромбіну, або що тромбомодулін суппресує агрегацію тромбоцитів внаслідок дії тромбіну. Білок С являє собою залежний від вітаміну К білок, який грає важливу роль у фібрінолітичній системі згортання крові. Білок С активується під дією тромбіну, стаючи активованим білком С Було відомо, що активований білок С дезактивує активований фактор V згортання крові і активований фактор VIII згортання крові, і що активований білок С залучений до утворення активатора плазміногена, що володіє тромболітичною дією (непатентний документ 1). У зв'язку з цим, передбачалося, що тромбомодулін сприяє активації білка С під дією тромбіну, і, отже, що він застосовний як антикоагулянт або тромболітичний засіб. Також повідомлялося в експериментах на тваринах, що тромбомодулін є ефективним для лікування або профілактики захворювань, пов'язаних з підвищенням згортання крові (непатентний документ 2). Звичайним способом тромбомодулін був відкритий і одержаний у вигляді глікопротеїну, який експресується на ендотеліальних клітинах судин у тварин різних видів, в тому числі у людей, як типових представників, і згодом був успішно клонований. Іншими словами, ген-попередник тромбомодуліну людини, що містить сигнальний пептид, був клонований з бібліотеки кДНК легенів людини шляхом генної інженерії, і були проаналізовані всі генні послідовності тромбомодуліну. У результаті була з'ясована амінокислотна послідовність, що складається із 575 залишків, що містять сигнальний пептид (в основному, представлені 18 амінокислотних залишків) (патентний документ 1). Було відомо, що зрілий тромбомодулін, від якого відщепився сигнальний пептид, складається з 5 ділянок, а саме, N-кінцевої ділянки (амінокислоти 1-226: це положення визначене, коли передбачалося, що сигнальний пептид складається з 18 амінокислотних залишків, і також найбільш вірне і для інших ділянок), ділянки, що має шість EGF-подібних структур (амінокислоти 227-462), області О-глікозилування (амінокислоти 463498), трансмембранної області (амінокислоти 499-521), і внутрішньоцитоплазматичної області (амінокислоти 522-557), з N-кінцевої сторони зрілого пептиду. Також було відомо, що серед шести EGF-подібних структур, 4-а, 5-а, і 6-а частини EGF-подібних структур з N-кінцевої сторони (тобто мінімальні одиниці активності) в основному мають таку ж активність, як і повнорозмірний тромбомодулін (непатентний документ 3). За відсутності поверхнево-активної речовини повнорозмірний тромбомодулін майже нерозчинний. Отже, додання поверхнево-активної речовини є необхідним для одержання препарату тромбомодуліну. Навпаки, також існує розчинний тромбомодулін, який може повністю розчинятися навіть за відсутності поверхнево-активної речовини. Розчинний тромбомодулін може бути одержаний шляхом видалення щонайменше частини трасмембранної області або всій трансмембранної області. Наприклад, було підтверджено, що розчинний тромбомодулін, 1 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 що складається тільки з 3 областей, а саме, N-кінцевої області, області, що має шість EGFподібних структур, і області О-глікозилування (тобто, розчинний тромбомодулін, що має амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот 19-516 SEQ ID NO: 9), може бути одержаний шляхом застосування рекомбінантних технологій, і що цей рекомбінантний розчинний тромбомодулін має таку ж активність, що і нативний тромбомодулін (патентний документ 1). Крім того, існує декілька інших повідомлень, що стосуються розчинних тромбомодулінів (патентні документи 2-9). Також розчинний тромбомодулін, витягнутий з сечі людини, і подібний, був приведений як приклад нативних тромбомодулінів (Патентні документі 10 і 11). Як встановлено в багатьох випадках, внаслідок спонтанних мутацій або мутацій, що відбуваються при одержанні тромбомодулінів, поліморфні мутації були виявлені навіть в генах людини. У цей час, були ідентифіковані гени тромбомодуліну, в яких амінокислота в положенні 473 попередника тромбомодуліну людини, що має згадану вище амінокислотну послідовність, що складається з 575 амінокислотних залишків, змінена на Val або Ala. У нуклеотидній послідовності, що кодує цю амінокислоту, нуклеотид в положенні 1418 змінений на Τ або С (непатентний документ 4). Однак, ці два тромбомодуліни повністю ідентичні по активності і фізичним властивостям. Отже, можна передбачити, що вони є по суті ідентичними. Повідомлялося, що тромбомодулін надає дію при лікуванні ДВЗ (непатентний документ 5). Крім вищезазначених цільових використань, очікується, що тромбомодулін буде використовуватися при лікуванні і профілактиці різних захворювань, таких як гострий коронарний синдром (ACS), тромбоз, обструкція периферичних судин, облітеруючий артеріосклероз, васкуліт, функціональне порушення, що зустрічається після хірургічних операцій на серці, ускладнення, викликане трансплантацією органів, стенокардія, скороминущий ішемічний напад, токсикоз вагітних, діабет, VOD печінки (первинний тромбоз печінкових вен; наприклад, блискавичний гепатит, первинний тромбоз печінкових вен, що виникає після пересадки кісткового мозку), тромбоз глибоких вен (DVT), сепсис, і респіраторний дистрес синдром дорослих (ARDS). Патентний документ 1: Патентна публікація (Kokai) JP No. 64-6219 А (1989) Патентний документ 2: Патентна публікація (Kokai) JP No. 2-255699 А (1990) Патентний документ 3: Патентна публікація (Kokai) JP No. 3-133380 А (1991) Патентний документ 4: Патентна публікація (Kokai) JP No. 3-259084 А (1991) Патентний документ 5: Патентна публікація (Kokai) JP No. 4-210700 А (1992) Патентний документ 6: Патентна публікація (Kokai) JP No. 5-213998 А (1993) Патентний документ 7: WO92/00325 Патентний документ 8: WO92/03149 Патентний документ 9: WO93/15755 Патентний документ 10: Патентна публікація (Kokai) JP No. 3-86900 А (1991) Патентний документ 11: Патентна публікація (Kokai) JP No. 3-218399 А (1991) Непатентний документ 1: Koji Suzuki, Igaku no Ayumi (Progression of Medicines), Vol. 125, p. 901 (1983) Непатентний документ 2: К. Gomi et al, Blood 75., 1396-1399 (1990) Непатентний документ 3: Μ. Zushi et al., J. Biol. Chem., 246, 10351-10353 (1989) Непатентний документ 4: D. Ζ. Wen et al., Biochemistry, 26, 4350-4357 (1987) Непатентний документ 5: S. Μ. Bates et al., Br. J. of Pharmacol., 144, 1017-1028 (2005) ОПИС ВИНАХОДУ Задачі, що вирішуються винаходом Задачею даного винаходу є одержання терапевтично ефективного засобу для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, або спосіб лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ. Іншою задачею даного винаходу є розробка способу відбору пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, яким показано введення тромбомодуліну. Засоби для рішення поставлених задач Як засоби для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, в основному застосовувалася антикоагулянтна терапія з використанням антикоагулянта, або заміщувальна терапія з використанням концентрованих тромбоцитів або свіжої замороженої плазми. Основним симптомом ДВЗ є надмірна активація згущувальної системи крові. Таким чином, антикоагулянтна терапія для придушення такої надмірної активації широко проводилася паралельно з лікуванням основного захворювання. При лікуванні і/або поліпшенні стану при ДВЗ в основному використовувався гепарин і/або препарати AT. Вважалося, що антикоагулянтна дія гепарину виражається значним посиленням інгібуючої швидкості AT на фактор згортання (Majerus PW, Tollefsen DM. "Coagulants, thrombolytic agents, and anti-platelet agents" In: edited by Shuji Takaori, Hideomi Fukuda, and Akinori Akaike, Goodman & Gilman's The 2 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Pharmacological Basis of Therapeutics (10th ed), Tokyo, Hirokawa Shoten, Co., 2003, pp. 19371963). Таким чином, гепарин використовували для пацієнтів, що мають відносно високу активність плазменного AT, наприклад, активність плазменного AT приблизно 80% (Kenji Okajima, "Hanshusei kekkannai gyoko shokogun to tazoki fuzen (Disseminated intravascular coagulation syndrome and multiple organ failure)," Iyaku (Medicine and Drug) Journal Co., Ltd.). Більше того, препарат AT є стандартним засобом, що вводиться пацієнтам, у яких активність плазменного AT, наприклад, приблизно становить 70% або менше (анотація до Anthrobin P/Neuart, «Застосування і доза»). Спосіб лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, під дією посиленої активності плазменного AT для стимуляції антикоагулянтної дії в основному був схвалений. Крім того, при необхідності в той же час разом з таким препаратом AT може бути використаний гепарин. Отже, для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, переважно, щоб додавання проводили таким чином, щоб активність плазменного AT пацієнтів, страждаючих DIG, утримувалася на рівні, що складає щонайменше 70% або більш. Далі, в основному вважається, що підвищення активності плазменного AT є важливим для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ. У цих обставинах, автори даного винаходу виявили, що, несподівано, висока ефективність може бути досягнута у пацієнтів з низькою активністю плазменного AT менше 50%, завдяки чому здійснився даний винахід. Тобто, навіть занижуючи, цей препарат є високо ефективним у пацієнтів з ДВЗ, у яких активність плазменного AT складає менше 50%. Таким чином, автори винаходу одержали дивні результати, які не могли б собі представити навіть фахівці в цій галузі. Препарати AT як вихідну сировину одержують з крові людини, що дорого коштує. Якщо такі препарати AT насправді вводять пацієнтам, обов'язково повністю усунути ризик поширення інфекційного захворювання, викликаного застосуванням крові людини як вихідної сировини (анотація до Anthrobin P/Neuart, «Інструкції із застосування»). Таким чином, препарати AT до деякої міри є проблематичними. Більше того AT, що використовується як препарат крові, також був проблематичним з точки зору дорожнечі. Однак, даний винахід може надати переважний засіб, або засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, який вирішує вищезазначені проблеми. Зокрема, даний винахід містить наступні ознаки: [1] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, який вводять пацієнтам, що страждають від дисемінованого внутрішньосудинного згортання, у яких активність плазменного антитромбіну складає менше 50%; [2] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за пунктом [1], наведеним вище, в якому тромбомодулін є розчинним тромбомодуліном; [3] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за пунктом [1] або [2], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9 або 11; [3-2] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за пунктом [1] або [2], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 1 або 3; [3-3] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за пунктом [1] або [2], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 5 або 7; [3-4] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за пунктом [1] або [2], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 9 або 11; [4] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; 3 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 [4-2] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну; [4-3] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3; [4-4] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [4-5] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, або