Спосіб прогнозування резорбції контузійного гемофтальму

Спосіб прогнозування резорбції контузійного гемофтальму, що включає забір 0,1-0,2 мл периферичної крові хворого, виділення лейкоцитарно 3 будь-якої етіології (первинне регматогенне відшарування сітківки, діабетична ретинопатія і ін.), проводилися дослідження рівня антитіл в сироватці крові, субретінальній рідині і скловидному тілі до найвідоміших антигенів сітківки і скловидного тіла [Глинчук Я.И. и др./УВестн. Офтальмол,-1987.№2.- С.46-48; Коваленко Ю.В. Ефективність застосування низькочастотного ультразвуку в комплексному лікуванні контузійного гемофтальму: Автореф. дис....канд. мед. наук.- Одеса, 2003; Сергиенко А.Н., Леус Е.А., Чичур Д.А., Матвиенко Ю.А. Офтальмол. журн.- 2004.- №2.- С.22-24; Слепова О.С., Садрисламова Л.Ф., Гундорова Р.А. и др.// Вестн. Офтальмол.- 2000.- №2.- С.27-31]. Слід зазначити, що провідна роль у розвитку імунопатологічного ураження спеціалізованих тканин належить тимус-залежним реакціям клітинного імунітету, а наявність специфічних антитіл до антигенів тканин ока може навіть мати протективне значення відносно можливості їх аутоімунного ушкодження [Вершигора А.Е. //Общая иммунология. - 1990; Дранник Г.Н.// Клиническая иммунология и аллергология. -Одесса.-1999]. В основу корисної моделі покладено принцип визначення чутливості організму хворого до антигенів тканин ока. Поставлена задача прогнозування резорбції контузійного гемофтальму може бути вирішена завдяки застосуванню імунологічного тесту "активних" Е-РУЛ з антигенами для визначення рівня сенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла [Дегтяренко Т.В. Механизмы модулирующего влияния биогенных стимуляторов на иммунологическую реактивность организма:Автореф. дис....докт. мед. наук.- Одеса, 1996]. Причинно-наслідкові зв'язки Виділення з краплі периферичної крові Дозволяє визначити можливість лейкоцитарнолімфоцитарної суміші клітин, резорбції контузійного гемофтальму визначення функціональної активністі Т- за рівнем сенсибілізації організму до лімфоцитів, постановка тесту "активних" антигенів скловидного тіла: відсутність Е-РУЛ in vitro з використанням збільшення % інверсії "активних" фізіологічного розчину і антигена Е-РУЛ в дослідній пробі у порівнянні з скловидного тіла контрольною більш ніж 10% Спосіб прогнозування резорбції контузійного гемофтальму на підставі імунологічних тестів проводять таким чином: 1. Вранці натще у хворого беруть 0,1-0,2мл периферічної крові з пальця, виділяють лейкоцитарно-лімфоцитарну суміш клітин. 2. Розкапують лейкоцитарно-лімфоцитарну суміш клітин по 0,05мл у лунки імунологічних планшет. 3. Додають в дослідні лунки 0,05мл стандартизований за білком розчин антигена скловидного тіла (20мкг/мл), а в конторольні лунки - 0,05мл фізіологічного розчину. 4. Проводять інкубацію лейкоцитарнолімфоцитарної суміші клітин у термостаті на протязі 30 хвилин при t=37°С. 11866 4 5. Додають у лунки імунологічної плати до всіх проб 0,05мл еритроцитів барана (ЕБ) в стандартній концентрації 0,02%. 6. Проводять інкубацію 5 хвилин при кімнатній температурі, відразу готують мазки, забарвлюють за Романовським-Гімзою. 7. Рахують відносну кількість "активних" Е-РУЛ на 100 кліток лімфоїдного ряду в контрольних і дослідних зразках; різниця у відсотку "активних" Тклітин в контрольних і дослідних зразках відображає рівень сенсибілізації до антигенів скловидного тіла. 8. Результати вираховують на підставі порівняння % інверсії "активних" Е-РУЛ в дослідних і контрольних пробах; збільшення % інверсії "активних" Е-РУЛ у дослідній пробі більше ніж на 10 % вказує на наявність сенсибілізації до антигенів скловидного тіла. Клінічні дослідження проведені в Інституті очних хвороб і тканинної терапії ім. акад. В.