Штам lactobacillus acidophilus 27 для виготовлення пробіотиків

Реферат: Штам Lactobacillus acidophilus 27 для виготовлення пробіотиків первісно депонований та зберігається у Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім. Д. Заболотного НАН України, за реєстраційним № IMB В 7487: родина Lactobacillaceae, рід Lactobacillus, вид Lactobacillus acidophilus. UA 104984 U (12) UA 104984 U UA 104984 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної мікробіології та біотехнології, може бути використана для виготовлення пробіотиків з метою профілактики та терапії шлунково-кишкових захворювань у тварин. Аналогом корисної моделі є (Патент № 56051, опубл. 27.12.2010 p., бюл. № 2, Lactobacillus acidophilus 24). Цей штам виділений від кота та призначений для створення препарату з метою лікування ран. Недоліком аналога є те, що антагоністична його дія відносно збудників шлунково-кишкових захворювань у тварин не вивчена. Не досліджено також резистентність відносно жовчі, відсутня геноідентифікація. Корисна модель - результат вирішення задачі: отримання штаму Lactobacillus acidophilus з виразними пробіотичними властивостями (антагоністичними, адгезивними) по відношенню до мікроорганізмів, які здатні викликати шлунково-кишкові захворювання у новонароджених тварин та був би відносно резистентним до широковживаних у ветеринарній медицині лікарських препаратів. Штам Lactobacillus acidophilus 27 для виготовлення пробіотиків первісно депонований та зберігається у Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім. Д. Заболотного НАН України, за реєстраційним № IMB В 7487: родина Lactobacillaceae, рід Lactobacillus, вид Lactobacillus acidophilus. Штам Lactobacillus acidophilus 27 для виготовлення пробіотиків депонований 10.12.2014 р. за реєстраційним № IMB В 7487, характеризується такими властивостями: 1. Культуральні властивості, морфологія. Росте на спеціальних живильних середовищах МРС, Блікфельда, Рогози за аеробних та мікроаерофільних умов. На живильному середовищі МРС утворює дрібні непрозорі білого кольору колонії. При мікроскопії мазків виявляються грампозитивні палички розміром 0,9-1,0 × 3,0-8,5 мкм. Розташовані поодиноко та короткими ланцюжками. У глибині агару з гідролізованого молока (ГА) виявляються колонії білого кольору 1,5-2,0 мм діаметром. В гідролізованому бульйоні та рідкому середовищі МРС утворює дрібнодисперсний осад. Капсул та спор не утворює. Нерухливий. Штам Lactobacillus acidophilus 27 зброджує лактозу, фруктозу, манозу, та, варіабельно галактозу і мальтозу. Видова належність штаму підтверджена шляхом риботипування (ампліфікація 16S р. ДНК, секвинування ампліфікату). 2. Антагоністичні властивості. Штам Lactobacillus acidophilus 27 виявляє виразний антагонізм відносно E.coli, Yersinia enterocolitica, P.vulgaris, Listeria monocitogenes, S. aureus. Визначення антагоністичної активності штаму Lactobacillus acidophilus 27 відносно Yersinia enterocolitica. 3 У чашки Петрі заливали по 15 см МПА, підсушували його у термостаті при 37 °C. Як тесткультури використали лабораторні та польові штами Yersinia enterocolitica (серотип 0:3), Yersinia enterocolitica (серотип 0:9), Yersinia enterocolitica (серотип 0:8), Yersinia enterocolitica (серотип 0:6.30). Добові культури тест-мікроорганізмів змивали з поверхні МПА фізрозчином і 3 доводили густину бактеріальної суспензії до 10 млрд.м.кл./см . Суспензії тест-культур вносили по 0,1 мл в чашки Петрі з МПА і розтирали шпателем по поверхні агару. Через 20-30 хв після посіву в агарі вирізали стерильною металевою трубкою лунки діаметром 6 мм на відстані 2 см від краю чашки (по 4 лунки в кожній чашці). В лунки вносили по 0,1 мл 24-годинної культури Lactobacillus acidophilus 27. Інкубували в термостаті 24 год. за температури 37 °C. Результат враховували через 24 години, при цьому визначали діаметр зони затримки росту тестмікроорганізму навколо лунки. При відсутності ознак затримки росту, мікроорганізми вважали стійкими відносно досліджуваного штаму; в разі затримки росту до 15 мм - малочутливими; при затримці росту від 15 до 25 мм - чутливими. Діаметр зон затримки росту Yersinia enterocolitica у цьому досліді становив: Yersinia enterocolitica (серотип 0:3) - 15±0,6 Yersinia enterocolitica (серотип 0:9) - 22±1,1 Yersinia enterocolitica (серотип 0:8) - 20±0,8 Yersinia enterocolitica (серотип 0:6.30) - 21±0,6. 