їх суміш; [4-6] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, або їх суміш; [4-7] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 3, або їх суміш; [4-8] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, або їх суміш; [4-9] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 3, або їх суміш; [5] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [5-2] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів[1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну; [5-3] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7; [5-4] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 4 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 або 7, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [5-5] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, або їх суміш; [5-6] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, або їх суміш; [5-7] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 7, або їх суміш; [5-8] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, або їх суміш; [5-9] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 7, або їх суміш; [6] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, пептид, що має амінокислотну послідовність, що містить заміну, делецію або додання однієї або декількох амінокислот відносно амінокислотної послідовності вказаного пептиду і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [6-2] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, або пептид, що має амінокислотну послідовність, що містить заміну, делецію або додання однієї або декількох амінокислот відносно амінокислотної послідовності вказаного пептиду і володіє активністю тромбомодуліну; [6-3] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11; [6-4] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, пептид, що має амінокислотну послідовність, що містить заміну, делецію або додання однієї або декількох амінокислот відносно амінокислотної послідовності вказаного пептиду і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [6-5] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, або їх суміш; [6-6] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін 5 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9, або їх суміш; [6-7] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11, або їх суміш; [6-8] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9, або їх суміш; [6-9] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9; [6-10] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11, або їх суміш; [6-11] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів [1], [2], і [3-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11; [7] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [6-11], наведених вище, де пацієнти, страждаючі дисемінованим внутрішньосудинним згортанням мають активність плазменного антитромбіну 40% або менше. Потрібно зазначити, що, при наявності процитованих номерів пунктів, наприклад, згадані вище з [1] по [6-11], і в тих випадках, коли такі процитовані номери пунктів додатково включають пункти з написаними через дефіс номерами, наприклад, згаданий вище [6-2], це означає, що такі пункти з написаними через дефіс номерами також цитуються. Те ж саме справедливе для згаданих нижче пунктів: [8] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [7], наведених вище, яке являє собою парентеральний препарат; [9] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [8], наведених вище, яке являє собою внутрішньовенний препарат; [10] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [9], наведених вище, який відрізняється тим, що його вводять в дозі від 0,02 до 0,08 мг/кг в день протягом 4 годин шляхом безперервної внутрішньовенної краплинної ін'єкції; [11] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [10], наведених вище, який відрізняється тим, що його не призначають в поєднанні з антитромбіном; [12] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [11], наведених вище, де дисеміноване внутрішньосудинне згортання виникає внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин або інфекційного захворювання. [12-1] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [11], наведених вище, де дисеміноване внутрішньосудинне згортання відбувається внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин. [12-2] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні за будь-яким з пунктів з [1] по [11], наведених вище, де дисеміноване внутрішньосудинне згортання відбувається внаслідок інфекційного захворювання. 6 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [12-3] Засіб для зниження імовірності смертельних випадків у пацієнтів людей, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, який як активний інгредієнт містить тромбомодулін і який призначають пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням у яких активність плазменного антитромбіну складає менше 50%; [12-4] Засіб за пунктом [12-3], наведеним вище, в якому тромбомодулін являє собою пептид, описаний в одному з пунктів з [1] по [6-11], наведених вище; [12-5] Засіб за пунктом [12-3], наведеним вище, який охарактеризований в будь-якому з пунктів з [1] по [12-2], наведених вище; [13] Спосіб відбору пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, яким призначають тромбомодулін, що передбачає: вимірювання активності плазменного антитромбіну у пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням; відбір пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, у яких активність антитромбіну складає менше 50%; встановлення, що ці особи є пацієнтами, страждаючими дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, яким призначають тромбомодулін. [13-2] Спосіб за пунктом [13], наведеним вище, для відбору пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, яким призначають тромбомодулін, де тромбомодулін являє собою пептид, описаний в одному з пунктів з [1] по [6-11], наведених вище; [13-3] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, який призначають пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням після вимірювання у них активності плазменного антитромбіну; [13-4] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, який призначають пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, в тих випадках, коли виміряна активність їх плазменного антитромбіну і активність плазменного антитромбіну складає менше 50%; [14] Спосіб лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, який передбачає введення тромбомодуліну пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, у яких активність плазменного антитромбіну складає менше 50%; [15] Спосіб за пунктом [14], наведеним вище, в якому вказаним тромбомодуліном є розчинний тромбомодулін; [16] Спосіб за пунктом [14] або [15], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9 або 11; [16-2] Спосіб за пунктом [14] або [15], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 1 або 3; [16-3] Спосіб за пунктом [14] або [15], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 5 або 7; [16-4] Спосіб за пунктом [14] або [15], наведеним вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, одержаний з трансформованих клітин, одержаних шляхом трансфекції клітин-хазяїв ДНК, що кодують амінокислотну послідовність, приведену в SEQ ID NO: 9 або 11; [17] Спосіб за будь-яким з пунктів [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [17-2] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну; [17-3] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3; 7 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 [17-4] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [17-5] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, або їх суміш; [17-6] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, або їх суміш; [17-7] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 3, або їх суміш; [17-8] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, або їх суміш; [17-9] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-2], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: З, або їх суміш; [18] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [18-2] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну; [18-3] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7; [18-4] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [18-5] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, або їх суміш; [18-6] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, або їх суміш; [18-7] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 7, або їх суміш; [18-8] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, або їх суміш; 8 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [18-9] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-3], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, або їх суміш; [19] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [19-2] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну; [19-3] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11; [19-4] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, пептид, що має гомологічну мутантну послідовність вказаної послідовності і володіє активністю тромбомодуліну, або їх суміш; [19-5] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, або їх суміш; [19-6] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9, або їх суміш; [19-7] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що має послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11, або їх суміш; [19-8] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9, або їх суміш; [19-9] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9; [19-10] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11, або їх суміш; [19-11] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14], [15] і [16-4], наведених вище, в якому вказаний тромбомодулін являє собою пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11; [20] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [19-11], наведених вище, що передбачає введення тромбомодуліну пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, у яких активність плазменного антитромбіну становить 40% або менше; [21] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [20], наведених вище, в якому тромбомодулін вводять парентерально; [22] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [21], наведених вище, в якому тромбомодулін вводять внутрішньовенно; 9 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [23] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [22], наведених вище, в якому тромбомодулін вводять в дозі від 0,02 до 0,08 мг/кг на день протягом 4 годин шляхом безперервної внутрішньовенної краплинної інфузії; [24] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [23], наведених вище, який відрізняється тим, що тромбомодулін вводять без поєднання з антитромбіном; [25] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [24], наведених вище, де дисеміноване внутрішньосудинне згортання відбувається внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин або інфекційного захворювання. [25-1] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [24], наведених вище, де дисеміноване внутрішньосудинне згортання відбувається внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин. [25-2] Спосіб