Спосіб відбору експлантів та отримання асептичної культури липи серцелистої (tilia cordata mill.)

Реферат: Спосіб відбору експлантатів та отримання асептичної культури липи серцелистої (Тіlіа cordata Mill.) включає отримання асептичної культури із використанням експлантатів верхівок та сегментів пагонів сіянців віком від 2 місяців до 1 року та стерилізацією у 0,1-0,3 % розчині діациду упродовж 15-25 хв. Проводять відбір рослинного матеріалу із сорокарічних дерев у березні - травні, розмір та тип експлантата, концентрацію і експозицію стерилізуючих речовин: 70 % етиловий спирт з експозицією 1 хв., 1 % розчин AgNO3 - 15 хв. та 2,5 % NaClO - 10 хв., та склад живильного середовища за прописом Мурасіге і Скуга з додаванням активованого вугілля -1 у концентрації 1-2 г∙л . UA 74446 U (12) UA 74446 U UA 74446 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель спосіб відбору експлантатів та отримання асептичної культури липи серцелистої (Tilia cordata Mill.) належить до сільськогосподарської галузі, зокрема - садовопаркового господарства. Аналогом способу відбору та отримання асептичної культури липи серцелистої слугували роботи В. Халупи (Chalupa V. In vitro propagation of Oak (Quercus robur L.) and Linden (Tilia cordata Mill.) in vitro / V. Chalupa // Biol. Plant. - 1984. - 26. - P. 374-377; Chalupa V. Vegetative propagation of English Oak (Quercus robur L.), small - leaved Linden (Tilia cordata Mill.) and European mountain Ash (Sorbus aucuparia L.) in vitro / V. Chalupa // Lesnictvi. - 1984. - 30. - P. 1019-1028). Для швидкого розмноження селекційних фенотипів липи (Tilia cordata) використовували експлантати верхівок пагона та сегменти пагонів сіянців віком від 2 місяців до 1 року. Пагони розрізали і стерилізували у 0,1-0,3 %-му розчині діациду протягом 15-25 хв., потім тричі промивали у стерильній дистильованій воді. Сегменти з брунькою (розміром 10-25 мм) розміщували на агаризованих середовищах Халупи (БТМ) і для деревних рослин (WPM). Наведений спосіб не передбачає диференційованого підходу щодо відбору рослинного матеріалу в залежності від сезону і при отриманні асептичної культури як рослини-донори використовується тільки ювенільний матеріал, а це не дає змогу отримувати садивний матеріал із вікових дерев. Задача запропонованої корисної моделі передбачає - відбір експлантатів від рослин-донорів селекційних сорокарічних дерев Tilia cordata Mill., що зростають вздовж вулиць і доріг міст, та отримання добре ростучої асептичної культури. Процес відбору та отримання асептичної культури проводиться так: з екземплярів добирають молоді зелені пагони довжиною 15-16 см, для зменшення площі пагонів проводять видалення частини листка (до 60-70 %). Далі частини пагонів нарізають на фрагменти завдовжки 4-5 см, які промивають у мильному розчині 50-60 хв. на шейкері та відмивають у проточній воді 30 хв. Для знешкодження екзогенної мікрофлори пагони обов'язково занурюють у КМnО4 на 15 хв. та споліскують їх у дистильованій воді. Для одержання асептичної культури використовують стерилізацію ступінчастим способом. Для стерилізації експлантатів Tilia cordata Mill. використовують 70 % етиловий спирт протягом 1 хв., 1 % розчин AgNО3 - 15 хв. та 2,5 % NaCIO - 10 хв. із загальноприйнятим режимом відмивання, де ефективність стерилізації становить близько 65 %. Після чого із частин експлантів отримують експланти та переносять на живильне середовище за прописом Мурасіге та Скугом (МС). Встановлено, що найбільш регенераційно спроможними є фрагменти стебла з однією брунькою завдовжки 10-15 мм. Максимальна здатність ізольованих фрагментів стебел з брунькою завдовжки 10-15 мм до морфогенезу і регенерації в умовах in vitro, спостерігаємо в період з березня по травень і складає 75-80 %. Тканини та органи Tilia cordata Mill., ізольовані в стані глибокого спокою (листопад-січень) мають майже у 2 рази менший морфогенетичний потенціал, ніж тканини ізольовані на початку вегетації рослин. Для знешкодження дії фенольних сполук у живильне середовище МС додаємо активоване -1 вугілля у концентрації 1-2 г∙л . Базова концентрація макро- та мікроелементів у живильному середовищі МС дозволила на 60-у добу культивування одержати близько 80% морфогенно активних мікропагонів in vitro Tilia cordata Mill. Використання запропонованого корисною моделлю способу відбору експлантів (розміру, типу з врахуванням їх термінів відбору) та отримання асептичної культури липи дрібнолистої (Tilia cordata Mill.) дасть можливість забезпечити потреби ринку садівним матеріалом вітчизняного виробництва для озеленення міст та садово-паркового будівництва. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 50 55 Спосіб відбору експлантатів та отримання асептичної культури липи серцелистої (Тіlіа cordata Mill.), який включає отримання асептичної культури із використанням експлантатів верхівок та сегментів пагонів сіянців віком від 2 місяців до 1 року та стерилізацію у 0,1-0,3 % розчині діациду упродовж 15-25 хв.,який відрізняється тим, що проводять відбір рослинного матеріалу із сорокарічних дерев у березні - травні, розмір та тип експлантата, концентрацію і експозицію стерилізуючих речовин: 70 % етиловий спирт з експозицією 1 хв., 1 % розчин AgNO3 - 15 хв. та 2,5 % NaClO - 10 хв., та склад живильного середовища за прописом Мурасіге і Скуга з -1 додаванням активованого вугілля у концентрації 1-2 г∙л . 1 UA 74446 U Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2