3. Адгезивні властивості. Штам Lactobacillus acidophilus 27 виявляє виразну адгезивну активність відносно еритроцитів крові великої рогатої худоби, морської свинки. Визначення адгезивної активності штаму Lactobacillus acidophilus 27 до еритроцитів крові морської свинки. Кров відбирали із порожнини серця морської свинки. Еритроцити двічі відмили буферним розчином фосфату натрію (рН 7,2-7,3) шляхом центрифугування зі швидкістю 1000 об/хв. На 3 вказаному буфері готували суспензію еритроцитів концентрацією 100 млн/см . На предметне 1 UA 104984 U 5 10 15 20 25 30 35 скло наносили краплю буферного розчину, в якому суспендувалипо одній краплі суміші 3 еритроцитів та мікроорганізмів у концентрації 1 млрд.м.кл./см . Предметне скло з дослідним матеріалом поміщали у вологу камеру на 30 хв за температури 37 °C, потім препарат висушували при 37 °C, фіксували сумішшю спирт-ефіру та фарбували за методом Романовського-Гімзи. Препарати вивчали під світловим мікроскопом. Результати оцінювали, визначаючи середній показник адгезії (СПА) - кількість мікроорганізмів, що прикріпилися до 1 еритроциту. Досліджували не менше 25 еритроцитів, враховуючи не більше 5 еритроцитів в 1 полі зору. Середній показник адгезії штаму Lactobacillus acidophilus 27 до еритроцитів крові морської свинки становив 3,2. 4. Генетична стабільність. Штам не змінює основних властивостей за температури +2 +6 °C при зберіганні у знежиреному молоці протягом 6-ти місяців. При періодичних посівах на живильне середовище протягом 6-ти місяців ознак дисоціації, не виявлено. 5. Чутливість до антибіотиків. Штам Lactobacillus acidophilus 27 нечутливий до ципрофлоксацину, цефепиму, ітраконазолу, оксациліну, відносно резистентний до цефтриаксону, цефазоліну, чутливий до гентаміцину, тетрацикліну, еритроміцину, стрептоміцину, лінкоміцину, канаміцину, неоміцину, ампіциліну, рифампіцину, цефтрофуру, левоміцину, доксицикліну, цефоперазону, азитроміцину, а також до фурадоніну. Штам Lactobacillus acidophilus 27 резистентний до жовчі. 6. Культивування та зберігання штаму Lactobacillus acidophilus 27. Використовують живильні середовища: МРС, агар з гідролізованим молоком (ГА). Поточна підтримка штаму здійснюється шляхом культивування його на знежиреному молоці, рН 7,0 при 37 °C протягом 48 годин. Зберігають його у холодильнику за температури +4 - +6 °C, здійснюючи пересіви через кожні 3540 діб, а також у ліофілізованому стані. Штам Lactobacillus acidophilus 27 виділений з фекалій теляти віком 20-ть діб, що належало до групи тварин тривалий час благополучної відносно шлунково-кишкових захворювань. Матеріал (ректальні проби) розбавляли стерильним 0,85 %-им розчином NaCl у співвідношенні 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000 та 1:1000000. Суспензії ретельно перемішували та засівали на живильні середовища у бактеріологічних чашках (МРС, 3 Блікфельда, Рогози). Середовища вносили по 10-12 см у стерильні чашки Петрі. Після 3 затвердіння в умовах кімнатної температури вносили 0,1-0,2 см розведеного матеріалу, шпателем рівномірно розподіляли його на поверхні середовища. Посіви інкубували за температури 37±1 °C протягом 72 години за аеробних умов. Результати посіву оцінювали щоденно. Штам Lactobacillus acidophilus 27 виділений з розведення матеріалу 1:10000. Штам Lactobacillus acidophilus 27 для тривалого зберігання без пересівів - ліофілізують, використовуючи захисне середовище такого складу: цукроза - 35,0; желатин - 4,0; вода - 61,0; рН 6,8. Штам Lactobacillus acidophilus 27 призначений для виготовлення пробіотиків, які застосовуються для терапії та профілактики дисбіотичних кишкових захворювань у тварин. 40 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 Штам Lactobacillus acidophilus 27 для виготовлення пробіотиків первісно депонований та зберігається у Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім. Д. Заболотного НАН України, за реєстраційним № IMB В 7487: родина Lactobacillaceae, рід Lactobacillus, вид Lactobacillus acidophilus. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2