за будь-яким з пунктів з [14] по [24], наведених вище, де дисеміноване внутрішньосудинне згортання відбувається внаслідок інфекційного захворювання. [26] Спосіб зменшення імовірності смертельних випадків у людей пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, що передбачає введення тромбомодуліну пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, у яких активність плазменного антитромбіну складає менше 50%; [26-2] Спосіб за пунктом [26], наведеним вище, де тромбомодулін являє собою пептид, описаний в одному з пунктів з [1] по [6-11], наведених вище; [26-3] Спосіб за пунктом [26], наведеним вище, з характеристиками, описаними в будь-якому з пунктів з [1] по [25-2], наведених вище; [27] Спосіб лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, що передбачає введення тромбомодуліну пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням після вимірювання активності їх плазменного антитромбіну; [27-2] Спосіб лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, що передбачає введення тромбомодуліну пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, в тих випадках, коли активність їх плазменного антитромбіну виміряна і активність плазменного антитромбіну складає менше 50%. Технічний результат винаходу Застосовуючи препарат, що містить тромбомодулін, згідно з даним винаходом, можна ефективно лікувати і/або полегшувати симптоми ДВЗ у пацієнтів з активністю плазменного AT менше 50%, переважно без поєднання з AT. ПЕРЕВАЖНИЙ СПОСІБ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ Даний винахід буде конкретно описаний нижче. Даний винахід стосується засобу для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні (ДВЗ), що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, який вводять пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, у яких активність плазменного антитромбіну складає менше 50%. Тобто, засіб для лікування і/або профілактики дисемінованого внутрішньосудинного згортання згідно з даним винаходом являє собою засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні у пацієнтів, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, у яких активність плазменного антитромбіну складає менше 50%. Більше того, даний винахід також стосується засобу для зниження імовірності летальних виходів у пацієнтів людей, страждаючих дисемінованим внутрішньосудинним згортанням. Переважним результатом, одержаним завдяки лікуванню і/або поліпшенню стану при ДВЗ, є «запобігання летальним виходам у пацієнтів, пов'язаних з ДВЗ», наприклад. Крім того, іншим переважним результатом є «запобігання погіршенню загального стану пацієнтів, пов'язаному з ДВЗ». ДВЗ являє собою захворювання або синдром, при якому величезні кількості речовин, прискорюючих згортання крові утворюються внаслідок пошкодження тканин, викликаного різними захворюваннями, таким чином, функція системи згортання надмірно посилена, і дрібні тромби утворюються в системі кровоносних судин (утворення мікротромбів), і вони забивають дрібні судини, і в той же час, витрачаються тромбоцити або фактори згортання, необхідні для контролю кровотечі, тим самим спричиняючи аномальне згортання. Зокрема, внаслідок утворення фібрину в кровоносній судині, відбувається кровотеча внаслідок коагулопатії споживання, або органна недостатність внаслідок утворення мікротромбів. ДВЗ також називають синдромом дисемінованого внутрішньосудинного згортання або синдромом дифузного внутрішньосудинного згортання. У тому випадку, якщо основним захворюванням є злоякісна пухлина, наприклад, малігнізація гемопоетичних клітин або солідна саркома, коли тканинний фактор, що експресується 10 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 пухлинних клітинах має можливість контактувати з кров'ю, система згортання крові надмірно активується, викликаючи ДВЗ. Більше того, ДВЗ також може бути викликано синдромом системної запальної реакції (надалі іноді скорочено SIRS), яка відбувається внаслідок важкого, інфекційного або неінфекційного, перебігу хвороби. SIRS є станом, викликаним прискореним утворенням запальних цитокінів, що супроводжує серйозні пошкодження тканин або важкі інфекційні захворювання. Якщо ця реакція стає надмірною, ДВЗ викликається активацією нейтрофілів або активацією ендотеліальних клітин судин. Іншими словами, цей стан є попередньою стадією ДВЗ (надалі іноді скорочено преДВЗ), і засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом може бути ефективно використаний при преДВЗ. Таким чином, цільове використання засобу для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом також включає в себе лікування і/або поліпшення стану при преДВЗ. ДВЗ має різні типи клінічних симптомів, в залежності від типу основного патогенетичного стану. Крім спостереження кровотечі або органних симптомів, переважний спосіб діагностики захворювання як ДВЗ, включає реєстрацію показника ДВЗ, виходячи з декількох величин, що тестуються, як описано нижче, а потім діагностування захворювання як ДВЗ, по досягненні показником ДВЗ певного рівня. Приклади таких показників, що тестуються, включають кількість тромбоцитів, концентрацію фібрину/продукту розпаду фібриногену (надалі іноді скорочено FDP), що розпадається під дією плазміну, концентрацію D-димера, концентрацію фібриногену і протромбіновий час. Більше того, також можна діагностувати певний стан як преДВЗ на основі зменшення тромбоцитів, збільшення концентрації D-димера або FDP, і т.д. (Masao Nakagawa, "Search report regarding use of criteria of disseminated intravascular coagulation (DIC)," Research Study Team of Intractable Disease (Blood Coagulation Abnormality), the Ministry of Health and Welfare, Study report 1999, 1999: 65-72; Katsumi Deguchi, "Tentative plan regarding standards for initiation of early treatment of DIC, " Research Study Team of Intractable Disease (Blood Coagulation Abnormality), the Ministry of Health and Welfare, Study report 1999, 1999: 73-77; і Katsumi Nakagawa & Hajime Tsuji, "Current diagnosis of DIC Reports on results of inquiry survey" Clinical Blood) (1999, 40: 362-364). Крім того, також можна діагностувати певний стан як преДВЗ, шляхом вимірювання концентрації розчинного фібрину в крові, або концентрації в крові комплексу тромбін-антитромбін. Конкретні приклади критеріїв показників ДВЗ включають в себе явні критерії ДВЗ (Taylor FB et al., Thromb Haemost 2001: 86: 1327-1330), критерії гострої фази ДВЗ (Gando S. et al., Clin Appl Thromb Hemost 2005: 11(1): 71-76), і критерії ДВЗ Міністерства охорони здоров'я і соціального забезпечення (Nobuo Aoki & Jun Hasegawa, "Revision of the chapter 'Auxiliary test results and findings for the diagnosis' in DIC criteria," Research Study Team of Intractable Disease (Blood Coagulation Abnormality), Ministry of Health and Welfare, Study report 1992, 1988: pp. 37-41). Спосіб діагностики захворювання як ДВЗ конкретно не обмежений, за умови, що це згаданий вище спосіб діагностики. Переважним є спосіб діагностики, що передбачає реєстрацію показників ДВЗ. Крім того, з точки зору терапевтичних ефектів, вартості медичного догляду, і якості життя пацієнтів, при необхідності раннього лікування ДВЗ, існує інший варіант здійснення, в якому переважно проводиться діагностика преДВЗ. Як діагностичні способи, що передбачають реєстрацію показників ДВЗ, існує інший спосіб діагностики, що передбачає реєстрацію аналогічних показників ДВЗ, а також згаданий вище спосіб діагностики. Тип ДВЗ, при якому може бути призначений засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом, конкретно не обмежений. Однак, засіб згідно з даним винаходом більш переважно застосовувати при ДВЗ, що відбувається внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин або ДВЗ, що відбувається внаслідок інфекційного захворювання, і більш переважно, при ДВЗ внаслідок інфекційного захворювання. Конкретним прикладом ДВЗ внаслідок інфекційного захворювання переважно є ДВЗ внаслідок сепсису. В іншому переважному варіанті здійснення засіб згідно з даним винаходом також застосовують при ДВЗ внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин. Засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом також може бути використаний при сепсисі. Сепсис також може розглядатися як SIRS, що відбувається внаслідок важкого інфекційного клінічного перебігу інфекційного захворювання. Отже, сепсис тісно пов'язаний з ДВЗ, викликаним інфекційним захворюванням. Сепсис часто протікає з ДВЗ. Можуть бути випадки, в яких засіб згідно з даним винаходом може бути використаний для пацієнтів і з сепсисом, і з ДВЗ. Тобто, в даному винаході, цей засіб може бути використаний для 11 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 пацієнтів або з сепсисом, або з ДВЗ, або пацієнтів як з сепсисом, так і з ДВЗ, або для пацієнтів, у яких підозрюють наявність сепсису і/або ДВЗ. Сепсис був відомий як важке системне інфекційне захворювання, яке виникає внаслідок безперервної або періодичної інфільтрації мікроорганізмів з осередку інфекції в кров, як результат такого захворювання інфекційне захворювання, злоякісна пухлина, цироз печінки, ниркова недостатність, діабет або патологія родів, або лікування пошкодження або захворювань, наприклад, постійних катетерів, пристроїв для трансфузії розчинів, діалізу або трахеостоми. Якщо симптоми цього захворювання прогресують, септичний шок індукує системний шок, а саме, шляхом різкого падіння кров'яного тиску або недостатності периферичного кровообігу. Після цього поширення порушення на важливі органи, такі як легені, нирки, печінка, серце, травний тракт і центральну нервову систему приводить до летального виходу. Більше того, як ускладнення сепсису має місце індукований ДВЗ або респіраторний дистрес синдром дорослих (ARDS), що характеризуються інтеретиціальним набряком легенів, кровотечею або гострою дихальною недостатністю, викликаною порушенням роботи легеневих капілярів, пов'язаної з активацією нейтрофілів і міграцією і накопиченням їх в паренхімі легенів. Прогноз надто поганий. Існує декілька способів діагностики такого захворювання як сепсис. Такі способи узагальнені у Levy Μ. et al., Crit. Care. Med., 31: 1250-1256. Приклади способів діагностики сепсису включають в себе способи діагностики захворювання як сепсису лікарями і способи, що використовують тестовані величини і подібні. Прикладом останніх способів є спосіб діагностики захворювання як сепсису, який передбачає діагностику захворювання як SIRS, в тих випадках, коли виконувалися два з наступних чотирьох пунктів ((1) температура тіла >38°С або 90/хв., (3) частота дихання >20/хв. або потрібна штучна 3 3 вентиляція легенів, і (4) кількість лейкоцитів >12000/мм або 10%), і потім діагностування SIRS як сепсис, в тих випадках, коли було показано, або передбачено, що причиною захворювання є мікроорганізм [LaRosa S., домашня сторінка Cleveland Clinic]. Спосіб, аналогічний цьому способу описаний в Members of the American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine Consensus Conference: Crit Care Med, 20, 864-874 (1992).) Приклади станів пацієнтів з сепсисом включають в себе бактеріемію, септицемію, синдром системної запальної реакції (SIRS), септицемію (яка являє собою SIRS, при якому було показано, або передбачено, що причиною захворювання є мікроорганізм), важку септицемію, септичний шок, некупований септичний шок