Штам campylobacter fetus subspecies venerialis lbv для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин

Реферат: Штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV ізольований зі сперми бика для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин. UA 103262 U (12) UA 103262 U UA 103262 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної імунології та мікробіології та стосується штаму Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин. Існує штам Campylobacter fetus subspecies intestinalis (AC SU 1294009 C12N 1/20, A61K 39/106), який застосовують для виготовлення діагностикуму та вакцини проти кампілобактеріозу ВРХ на території Російської Федерації. Вітчизняних штамів такого напрямку застосування бракує. В основу корисної моделі поставлено задачу одержати штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV шляхом селекціонування штаму кампілобактерій для виготовлення біопрепаратів, який володіє стабільними типовими біологічними характеристиками щодо підвиду Campylobacter fetus subspecies venerialis, зокрема, має специфічні антигенні властивості. Також важливою умовою було винайти штам із високими ростовими показниками для швидкого та ефективного накопичення бактерійної маси у виробничих умовах. Поставлена задача вирішується тим, що штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV ізольований зі сперми бика для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин Штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV, ізольований зі сперми бика в лабораторії вивчення бруцельозу ННЦ "IЕКВМ" в 1981 р. та зберігається в музеї лабораторії. Штам належить до відділу Gracilicutes, родини Campylobacteriaceae, роду Campylobacter, виду Campylobacter fetus підвиду venerialis. Штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV має наступні характеристики. Морфо-тінкторіальні властивості. В мазках з напіврідкого м'ясо-пептонно-печінкового агару (НРМППА) та щільного м'ясопептонно-печінкового агару (МППА), офарблених за Грамом, штам має вигляд грамнегативних поліморфних клітин у вигляді "коми", літер "S" та "V", в одному полі зору зустрічається до 2-3 спіралеподібних форм. Розмір клітин 1,5-8,0×0,2-0,5 мкм. При фарбуванні основним фуксином клітини мають блідо-рожевий колір. Культуральні властивості. Штам культивують за температури (37±0,5)°С в мікроаерофільних умовах. На МППНРА штам росте у вигляді сіро-білуватий диск товщиною 2-4 мм під поверхнею середовища, на МППА - у вигляді невеликих випуклих колонії з сіро-блакитним відтінком. Біохімічні властивості. Штам каталазопозитивний, рухливий, дає негативну трипафлавінову пробу. Штам росте на ΗΡΑ із 1 % гліцину та на ΗΡΑ з 4 % жовчі. Не росте на ΗΡΑ із 3,5 % натрію хлориду. Штам формує H2S на НРМППА із 0,02 % цистину. Штам не чутливий до налідиксової кислоти, чутливий до цефалотину. Антигенні властивості. Штам має термостабільний соматичний антиген А, флагелярний антиген Η та термолабільний поверхневий антиген А-1. Згідно класифікації Berg et al. (1972) штам відноситься до групи А (за О антигеном). Патогенні властивості. Штам, ізольований зі сперми бика і є патогенним для цільових тварин. Окремі дослідження щодо інфікування рогатої худоби у виробничих умовах не проводили. Штам патогенний для лабораторних тварин. При зараження білих мишей 3 внутрішньочеревно в дозі 0,3 см (2 млрд. КУО) штам спричиняє пригнічення загального стану, лихоманку. На розтині (7 доба після інфікування) виявляли гострий спленіт та гепатит, гемарогічне запалення кишечнику. Імуногенні властивості. Штам показав високу ефективність в дослідах щодо отримання позитивної кампілобактерійної сироватки шляхом імунізації кролів інактивованою суспензією штаму. Приклад 1 4 здоровим кролям у віці 6 міс. була введена інактивована суспензія штаму С. fetus subsp. 3 3 3 venerialis LBV в наростаючих дозах - 2 млрд. КУО/см , 3 млрд. КУО/см , 4 млрд. КУО/см , 5 3 млрд. КУО/см з інтервалом 4 доби. Через 7 діб після останнього введення кролі були піддані забою шляхом тотального знекровлення. Сироватка крові була перевірена в РА із стандартними кампілобактеріозними антигенами. При цьому встановлено, що сироватка дає позитивну РА на # із антигеном С fetus subsp. venerialis в титрі 1:400 та не реагує із гетерологічним антигеном С fetus subsp. fetus. Приклад 2. 1 UA 103262 U 5 10 15 20 Штами С. fetus subsp. venerialis LBV висівали на МППА з 0,02 % цистину, 0,5 % дріжджового автолізату (режим інкубації 72 години за 37 °C в мікроаерофільних умовах). Бактеріологічну масу змивали 0,4 % формалінізованим фізіологічним розчином та витримували за 37 °C впродовж 48 годин для інактивації. Повноту інактивації перевіряли за стандартними методиками. Суспензію кампілобактерій відмивали шляхом дворазового центрифугування за 2000 об./хв впродовж 15 хвилин. Осад бактерій ресуспендували стерильним фізрозчином із 0,4 % 3 формаліну та стандартизували до концентрації 20 млрд.КУО/см за стандартом каламутності. Специфічність антигену перевіряли в СКРА із застосуванням гомо- і гетерологічних кампілобактеріозних сироваток. Показано, що антиген давав позитивну СКРА на # із сироваткою С. fetus subsp. venerialis та негативну реакцію із сироваткою С. fetus subsp. fetus та негативною контрольною сироваткою. Таким чином, запропонований нами штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV володіє типовими морфо-тінкторіальними, культуральними, біохімічними, антигенними та імуногенними властивостями та може бути застосований в якості виробничого для отримання антигенів та позитивних сироваток для діагностики кампілобактеріозів тварин, спричинених кампілобактеріями підвиду С. fetus subsp. venerialis. Запропонований штам знайде широке впровадження в біотехнологічній промисловості або наукових дослідженнях для створення вітчизняних активних та специфічних біопрепаратів для діагностики і контролю кампілобактеріозів серед продуктивних, племінних та декоративних тварин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Штам Campylobacter fetus subspecies venerialis LBV ізольований зі сперми бика для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2