Спосіб укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro

Реферат: Запропоновано спосіб укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro. Спосіб включає введення рослин в культуру in vitro. Культивування здійснюють на живильному середовищі Мурасіге-Скуга з регуляторами росту. Для введення в культуру застосовують UA 108439 C2 (12) UA 108439 C2 термотерапію рослинного матеріалу, а укорінювання мікроживців здійснюють люмінесцентними лампами з посиленням випромінювання в синій області спектра. під UA 108439 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, біотехнології, зокрема до способів клонального мікророзмноження плодових культур. Найбільш близьким аналогом до нашої корисної моделі є спосіб розмноження безвірусної підщепи груші-айви (прототип) [2]. Спосіб, що вирішується у прототипі, полягає в тому, що він включає в себе клональне мікророзмноження рослин айви звичайної з використанням на етапі укорінювання люмінесцентних ламп з посиленням випромінювання в білій області спектра. Згаданий спосіб-прототип має такий недолік: 1. Низький ступінь укорінювання мікроживців айви звичайної. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити більш ефективний спосіб укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro. Поставлена задача вирішується тим, що у запропонованому способі шляхом здійснення ряду прийомів у певній послідовності досягається результат, а саме: використання освітлення люмінесцентними лампами з посиленням випромінювання у синій області спектру забезпечує більший вихід укорінюваних мікроживців айви звичайної. До суттєвих ознак, що характеризують винахід, відноситься той факт, що вперше для укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro пропонується використання освітлення люмінесцентними лампами з посиленням випромінювання у синій області спектра. Суттєві ознаки надають такі переваги даному методу: 1) використання освітлення люмінесцентними лампами з посиленням випромінювання у синій області спектру забезпечує більший вихід укорінюваних мікроживців айви звичайної 2) збільшення ефективності процесу клонального мікророзмноження рослин айви звичайної в цілому. Отже, спосіб, що заявляється, відповідає критерію винаходу "новизна" та "суттєві відміни". Приклади здійснення способів Приклад 1 (прототип). Спосіб розмноження безвірусної підщепи для груші-айви в культурі in vitro. Отримання садивного матеріалу підщепи для груші-айви звичайної проводиться методом культури ізольованих меристем на живильних середовищах in vitro [1, 3, 4]. Матеріалом для вичленення меристем служать зелені пагони айви звичайної, які зрізують в період їх активного росту (квітень-травень). У цей час концентрація вірусів найменша, особливо в зоні верхівкової меристеми. Верхівки звільняють від листків і ретельно промивають проточною водопровідною водою, 10-15 хв у мильному розчині та кілька разів у дистильованій воді. Вичленовують апекси розміром 0,5 мм, залишаючи 2-3 примордіальних листочки. Вичленений апекс препарувальною голкою обережно переносять у пробірку на стерильне живильне середовище [1, 5]. В подальшому експланти айви звичайної культивують на стерильному живильному середовищі Мурасіге-Скуга із регуляторами росту. Маточні рослини вирощують в кліматичних камерах, де підтримують наступний режим культивування: температура - 24-28 °C, відносна вологість повітря - 70 %, освітленість - 2-3 тис. люкс, фотоперіод - 16 годин освітлення. Укорінювання мікроживців відбувається на середовищі Мурасіге-Скуга з додаванням 0,2 мг/л ІМК та НОК за умов використання в якості освітлення люмінесцентних ламп з посиленням випромінення в білій області спектру. За результатами досліджень ступінь укорінювання мікроживців у різних типів вегетативної підщепи - айви звичайної становив від 64,9 % для айви ВА 29 до 29,8 % (айва МС) (додаток 1, таблиця 1). Приклад 2. Спосіб укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro Відбір первинних експлантів айви звичайної, їх введення в культуру in vitro та культивування отриманих мікроживців на живильному середовищі Мурасіге-Скуга проводили за способом прототипом. На етапі укорінювання використовували стерильне живильне середовище Мурасіге-Скуга з додаванням регуляторів росту аналогічно способу-прототипу. Проте як джерело освітлення використовували люмінесцентні лампи з посиленням випромінювання в синій області спектру (довжина хвилі 420 нм). Тривалість культивування мікроживців - 2 місяці. Таким чином, в результаті використання на етапі укорінювання мікроживців айви звичайної ступінь їх укорінювання збільшився і становив 79,8 % для айви ВА 29 і 39,7 % для айви МС (додаток 1, таблиця 1). 1 UA 108439 C2 5 10 15 20 Запропонований нами спосіб забезпечує більший вихід укорінюваних рослин айви звичайної, що в подальшому сприяє збільшенню ефективності процесу клонального мікророзмноження рослин айви звичайної. Джерела інформації: 1. Бундук Ю.М. Ініціація культури айви звичайної in vitro / Ю.М. Бундук, І.П. Григорюк, М.Д. Мельничук, А.А. Клюваденко //Вісн. аграр. науки. - 2011. - № 5 - С. 39-41. 2. Возняк Т.Р. Вдосконалення технології мікроклонального розмноження айви / Т.Р. Возняк, В.В. Хомяк, В.М. Гунчак // Стан та перспективи розвитку захисту рослин: збірник тез Міжнародної науково-практичної конференції молодих вчених і спеціалістів, присвяченої 100річчю від дня народження видатного вченого Вадима Петровича Васильєва, 2-3 квітня, 2013 p.: тези доп. - Київ, 2013. - С. 30. 3. Калинин Ф.Л. Технология микроклонального размножения растений / Ф.Л. Калинин, Г.П. Кушнир, В.В. Сарнацкая. - К.: Наук, думка., 1992. - 232 с. 4. Кушнір Г.П. Мікроклональне розмноження рослин. Теорія і практика. / Г.П. Кушнір, В.В. Сарнацкая, - К.: Наук. думка, 2005. - 242 с. 5. Хомяк В.В. Отримання безвірусних клонів айви за допомогою культури тканини та термотерапії / В.В. Хомяк, Т.Р. Возняк // Стан та перспективи розвитку захисту рослин: збірник тез Міжнародної науково-практичної конференції молодих вчених і спеціалістів, присвяченої 100-річчю від дня народження видатного вченого Вадима Петровича Васильєва, 2-3 квітня, 2013 p.: тези доповідей. - Київ, 2013. - С. 101. Спосіб укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro Таблиця 1 Вплив спектрального складу світла на процес укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro, отриманих різними способами (2013 р.) № п/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Тип вегетативної підщепи Айва А Айва ВА 29 Айва МС Айва sido IС 4-12 IС 2-10 IС 4-6 Ступінь укорінювання, (%) Способом-прототипом Способом, що заявляється 53,7 78,9 64,9 79,8 29,8 39,7 37,4 45,1 56,09 66,7 52,65 69,8 53,5 68,1 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 25 30 Спосіб укорінювання мікроживців айви звичайної в умовах in vitro, що включає, введення рослин в культуру in vitro, культивування на живильному середовищі Мурасіге-Скуга з регуляторами росту, який відрізняється тим, що для введення в культуру застосовують термотерапію рослинного матеріалу, а укорінювання мікроживців здійснюють під люмінесцентними лампами з посиленням випромінювання в синій області спектра. Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2