і синдром поліорганної дисфункції (який в подальшому іноді називається MODS) (Harrison's Principles of Internal Medicine, original article 15th edition, 124: pp. 828-833, Medical Science International). Кожний із згаданих вище станів проілюстрований як симптом, при якому ефективно використовується терапевтичний і/або поліпшуючий стан засіб згідно з даним винаходом. Як бактеріемія приведений приклад стану, при якому наявність бактерій в крові підтверджена позитивною гемокультурою. Як септицемія приведений приклад стану, при якому підтверджена наявність в крові токсинів мікроорганізмів або інших токсинів. Як синдром системної запальної реакції (SIRS), приведений приклад попередньої стадії ДВЗ, як описано вище. Як важкий сепсис приведений приклад сепсису, що супроводжується одним або декількома симптомами, вибраними з органної недостатності і гіпотензії, таких як метаболічний ацидоз, гостра енцефалопатія, олігурія, гіпоксемія і дисеміноване внутрішньосудинне згортання. Як септичний шок приведений приклад стану, який включає в себе низький кров'яний тиск (кров'яний тиск 90 мм рт. ст. або менше, або кров'яний тиск, який становить 40 мм рт. ст. або менше звичайного кров'яного тиску), який не реагує на реанімаційні заходи з використанням інфузійного розчину, і який супроводжується органною недостатністю. Як некупований септичний шок приведений приклад септичного шоку, який продовжується протягом 1 години або більше і не реагує на фактор, що підвищує кров'яний тиск, який містить інфузійний розчин. Як синдром поліорганної дисфункції (MODS) приведений приклад захворювання, яке супроводжується недостатністю одного або декількох органів і вимагає медичного втручання для підтримки гомеостазу. Засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом може бути ефективно використаний у пацієнтів з низькою активністю AT. Термін «пацієнти з низькою активністю AT» використовується для позначення пацієнтів, у який активність плазменного AT нижче, ніж у здорових людей (70% або менше). Як таких пацієнтів з низькою активністю AT 12 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 приводять приклади пацієнтів з природженим дефіцитом AT і пацієнтів з гострою недостатністю AT. Пацієнти з природженим дефіцитом AT означають пацієнтів, у яких активність AT природно нижче активності у здорових людей (приблизно від 35% до 70%). З іншого боку, пацієнти з гострою недостатністю AT означають пацієнтів, у яких активність AT знижена до 70% або менше, ніж у здорових людей, після народження. Конкретні причини зниження активності AT після народження включають в себе захворювання печінки, такі як хронічна печінкова недостатність, післяопераційні стани, шок, важкі інфекційні захворювання, захворювання нирок, таке як нефротичний синдром, захворювання травної системи, таке як запальне захворювання кишечнику, зниження активності AT внаслідок дії гепарину або подібного, зниження активності AT внаслідок старіння, у недоношених новонароджених, при діабеті, хворобі Бехчета і порушенні харчування. У даному винаході, однак, конкретно не обмежено, чи є захворювання ДВЗ у пацієнтів з низькою активністю AT природженим, або це захворювання є набутим після народження. Раса таких пацієнтів конкретно не обмежена. Переважними є японці. Серед інших, симптоми ДВЗ у пацієнтів з активністю плазменного AT менше 50% можна ефективно лікувати і/або полегшити, використовуючи засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін. Активність AT визначається як активність нейтралізуючої згущувальної активності тромбіну або активованого фактора X. В основному, активність AT вказується як відносна величина до активності AT, одержаної з плазми здорової дорослої людини (що надалі називається нормальною плазмою). Тип нормальної плазми конкретно не обмежений, за умови, що вона являє собою нормальну плазму, яка традиційно використовується фахівцями в даній галузі. Можуть бути використані міжнародні стандартні продукти нормальної плазми (зроблені NIBSC), які були затверджені Експертним комітетом по біологічній стандартизації (Expert Committee on Biological Standardization) (надалі іноді скорочено ECBS) Всесвітньої організації охорони здоров'я (World Health Organization) (WHO), а потім контролювалися і розповсюджувалися Національним інститутом з біологічних стандартів і контролю (National Institute for Biological Standards and Control) (надалі іноді скорочено NIBSC). Більше того, в іншому переважному прикладі, також може бути використана комерційно доступна стандартна плазма, активність AT якої була скоригована з використанням міжнародних стандартних продуктів NIBSC (наприклад, стандартної плазми Комітету по науці і стандартизації (Scientific and Standardization Committee) (надалі іноді скорочено SSC) і Міжнародним товариством по тромбозу і гемостазу (надалі іноді скорочено ISTH)). Більше того, також може бути використана нормальна плазма, включена із загальною AT активністю в набір для вимірювань, або нормальна плазма, призначена для такого набору для вимірювання активності AT. Як таку нормальну плазму, включену із загальною AT активністю в набір для вимірювань, або нормальну плазму, призначену для набору для вимірювання активності AT, перевалено використовують препарат нормальної плазми "Daiichi" (Daiichi Kagaku Co., Ltd.). У деяких випадках, активність AT зразка плазми, виміряна з використанням такої нормальної плазми переважно може бути перетворена в активність AT, одержану з використанням як стандарту, нормальної плазми, яка є міжнародним стандартним продуктом NIBSC. Більш переважно, активність AT може бути одержана шляхом перетворення її в активність AT, одержану з використанням як стандарту препарату нормальної плазми "Daiichi" (Daiichi Kagaku Co., Ltd.). Як нормальну плазму переважно використовують міжнародний стандартний продукт від NIBSC. В іншому варіанті здійснення, переважно використовують комерційно доступну стандартну плазму, AT активність якої скоригована з використанням міжнародного стандартного продукту від NIBSC. У більш переважному варіанті здійснення, препарат нормальної плазми "Daiichi" (Daiichi Kagaku Co., Ltd.) використовують як таку нормальну плазму. Наприклад, коли активність AT в плазмі становить 50%, це означає, що співвідношення активності AT в плазмі до активності AT у вищезазначеній плазмі становить 50%. Для ефективного лікування і/або ослаблення симптомів ДВЗ, активність плазменного AT пацієнтів з ДВЗ конкретно не обмежена, за умови, що вона менше 50%. Верхня межа активності плазменного AT переважно становить 48% або ' менше, більш переважно 46% або менше, більш переважно 44% або менше, j особливо переважно 42% або менше, і найбільш переважно 40% або менше. З іншого боку, нижня межа активності плазменного AT конкретно не обмежена, за умови, що він дорівнює або вище за межу визначення способу вимірювання. Наприклад, він становить 0,1% або більше, переважно 10% або більше, більш переважно 15% або більше, ще більш переважно 20% або більше, і особливо переважно 25% або більше. Беручи до уваги активність AT групи пацієнтів у випробувальному прикладі 1 в розділі приклади, нижня межа активності плазменного AT найбільш переважно становить 30% або більше. 13 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Більше того, даний винахід стосується засобу для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, який призначають пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням після вимірювання активності їх плазменного антитромбіну. Тип засобу для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні згідно з даним винаходом конкретно не обмежений, за умови, що цей засіб призначають після вимірювання активності плазменного антитромбіну у пацієнтів. Переважний засіб для лікування і/або поліпшення стану при дисемінованому внутрішньосудинному згортанні, який призначають пацієнтам, страждаючим дисемінованим внутрішньосудинним згортанням, в тих випадках, коли виміряна активність антитромбіну складає менше 50%. Таким чином, призначення тромбомодуліна пацієнту, страждаючому дисемінованим внутрішньосудинним згортанням після вимірювання активності його антитромбіну, є переважним, щоб засіб мав можливість в достатній мірі виявити свою дію. Крім того, також можна призначати засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом пацієнтам з низькою активністю AT, яка була знижена внаслідок захворювань печінки, таких як хронічна печінкова недостатність, післяопераційні стани, шок, важке інфекційне захворювання, і т.д. Було відомо, що тромбомодулін, що використовується в даному винаході володіє дією по (1) селективному зв'язуванню з тромбіном і (2) сприяє активації білка С, викликаної тромбіном. Крім того, переважно, щоб представлений тромбомодулін в основному володів (3) дією по подовженню часу згортання під дією тромбіну і/або (4) дією для супресії агрегації тромбоцитів, викликаної тромбіном. Таку дію тромбомодуліну можна назвати активністю тромбомодуліну. Як такою активністю тромбомодуліну, тромбомодулін переважно володіє дією в (1) і (2) випадках, наведених вище, і більш переважно володіє всіма діями приведених вище випадків з (1) по (4). Як дією по стимуляції активації білка С, викликаної тромбіном, рівень активності дії по стимуляції білка С або наявності або відсутності такої дії, легко можна підтвердити застосуванням способів дослідження, дохідливо описаних в різних видах відомих публікацій, в тому числі в патентній публікації (Kokai) JP No. 64-6219 А (1989). Більше того, дія по подовженню часу згортання, викликаного тромбіном, або дія по супресії агрегації тромбоцитів, викликаної тромбіном, також можна підтвердити таким же чином, вказаним вище. Тип тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, конкретно не обмежений, за умови, що він володіє тромбомодулюючою активністю. Переважно він являє собою розчинний тромбомодулін. Як переважні приклади розчинності такого розчинного тромбомодуліну, він розчиняється у воді, наприклад, дистильованій воді, що використовується для ін'єкцій (за відсутності поверхнево-активної речовини, такої як Тритон Х-100 або полідоканол, і, як правило, навколо нейтрального діапазону) в кількості 1 мг/мл або більше або 10 мг/мл або більше; переважно 15 мг/мл або більше або 17 мг/мл або більше; більш переважно 20 мг/мл або більше, 25 мг/мл або більше, або 30 мг/мл або більше; і особливо переважно 60 мг/мл або більше. У деяких випадках, такий розчинний тромбомодулін розчиняється у воді, в кількості 80 мг/мл або більше або 100 мг/мл або більше. Для того щоб однозначно визначити, чи був розчинений у воді розчинний тромбомодулін, чи ні, після його розчинення у воді, воду оглядають неозброєним оком відразу ж при денному світлі в положенні освітлення приблизно 1000, наприклад. Якщо вода виглядає прозорою і не містить нерозчинних речовин, до тієї міри, що їх явно видно, це може бути ясною вказівкою на те, що розчинний тромбомодулін розчинився у воді. Це також можна підтвердити шляхом фільтрування води і дослідження наявності або відсутності залишку. Тромбомодулін, що використовується в даному винаході, переважно містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, яка була відома як центральна частина тромбомодулюючої активності тромбомодуліну людини. Амінокислотна послідовність представленого тромбомодуліну конкретно не обмежена, за умови, що вона містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1. Амінокислотна послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 описаної вище амінокислотної послідовності, показаній в SEQ ID NO: 1, може бути природно або штучно змінена, за умови, що вона володіє дією по стимуляції активації білка С, викликаної тромбіном, а саме, активністю тромбомодуліну. Іншими словами, амінокислотна послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132, може містити заміну, делецію або додання однієї або декількох амінокислот відносно амінокислотної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 1. Прийнятний 14 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 рівень змін конкретно не обмежений, за умови, що згадана вище амінокислотна послідовність володіє активністю тромбомодуліну. Змінена амінокислотна послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, гомологічна, наприклад, на 50% або більше, переважно 70% або більше, більш переважно 80% або більше, ще більш переважно 90% або більше, особливо переважно 95% або більше, і найбільш переважно 98% або більше, початкової амінокислотної послідовності. Така амінокислотна послідовність називається гомологічною мутантною послідовністю. Як описано далі, таку мутантну амінокислотну послідовність легко можна одержати загальноприйнятим генно-інженерним способом. В амінокислотній послідовності, показаній SEQ ID NO: 3, Val, який являє собою амінокислоту в положенні 125 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, був замінений на Ala. Тромбомодулін, що використовується в даному винаході, також переважно містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 3. Таким чином, тип тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, конкретно не обмежений, за умови, що він має щонайменше амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, або мутантну послідовність гомологічну згаданої вище послідовності, і містить, щонайменше пептидну послідовність, що володіє активністю тромбомодуліну. Переважні приклади представленого тромбомодуліну включають в себе пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, і пептид, що складається з мутантної послідовності, гомологічної згаданій вище послідовності, і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. Пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, є більш переважним. Більше того, в іншому більш переважному варіанті здійснення також може застосовуватися пептид, що складається з мутантної послідовності, гомологічної амінокислотній послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 або в положеннях з 17 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3, і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. В іншому варіанті здійснення, тромбомодулін, що використовується в даному винаході, переважно містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5. Тип представленого тромбомодуліну в цьому варіанті здійснення конкретно не обмежений, за умови, що він містить таку амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5. Амінокислотна послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 згаданої вище амінокислотної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 5, може бути гомологічно мутована, за умови, що вона має дію по стимуляції активації білка С, викликаної тромбіном, а саме, активністю тромбомодуліну. В амінокислотній послідовності, показаній в SEQ ID NO: 7, Val, який являє собою амінокислоту в положенні 473 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, був замінений на Ala. Тромбомодулін, що використовується в даному винаході, також переважно містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 7. Таким чином, тип тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, конкретно не обмежений, за умови, що він має щонайменше амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, або мутантну послідовність, гомологічну згаданій вище послідовності, і містить щонайменше пептидну послідовність, що володіє активністю тромбомодуліну. Переважні приклади представленого тромбомодуліну включають в себе пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, і пептид, що складається з мутантної послідовності, гомологічній згаданій вище послідовності і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. Пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, є більш переважним. Більше того, в ще більш переважному варіанті здійснення також можна застосовувати пептид, що складається з мутантної послідовності, гомологічній амінокислотній послідовності, що складається з 15 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 амінокислот в положеннях з 19 по 480 або в положеннях з 17 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. У додатковому варіанті здійснення, тромбомодулін, що використовується в даному винаході, переважно містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9. Тип представленого тромбомодуліну в цьому варіанті здійснення конкретно не обмежений, за умови, що він містить таку амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9. Амінокислотна послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 згаданої вище амінокислотної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 9, може бути гомологічно мутована, за умови, що вона володіє дією по стимуляції активації білка С, викликаної тромбіном, а саме, активністю тромбомодуліну. В амінокислотній послідовності, показаній в SEQ ID NO: 11, Val, який являє собою амінокислоту в положенні 473 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9, був замінений на Ala. Тромбомодулін, що використовується в даному винаході, також переважно містить амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11. Таким чином, тип тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, конкретно не обмежений, за умови, що він має, щонайменше, амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, або пептидну послідовність, що має мутантну послідовність гомологічну згаданійвище послідовності, і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. Більш переважні приклади представленого тромбомодуліну включають в себе пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, і пептид, що складається з мутантної послідовності, гомологічної згаданій вище послідовності, і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. Пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 є особливо переважним. Крім того, переважним прикладом також є їх суміш. Більше того, в іншому особливо переважному варіанті здійснення, також може використовуватися пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11. їх суміш також є переважним прикладом тромбомодуліну згідно з даним винаходом. Додатково іншим переважним прикладом представленого тромбомодуліну також є пептид, що складається з гомологічної мутантної послідовності з вищезазначених, і що володіє щонайменше активністю тромбомодуліну. Пептид, що має гомологічну мутантну послідовність, описаний вище. Такий пептид, що має гомологічну мутантну послідовність, також містить пептид, який може містити заміну, делецію або додання однієї або більше, а саме; однієї або багатьох, і переважно декількох (наприклад, від 1 до 20, переважно від 1 до 10, більш переважно від 1 до 5, і особливо переважно від 1 до 3) амінокислот в амінокислотній послідовності цільового пептиду. Прийнятний рівень зміни конкретно не обмежений, за умови, що цей пептид володіє активністю тромбомодуліну. Мутантний пептид демонструє гомологію, наприклад, 50% або більше, переважно 70% або більше, більш переважно 80% або більше, ще більш переважно 90% або більше, особливо переважно 95% або більше, і найбільш переважно 98% або більше, по рівню амінокислотної послідовності з цільовим пептидом. Більше того, інші переважні приклади тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, включають в себе пептид, що складається з послідовності (462 амінокислотних залишки), показаної в SEQ ID NO: 14, пептид, що складається з послідовності (272 амінокислотних залишки), показаної в SEQ ID NO: 8, і пептид, що складається з послідовності (236 амінокислотних залишків), показаної в SEQ ID NO: 6, які описані в патентній публікації (Kokai) JP No. 64-6219 (1989) А. Тип тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, конкретно не обмежений, за умови, що він має щонайменше амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1 або 3. Серед інших переважним є пептид, що має щонайменше амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, 16 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 представленої в SEQ ID NO: 5 або 7, і більш переважним є пептид, що має щонайменше амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11. Більш переважним прикладом пептиду, що має щонайменше амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, є пептид, що складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11. Крім того, суміш, одержана з таких пептидів, з яких кожний складається з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, також є переважним прикладом тромбомодуліну згідно з даним винаходом. У випадку згаданої вище суміші, співвідношення компонентів суміші між пептидом, який починається з положення 17 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11 і пептидом, який починається з положення 19 вказаних вище послідовностей, становить (30: 70) - (50: 50), і переважно (35: 65) -(45: 55). Більше того, співвідношення компонентів суміші між пептидом, який закінчується в положенні 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 або 11, і пептидом, який закінчується в положенні 516, становить (70: 30) - (90: 10), і переважно (75: 25) - (85: 15). Співвідношення таких пептидов в суміші може бути одержане загальноприйнятим способом. Потрібно зазначити, що послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 1, відповідає послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 367 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9, і що послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 5, відповідає послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9. Далі, послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 132 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 3, відповідає послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 367 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 11, і послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 7 відповідає послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 480 амінокислотної послідовності, представленої в SEQIDNO: 11. Крім того, кожна з цих послідовностей, що складається з амінокислот в положеннях з 1 по 18 амінокислотних послідовностей, показаних в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9 і 11 є ідентичними одна одній. Як описано нижче, тромбомодулін, що використовується в даному винаході, може бути одержаний з трансформованих клітин, які одержані шляхом включення ДНК, що кодує пептид з амінокислотною послідовністю, показаною в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11 і т.д. (зокрема, нуклеотидна послідовність, показана в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, і т.д., відповідно) у вектор, а потім трансфекцією клітин-хазяїв цим вектором. Необхідно тільки, щоб ці пептиди мали згадані вище амінокислотні послідовності. Отже, цукровий ланцюг можна додавати або не додавати. Додання цукрового ланцюга конкретно не обмежено. Крім того, в способах генної інженерії, тип такого цукрового ланцюга, положення, до якого додається цукровий ланцюг, і рівень додання відрізняються в залежності від типу клітинихазяїна, що використовується, і вони конкретно не обмежені. Положення зв'язування такого цукрового ланцюга і його тип описані в патентній публікації (Kokai) JP No. 11-341990 (1999) А. У випадку тромбомодуліну згідно з даним винаходом, такий же цукровий ланцюг може бути доданий в тому ж положенні, як описаний в згаданій вище публікації. Як описано далі, спосіб одержання тромбомодуліну згідно з даним винаходом не обмежений генною інженерією. У випадку одержання тромбомодуліну згідно з даним винаходом шляхом генної інженерії, однак, як сигнальна послідовність, яка може бути використана при експресії, може бути використана нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 1 по 18 згаданої вище амінокислотної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 9, нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, що складається з амінокислот в положеннях з 1 по 16 згаданої вище амінокислотної послідовності, показаній в SEQ ID NO: 9, і інші відомі сигнальні послідовності, такі як сигнальна послідовність активатора тканинного плазміногену людини (Міжнародна публікація WO88/9811, і патентна публікація (Kokai) JP No. 11-341990 (1999) А). 17 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У тих випадках, коли ДНК послідовність, що кодує тромбомодулін, вводять в клітини-хазяї, переважно застосовувати спосіб, який передбачає включення ДНК послідовності, що кодує тромбомодулін, у вектор, і більш переважно у вектор експресії, здатний експресуватися в клітинах тварин, а потім введення цього вектора в клітини-хазяї. Такий вектор експресії являє собою молекулу ДНК, яку складає промоторна послідовність, послідовність для додання сайта зв'язування рибосоми з мРНК, ДНК послідовність, що кодує експресований білок, сигнал сплайсинга, термінаторна послідовність для транскрипції термінації, послідовність області початку реплікації, і інші. Приклади переважного експресійного вектора в клітинах тварин включають в себе: pSV2-X, за повідомленням R. С Mulligan et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78. 2072 (1981)]; і pBP69T (69-6) за повідомленням P. Μ. Howley et al. [Methods in Emzymology, 101, 387, Academic Press (1983)]. Приклади клітин-хазяїв, які можуть бути використані в одержанні таких пептидів, включають в себе ооцити китайського хом'ячка (СНО), клітини COS-1, клітини COS-7, клітини VERO (АТСС CCL-81), клітини ВНК, MDCK клітини з нирок собак, і AV-12-664 клітини хом'яка. Крім того, приклади таких клітин-хазяїв, одержаних з клітин людини, включають в себе клітини HeLa, клітини WI38, і клітини людини 293. З цих клітин найбільш загальноприйнятими і переважними є клітини СНО. Нарівні з клітинами СНО, більш переважними є клітини DHFR-CHO. У способах генної інженерії або одержання білка часто використовують такі мікроорганізми, як Escherichia coli. Переважно використовують систему хазяїн-вектор, відповідну для кожного способу. Відповідна векторна система може бути вибрана в залежності від згаданих вище клітин-хазяїв. Був клонований ген тромбомодуліну, що використовується в технології генної рекомбінації. Були описані приклади одержання тромбомодуліну за допомогою таких технологій генної рекомбінації. Крім того, відомий спосіб очищення тромбомодуліну для одержання очищеного продукту [патентна публікація (Kokai) JP Nos. 64-6219 (1989) А, 2-255699 (1990) А, 5213998 (1993) А, 5-310787 (1993) А, і 7-155176 (1995) А; і J. Biol. Chem., 264: 10351-10353 (1989)]. Відповідно, тромбомодулін, що використовується в даному винаході, може бути одержаний способами, описаними в згаданих вище повідомленнях, або еквівалентними ним способами. Наприклад, в патентній публікації (Kokai) JP No. 64-6219 (1989) А описується Escherichia coli K-12 штамм DH5 (АТСС реєстраційний № 67283), що містить плазміду pSV2TMJ2, що містить ДНК, що кодує повнорозмірний тромбомодулін. Також може бути використаний штам (Escherichia coli DH5/pSV2TM J2) (FERM BP-5570), де згаданий вище штам був повторно депонований першим National Institute of Bioscience i Human-Technology (тепер National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, an Independent Administrative Institution under the Ministry of Economy, Trade and Industry (AIST)). Тромбомодулін згідно з даним винаходом може бути одержаний відомим генно-інженерним способом, використовуючи ДНК, що кодує повнорозмірний тромбомодулін, як початковий матеріал. Тромбомодулін, що використовується в даному винаході, може бути одержаний загальноприйнятим відомим способом, або способом, еквівалентним йому. Наприклад, тромбомодулін згідно з даним винаходом може бути одержаний з посиланням на згаданий вище спосіб по Yamamoto et al. [патентна публікація (Kokai) JP No. 64-6219 A (1989)] або спосіб, описаний в JP Патентній публікації (Kokai) No. 5-213998 А (1993). Іншими словами, ген тромбомодуліну, одержаний від людини, може піддаватися генній інженерії для перетворення його в ДНК, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 9, наприклад, і при необхідності вона може бути додатково модифікована. Для такої модифікації, кодон, що кодує амінокислоту в положенні 473 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9 (зокрема, нуклеотид в положенні 1418), піддають сайт-направленому мутагенезу, відповідно до способу, описаному в Method in Enzymology, 100: 468 (1983), Academic Press, таким чином, щоб одержати ДНК, що кодує амінокислотну послідовність, наприклад, показану в SEQ ID NO: 11 (яка головним чином складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 12). З допомогою синтетичної ДНК, що використовується для мутації, яка має нуклеотидну послідовність, показану в SEQ ID NO: 13, нуклеотид Τ в положенні 1418 послідовності SEQ ID NO: 10 може бути перетворений в нуклеотид С, таким чином, щоб одержати, наприклад, мутантну ДНК. Одержану таким чином ДНК вставляють, наприклад, в ооцити китайського хом'ячка (СНО) для одержання трансформованих клітин. Такі клітини потім відбирають відповідним чином. Відібрані клітини потім культивують для одержання культурального розчину, і тромбомодулін може бути одержаний з цього культурального розчину, шляхом очищення відповідно до відомого способу. Як указано вище, переважно, щоб згадані вище клітини-хазяї були трансфіковані ДНК (SEQ ID NO: 10), що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 9. Спосіб одержання тромбомодуліну, що використовується в даному винаході, не 18 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 обмежений згаданим вище способом. Наприклад, такий тромбомодулін може бути екстрагований і очищений також з сечі, крові, інших видів рідин організму, і т.д. В інших випадках, тромбомодулін також може бути екстрагований і очищений з тканин, продукуючих тромбомодулін, культурального розчину таких тканин, і т.д. Надалі, при необхідності, тромбомодулін може бути додатково підданий розщепленню з використанням протеаз. У тих випадках, коли тромбомодулін згідно з даним винаходом одержують згаданим вище способом клітинних культур, можуть бути випадки, коли N-кінцева амінокислота стає диверсифікованою в результаті посттрансляційної модифікації білка. Наприклад, амінокислоти в положеннях 17, 18, 19 або 22 послідовності SEQ ID NO: 9 в деяких випадках можуть ставати N-кінцевими. Крім того, також можуть бути випадки, коли N-кінцеву амінокислоту модифікують таким чином, що глутамінова кислота в положенні 22 могла бути перетворена в піроглутамінову кислоту. Переважно, щоб амінокислота в положенні 17 або 19 стала N-кінцевою. Більш переважно, щоб амінокислота в положенні 19 стала N-кінцевою. Більше того, в іншому переважному варіанті здійснення, амінокислота в положенні 17 може стати N-кінцевою. Відносно згаданої вище модифікації, диверсифікації і т.д. те саме розповсюджується на SEQ ID NO: 11. Крім того, в тих випадках, коли тромбомодулін згідно з даним винаходом одержують з використанням ДНК, що має нуклеотидну послідовність, показану в SEQ ID NO: 10, С-кінцева амінокислота може стати диверсифікованою, і в результаті, в деяких випадках може бути одержаний пептид, який коротше початкового пептиду на один амінокислотний залишок. Тобто, можуть бути випадки, в яких амінокислота в положенні 515 стає С-кінцевою, і вона додатково амідована, таким чином, щоб С-кінцева амінокислота могла бути модифікована. У результаті, може бути одержаний пептид з диверсифікованою N-кінцевою амінокислотою і С-кінцевою амінокислотою, або їх суміш. Амінокислота в положенні 515 може переважно ставати Скінцевою. Більш того в іншому переважному варіанті здійснення, амінокислота в положенні 516 може ставати С-кінцевою. Відносно згаданої вище модифікації, диверсифікації і т.д. те саме розповсюджується на ДНК, що має нуклеотидну послідовність, показану в SEQ ID NO: 12. Тромбомодулін, одержаний згаданим вище способом, може являти собою пептидну суміш з диверсифікованим N-кінцем і С-кінцем. Конкретним прикладом є суміш пептидів, що складаються з послідовності, що складається з амінокислот в положеннях з 19 по 516, в положеннях з 19 по 515, в положеннях з 17 по 516, або в положеннях з 17 по 515 амінокислотної послідовності, представленої в SEQ ID NO: 9. Далі, виділення і очищення тромбомодуліну з одержаного таким чином культурального супернатанта або культурального продукту, можна провести відомим способом [під редакцією Takeichi Horio, Tanpakushitsu/Koso no Kiso Jikken Ho (Basic Experimental Methods for Proteins and Enzymes)]. Наприклад, переважно використати або адсорбційну хроматографію, або іонообмінну хроматографію, в яких використовується взаємодія між хроматографічним носієм, на якому була імобілізована функціональна група, що має заряд, протилежний заряду тромбомодуліну, і тромбомодулін. Іншим переважним прикладом є афінна хроматографія, в якій використовується специфічна афінність до тромбомодуліну. Переважні приклади адсорбенту, що використовується в даному винаході, включають в себе тромбін, який є лігандом тромбомодуліну, і антитіло до тромбомодуліну. Як таке антитіло, може бути використане антитіло до тромбомодуліну, яке має відповідні властивості або розпізнає відповідні епітопи. Наприклад, можуть бути використані антитіла, описані в патентній публікації (Kokoku) JP No. 542920 В (1993), патентній публікації (Kokai) JP Nos. 64-45398 А (1989) і 6-205692 А (1994), і т.д. Інші приклади включають в себе гель-проникну хроматографію і ультрафільтрацію, в яких використовується молекулярний розмір тромбомодуліну. Додатково, інші приклади включають в себе гідрофобну хроматографію, в якій використовується гідрофобний зв'язок між хроматографічним носієм, на якому була імобілізована гідрофобна група, і гідрофобною частиною тромбомодуліну. Більше того, може бути використаний гідроксиапатіт як носій в адсорбційній хроматографії. Така методика описана, наприклад, в патентній публікації (Kokai) JP No. 9-110900 А (1997). Ці засоби в залежності від ситуації можуть бути використані в поєднанні. Міра очищення може бути вибрана в залежності від цільового використання і подібного. Бажано очищати тромбомодулін, поки результати електрофорезу, і переважно SDSPAGE, не будуть отримані у вигляді однієї смуги, або поки результати гель-фільтрації ВЕРХ або ВЕРХ із зворотною фазою виділеного і очищеного продукту не будуть отримані у вигляді одного піка. Само собою зрозуміло, що коли використовують численні типи тромбомодулінів, переважно отримати смугу по суті тільки тромбомодуліну. Таким чином, необов'язково отримувати одну смугу. 19 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Конкретним прикладом способу очищення, що застосовується в даному винаході, є спосіб очищення з використанням активності тромбомодуліну як індикатора. Наприклад, застосовується спосіб очищення [Gomi K. et al., Blood, 75: 1396-1399 (1990)], який передбачає: грубе очищення культурального супернатанта або культурального продукту за допомогою іонообмінної колонки Q-Sepharose Fast Flow для витягання фракції, що володіє активністю тромбомодуліну; потім її основне очищення за допомогою афінної колонки, яка являє собою колонку DIP-тромбін-агароза (діізопропілфосфорилтромбін агарозу) для витягання фракції, що володіє сильною тромбомодулюючою активністю; потім концентрування витягнутої фракції; а потім концентровану фракцію піддають гель-фільтрації, з одержанням активної фракції тромбомодуліну у вигляді чистого продукту. Прикладом активності тромбомодуліну, що використовується як індикатор є активність стимуляції активації білка С, під дією тромбіну. Інший переважний спосіб очищення буде описаний нижче. Вибирають відповідну іонообмінну смолу, що має хороші абсорбційні характеристики у відношенні тромбомодуліну, і потім з використанням цієї смоли проводять очищення іонообмінною хроматографією. Як особливо переважний приклад використовують Q-Sepharose Fast Flow, яка була врівноважена 0,02 Μ Tris-HCl буфером (рН 7,4), що містить 0,18 Μ NaCl. Після відповідного промивання, одержану в результаті речовина елююють 0,02 Μ Tris-HCl буфером (рН 7,4), що містить 0,3 Μ NaCl, наприклад, таким чином, щоб одержати тромбомодулін у вигляді грубо очищеного продукту. Потім, наприклад, речовина, що володіє специфічної афінністю до тромбомодуліну, може бути імобілізована на смолі, і потім можна провести афінну хроматографію. Переважні приклади включають в себе колонку DIP-тромбін-агароза і колонку з моноклональним антитілом до тромбомодуліну. Наприклад, у випадку колонки DIP-тромбін-агароза, колонку заздалегідь врівноважували 20 мМ Tris-HCl буфером (рН 7,4), що містить 100 мМ NaCl і 0,5 мМ хлорид кальцію, і потім в неї завантажують згаданий вище грубо очищений продукт, з подальшим відповідним промиванням. Після цього, одержану в результаті речовина елююють 20 мМ TrisHCl буфером (рН 7,4), що містить 1,0 Μ NaCl і 0,5 мМ хлорид кальцію, наприклад, таким чином, щоб одержати тромбомодулін у вигляді очищеного продукту. З іншого боку, у випадку колонки з моноклональним антитілом до тромбомодуліну, наприклад, застосовують наступний спосіб. Моноклональне тіло до тромбомодуліну, розчинене в ОД Μ NaHCO3 буфері, що містить 0,5 Μ NaCl (pH 8,3) приводять в контакт з сефарозою 4 FF (GE Health Care Biosciences), яка заздалегідь була активована під дією CNBr, таким чином, щоб моноклональне антитіло до тромбомодуліну з'єдналося з сефарозою 4FF. Після цього, колонку, заповнену смолою, в якій моноклональне антитіло до тромбомодуліну з'єдналося з сефарозою 4FF, заздалегідь врівноважують 20 мМ фосфатним буфером (рН 7,3), що містить, наприклад, 0,3 Μ NaCl. Після відповідного промивання, одержану в результаті речовину елююють 100 мМ гліцин-НСІ буфером, що містить 0,3 Μ NaCl (рН 3,0). Елюант можна нейтралізувати відповідним буфером, таким чином, щоб елюант міг бути одержаний у вигляді очищеного продукту. Після цього, рН очищеного продукту доводять до рН 3,5, і потім завантажують в катіонобмінник, і переважно на SP-Sepharose FF (GE Health Care Biosciences), яка є сильним катіонобмінником, яка була урівноважена 100 мМ гліцин-НСІ буфером (рН 3,5), що містить 0,3 Μ NaCl. Катіонобмінник промивають тим же, приведеним вище, буфером для одержання неадсорбованої фракції. Одержану фракцію нейтралізують відповідним буфером для одержання високоочищеного продукту. Такий продукт переважно концентрують ультрафільтрацією. Далі, обмін буфера переважно проводять гель-фільтрацією. Наприклад, високоочищений продукт, концентрований ультрафільтрацією, завантажують на колонку Sephacryl S-300 або колонку S-200, врівноважену 20 мМ фосфатним буфером (рН 7,3), що містить 50 мМ NaCl, а потім проганяють і фракціонують, використовуючи 20 мМ фосфатний буфер (рН 7,3), що містить 50 мМ NaCl. Після цього, підтверджують активність стимуляції активації білка С під дією тромбіну, і активну фракцію потім витягують, таким чином, щоб одержати буфер-обмінний високоочищений продукт. Для посилення безпеки, одержаний таким чином очищений продукт переважно фільтрують, використовуючи відповідний фільтр для видалення вірусів, такий як Planova 15N (Asahi Kasei Medical Co., Ltd.). Після цього продукт може бути концентрований ультрафільтрацією до цікавлячої концентрації. Нарешті, цей продукт переважно фільтрують через фільтр для асептичної фільтрації. Одержаний таким чином тромбомодулін може бути перероблений в ліофілізований препарат відповідно до звичайного способу. Тобто, існує спосіб, який передбачає заморожування розчину, що містить тромбомодулін, і, при необхідності, подальше сушіння замороженого продукту сублімацією води під зниженим тиском. 20 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У даному винаході активність плазменного AT може являти собою або активність AT в плазмі, отриманій з артерії, або активність AT в плазмі,отриманій з вени. Переважною є активність AT в плазмі, отриманій з вени. Однак, також існують випадки, в яких переважною є активність AT в плазмі, отриманій з артерії. В основному, термін «активність плазменного AT» використовується для позначення активності AT в плазмі, отриманій з вени. Тип способу для вимірювання активності AT конкретно не обмежений. Наприклад, таку активність AT можна виміряти способом синтетичного хромогенного субстрату, отримуючи активність AT виходячи із залишкової кількості активованого фактора X. Зокрема, зразок крові збирають в пробірку для збору крові, що містить цитрат натрію. Після цього, зразок крові швидко центрифугують для витягання плазми. Після цього до плазми додають гепарин для утворення комплексу АТ-гепарин, і потім до комплексу АТ-гепарин додають надмірну кількість активованого фактора X. Активований фактор X утворює комплекс АТ-гепарин-активований фактор X, в залежності від кількості комплексу АТ-гепарин в зразку, таким чином, щоб він інактивувався. Після завершення реакції утворення згаданого вище комплексу, додають розчин субстрату в реакційний розчин, і п-нітроанілін, що вивільнився внаслідок реакції, потім піддають колориметричному аналізу, для вимірювання активності активованого фактора X. Активність активованого фактора X, що залишився, відображає активність AT, що міститься в зразку. Таким чином, активність AT може бути отримана, окремо, на основі отриманої калібрувальної кривої. Автоматичний аналізатор, ВМ1650 (що випускається JEOL Ltd.) може бути використаний в колориметричному аналізі п-нітроаніліну. Далі, калібрувальна крива може бути отримана з використанням стандартних речовин. Щоденна доза засобу для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, відповідно до даного винаходу, відрізняється в залежності від віку і маси тіла пацієнтів, міри розвитку симптомів, шляху введення і т.д. В основному, верхня межа кількості тромбомодуліну переважно становить 5 мг/кг або менше, більш переважно 2 мг/кг або менше, ще більш переважно 1 мг/кг або менше, і особливо переважно 0,8 мг/кг або менше. Нижня межа кількості тромбомодуліну переважно становить 0,005 мг/кг або більше, більш переважно 0,01 мг/кг або більше, ще більш переважно 0,02 мг/кг або більше, і особливо переважно 0,05 мг/кг або більше. Цей засіб застосовують однократно або розділено на декілька прийомів в день. Відносно інтервалів введення, цей засіб можна вводити кожний день. Однак, його також можна переважно вводити один раз від 2 до 14 днів, більш переважно один раз від 3 до 10 днів і ще більш переважно один раз від 4 до 7 днів. Зокрема, у випадку внутрішньовенного введення, цей засіб переважно вводять один раз на день. Однак, інтервали введення цим не обмежені. З іншого боку, у випадку підшкірного введення, цей засіб переважно вводять один раз в день або один раз на тиждень. Також можна коректувати такі інтервали введення в залежності від дози, що застосовується. Засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ, що містить як активний інгредієнт тромбомодулін, відповідно до даного винаходу, можна вводити пацієнтам способами введення, що звичайно використовуються, а саме, парентеральними способами, такими як внутрішньовенне введення, внутрішньом'язове введення або підшкірне введення. З них внутрішньом'язове введення і підшкірне введення є особливо переважними тим, що концентрація цього засобу в крові підтримується протягом тривалого періоду часу, і, отже, ці інтервали введення можуть бути збільшені. Крім того, в іншому переважному варіанті здійснення переважно використати внутрішньовенне введення. Більше того, пероральне введення, інтраректальне введення, інтраназальне введення, сублінгвальне введення і подібні також є можливими. У випадку внутрішньовенного введення, застосовують спосіб введення бажаної кількості цього засобу за один раз або шляхом внутрішньовенного краплинного введення. Такий спосіб введення бажаної кількості засобу за один раз є переважним, виходячи з короткого часу введення. У тих випадках, коли засіб вводять за один раз, час, необхідний для введення за допомогою ін'єкційного шприца, як правило, варіює. Час, необхідний для введення, залежить від кількості рідини, що вводиться. Однак, переважно 2 хвилини або менше, більш переважно 1 хвилина або менше, і ще більш переважно 30 секунд або менше. Нижня межа часу конкретно не обмежена. Переважно 1 секунда або більше, більш переважно 5 секунд або більше, і ще більш переважно 10 секунд або більше. Доза, що вводиться цим способом, конкретно не обмежена, за умови, що вона знаходиться в межах згаданої вище переважної дози. Внутрішньовенне краплинне введення є переважним тим, що концентрацію тромбомодуліну в крові легко підтримувати на постійному рівні. Доза, що вводиться внутрішньовенно краплинно, 21 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 конкретно не обмежена, за умови, що вона знаходиться в межах згаданої вище переважної дози. Верхня межа дози в день переважно становить 1 мг/кг або менше, більш переважно 0,5 мг/кг або менше, ще більш переважно 0,1 мг/кг або менше, особливо переважно 0,08 мг/кг або менше, і найбільш переважно 0,06 мг/кг або менше. Нижня межа дози в день переважно становить 0,005 мг/кг або більше, більш переважно 0,01 мг/кг або більше, ще більш переважно 0,02 мг/кг або більше, і особливо переважно 0,04 мг/кг або більше. У випадку внутрішньовенного краплинного введення, верхня межа часу введення переважно становить 4 години або менше, більш переважно 3 години або менше, ще більш переважно 2 години або менше, особливо переважно 1 година або менше, і найбільш переважно 30 хвилин або менше. Нижня межа часу введення переважно становить 10 хвилин або більше, більш переважно 15 хвилин або більше, і ще більш переважно 20 хвилин або більше. У тих випадках, коли засіб згідно з даним винаходом переробляють в ліофілізований препарат, цей препарат може бути розчинений у воді, наприклад, дистильованій воді (або воді для ін'єкцій), або фізіологічному розчині, коли він використовується, і потім його можна вводити пацієнтам. У тих випадках, коли рідкий препарат одержаний із засобу згідно з даним винаходом, ефективна кількість тромбомодуліну може бути змішана з носієм, який може бути використаний як засіб, для одержання рідкого препарату. Зокрема, тромбомодулін в кількості, ефективній для лікування згаданих вище захворювань, змішують з відповідною кількістю відомого носія, з тим. щоб одержати препарат, відповідний для ефективного введення пацієнтам. Наприклад, загусники, такі як сахароза, гліцерин, метилцелюлоза або карбоксиметилцелюлоза, регулювальники рН, наприклад, різні види неорганічних солей, і інші, додають як допоміжні речовини до тромбомодуліну, для одержання рідкого препарату. [Пояснення переліку послідовностей] SEQ ID NO: 1 амінокислотна послідовність, що кодується геном, використаним для одержання ТМЕ456 SEQ ID NO: 2 нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3 амінокислотна послідовність, що кодується геном, використаним для одержання ТМЕ456М SEQ ID NO: 4 нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 5 амінокислотна послідовність, що кодується геном, використаним для одержання TMD12 SEQ ID NO: 6 нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 7 амінокислотна послідовність, що кодується геном, використаним для одержання TMD12M SEQ ID NO: 8 нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 9 амінокислотна послідовність, що кодується геном, використаним для одержання TMD123 SEQ ID NO: 10 нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 11 амінокислотна послідовність, що кодується геном, використаним для одержання TMD123M SEQ ID NO: 12 нуклеотидна послідовність, що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 13 синтетична ДНК для мутації, яку використовують при проведенні сайтнаправленого мутагенезу ПРИКЛАДИ Даний винахід буде описаний детально в наступних прикладах і випробувальних прикладах. Однак, ці приклади не призначені для обмеження об'єму даного винаходу. Тромбомодулін згідно з даним винаходом, використаний в наступних випробувальних прикладах, був одержаний відповідно до згаданого вище способу по Yamamoto et al. (цей спосіб описаний в JP патентній публікації (Kokai) No. 64-6219 (1989) А). Приклади одержання тромбомодуліну згідно з даним винаходом будуть описані нижче. [Приклад одержання 1] 22 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Високоочищений продукт одержували згаданим вище способом. Зокрема, ооцити китайського хом'ячка (СНО) були трансфіковані ДНК (яка, зокрема, складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 10), що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 9. Після цього, активну фракцію витягували з культурального розчину трансформованих клітин згаданим вище звичайним способом очищення, використовуючи 20 мМ фосфатний буфер (рН 7,3), що містить 50 мМ NaCl, для одержання високоочищеного продукту. Після цього, його піддають ультрафільтрації, з одержанням розчину тромбомодуліну з концентрацією 11,2 мг/мл (надалі іноді скорочено TMD123). 480 г аргінін гідрохлориду (що виробляється фірмою Ajinomoto Co., Inc.) зважували, а потім вміщували в 10 л судину з нержавіючої сталі. Після цього, туди додають 5 л води для ін'єкцій, так, щоб речовина там могла розчинитися. 1 Μ розчин гідроксиду натрію додатково додавали до цього розчину, щоб довести значення рН до рН 7,3. Загальну кількість згаданого вище додаткового розчину вміщували в 20 л судину з нержавіючої сталі, і туди додавали 2398 мл одержаного розчину TMD123 (відповідного 26,88 г розчинного білка тромбомодуліну; додана 12% надмірна кількість), з подальшим змішуванням і перемішуванням. У змішаний розчин додатково додавали воду для ін'єкцій до загальної кількості 12 л. Одержаний розчин безперервно змішували і перемішували. Одержаним таким чином розчин засобу піддавали фільтраційний стерилізації, використовуючи фільтр, з діаметром пор 0,22 мкм (MCGL10S, що виробляється фірмою Мilliроrе). Після цього, 1 мл кожного фільтрату заповнювали флакон, і цей флакон потім наполовину закривали гумовою пробкою. Процес сублімаційного сушіння проводили в порядку ліофілізації → наповнення азотом → закриття гумовою пробкою → закриття кришки шляхом її загвинчування, в описаних нижче умовах, таким чином, щоб одержати препарат, що містить TMD123, який містить 2 мг розчинного тромбомодуліну і 40 мг аргінін гідрохлориду в одному флаконі. Попереднє охолоджування (від кімнатної температури до 15°С за 15 хвилин) → основне охолоджування (від 15°С до -45°С за 2 години) → витримування (при -45°С протягом 2 годин) → Вакуумна стадія (при -45°С протягом 18 годин) → підвищення температури (з -45°С до 25°С за 20 годин) → витримування (при 25°С протягом 15 годин) → підвищення температури (з 25°С до 45°С за 1 годину) → витримування (при 45°С протягом 5 годин) → кімнатна температура (від 45°С до 25°С за 2 години) → відновлення тиску і заповнення азотом (до -100 мм рт. ст.) → повне закриття пробкою → закриття кришкою, шляхом її загвинчування [Приклад одержання 2] Ооцити китайського хом'ячка (СНО) трансфікували ДНК (яка особливо складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 12), що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 11. Після цього, розчин тромбомодуліну (надалі іноді скорочено TMD123M) був одержаний з культурального розчину трансформованих клітин згаданим вище звичайним способом очищення. Після цього, ліофілізований препарат TMD123M був одержаний тим же способом, який описаний вище. [Приклад одержання 3] Ооцити китайського хом'ячка (СНО) трансфікували ДНК (яка особливо складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 2), що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 1. Після цього, тромбомодулін (надалі іноді скорочено ТМЕ456) був одержаний з культурального розчину трансформованих клітин згаданим вище звичайним способом очищення. Після цього, ліофілізований препарат ТМЕ456 був одержаний тим же способом, який описаний вище. [Приклад одержання 4] Ооцити китайського хом'ячка (СНО) трансфікували ДНК (яка особливо складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 4), що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 3. Після цього, тромбомодулін (надалі іноді скорочено ТМЕ456М) був одержаний з культурального розчину трансформованих клітин згаданим вище звичайним способом очищення. Після цього, ліофілізований препарат ТМЕ456М був одержаний тим же способом, який описаний вище. [Приклад одержання 5] Ооцити китайського хом'ячка (СНО) трансфікували ДНК (яка особливо складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 6), що кодує амінокислотну послідовність, 23 UA 97961 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 показану в SEQ ID NO: 5. Після цього, тромбомодулін (надалі іноді скорочено TMD12) був одержаний з культурального розчину трансформованих клітин згаданим вище звичайним способом очищення. Після цього, ліофілізований препарат TMD12 був одержаний тим же способом, який описаний вище. [Приклад одержання 6] Ооцити китайського хом'ячка (СНО) трансфікували ДНК (яка особливо складається з нуклеотидної послідовності, показаної в SEQ ID NO: 8), що кодує амінокислотну послідовність, показану в SEQ ID NO: 7. Після цього, тромбомодулін (надалі іноді скорочено TMD12M) був одержаний з культурального розчину трансформованих клітин згаданим вище звичайним способом очищення. Після цього, ліофілізований препарат TMD12M був одержаний тим же способом, який описаний вище. [Випробувальний приклад 1] Засіб для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом одержаний описаним нижче способом, вводять пацієнтам з ДВЗ, як описано нижче, у яких був діагностований ДВЗ на основі діагностичних критеріїв ДВЗ Міністерства охорони здоров'я і соціального забезпечення (Health and Welfare Ministry), у яких симптоми ДВЗ були індуковані внаслідок малігнізації гемопоетичних клітин або інфекційного захворювання. Досліджували коефіцієнт виживаності пацієнтів на 28-ий день після початку введення. Потрібно зазначити, що препарати AT не вводили під час введення засобу для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом. Фізіологічний розчин додавали до ліофілізованого препарату TMD123, одержаного відповідно до Прикладу одержання 1, для приготування 0,5 мг/мл розчину, що тестується. У день введення засобу для лікування і/або поліпшення стану при ДВЗ згідно з даним винаходом, у пацієнта, що досліджується, брали 4,5 мл зразки крові до введення засобу, а потім вміщували в пробірку для збору крові, яка містить 0,5 мл 3,8% цитрату натрію. Після цього, їх перемішували один з одним, перевертаючи пробірку догори дном, а потім суміш центрифугували. Таким чином витягували плазму, а потім кріоконсервували. Надалі, в плазму додавали гепарин для одержання комплексу АТ-гепарин. Далі до комплексу АТ-гепарин додавали надмірну кількість фактора Ха. Після реакції утворення комплексу, до нього додавали розчин субстрату (Testzyme S АТІll (що виробляється Chromogenix)), і п-нітроанілін, що вивільняється внаслідок реакції, потім піддавали колориметричному аналізу шляхом визначення поглинання при 410 нм, для вимірювання залишкової активності фактора Ха (інструкція по застосуванню прикладена з Testzyme S АТІП). Оскільки залишкова активність фактора Ха відображає активність AT, що міститься в зразку, активність AT одержували окремо, використовуючи одержану калібрувальну криву. При колориметрії п-нітроаніліну використовували автоматичний аналізатор ВМ1650 (що виробляється фірмою JEOL Ltd.). Крім того, як нормальну плазму для одержання такої AT активності використали препарат нормальної плазми "Daiichi" (Daiichi Kagaku Co., Ltd.). Що стосується досліджуваних пацієнтів з ДВЗ, одержаний розчин, що тестується, який одержали в згаданому вище прикладі одержання композиції, додавали в кількості 0,12 мл/кг (відповідному 0,06 мг/кг) в фізіологічний розчин до загальної кількості 100 мл. Одержаний таким чином фізіологічний розчин вводили один раз в день протягом 30 хвилин внутрішньовенним краплинним шляхом. Таке введення продовжували протягом 6 днів Розчин, що тестується, вводили згаданим вище способом. Після цього, результат досліджували на 28-ий день після початку введення. У результаті, було виявлено, що коефіцієнт виживання групи пацієнтів, з активністю AT між 50% або більше і менше 70% становив 64,3%, тоді як коефіцієнт виживання групи пацієнтів з активністю AT 70% або більше становив 80%. З іншого боку, було виявлено, що коефіцієнт виживання в групі пацієнтів з активністю AT менше 50% становив 92,3%, включаючи тільки 1 летальний вихід. Таким чином, група пацієнтів з активністю AT менше 50% демонструвала більший коефіцієнт виживання, ніж в двох приведених вище групах пацієнтів. Ці результати показані в Таблиці 1. Більше того, серед інших, у пацієнтів з активністю AT 40% або менше (5 випадків) коефіцієнт виживання становив 100%. 24 UA 97961 C2 Таблиця 1 Активність AT (%)