П. Філатова АМН України. Обґрунтуванням до використання імунологічного тесту, який визначає рівень сенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла для прогнозування розсмоктування гемофтальму контузійного походження, стала клінічна розробка та імунологічний контроль 8 хворих з цією патологією. Проведений аналіз показників імунологічної реактивності організму (ІРО) у 8 хворих у віці від 23 до 61 року (середній вік 39,25 років ± SD 15,18), що перенесли контузію очного яблука, ускладнену повним гемофтальмом. З них чоловіки складали переважну більшість (6 чоловік - 75%). Статистична обробка результатів проводилася з використанням дисперсійного аналізу за допомогою комп'ютерної програми Statistica 6.0. Достовірність відмінностей оцінювалася за допомогою непараметричного рангового критерію Mann-Whitney. У всіх хворих мала місце відсутність відшарування сітківки за даними УЗ-сканування. Гострота зору до початку лікування у всіх спостережуваних пацієнтів дорівнювала світловідчуттю з правильною світлопроекцією. Всі хворі одержували консервативне лікування, направлене на розсмоктування гемофтальма, включаючи парабульбарні ін'єкції лідази, гепаріна, фібрінолізіну, дексаметазону і фонофорез розсмоктуючих засобів (лідази, папаїна, фібрінолізіна). Хворі були розділені на дві групи. До першої групи (n=3) увійшли хворі з позитивним результатом від одержаного консервативного лікування, який мав на увазі резорбцію гемофтальма і підвищення гостроти зору. Гострота зору в цій групі підвищилася від 0,1 до 0,35 у двох хворих і до 0,6 у одного хворого. До другої групи (n=5) увійшли хворі з негативним результатом від одержаної консервативної терапії, який визначали за відсутністю резорбції гемофтальму і підвищення гостроти зору, у зв'язку з цим хворим цієї групи проводилося оперативне втручання. Проаналізовані результати дослідження показників ІРО в двох порівнюваних групах хворих з позитивним і негативним результатами, щодо резорбції контузійного гемофтальму, представлені в таблиці 1. 5 11866 6 Таблиця 1 Порівняльна оцінка показників ІРО у хворих з контузійним гемофтальмом в групах з позитивним і негативним результатами від проведеної консервативної терапії (M±SD) Показники Абсолютна кількість лейкоцитів Абсолютна кількість лімфоцитів Абсолютна кількість Т-лімфоцитів Абсолютна кількість Т-хелперов Абсолютна кількість Т-супрессоров Абсолютна кількість В-лімфоцитів Іммунорегуляторний індекс Абсолютна кількість фагоцитуючих клітин Вміст IgA Вміст IgM Вміст IgG Ступінь сенсибілізації до антигенів скловидного тіла Ступінь сенсибілізації до антигенів судинної оболонки В таблиці 1 відображена достовірна відмінність рівня сенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла (р=0,004) в двох порівнюваних групах. В групах з позитивною і негативною динамікою резорбції гемофтальму рівень сенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла значно відрізнявся і знаходився в межах від 0 до 4% (M=2,0±SD2,0) і від 8 до 18% (M=14,0±SD4,24) відповідно (Фіг.1 - Рівень відмінностей ступеню сенсибілізації до антигенів скловидного тіла у хворих з контузійним гемофтальмом в групах з позитивним (1) і негативним (2) результатами від проведеної терапії). Проте, у зв'язку з малим числом спостережень (n1=3, n2=5) і відсутністю нормального розподілу значень рівня сенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла (Фіг.2 - Гістограма розподілу значень сенсибілізації до антигенів (АГ) скловидного тіла (СТ) в групах хворих з позитивним і негативним результатами від консервативного лікування контузійного гемофтальму), для оцінки достовірності отриманих відмінностей нами застосовував Позитивний результат Негативний результат лікування (n=3) лікування (n=5) 5,5 ±0,6 5,89±0,94 1,0±0,08 1,5±0,39 694,33±139,0 1223,6±422,71 484,33±185,54 980,6±452,36 179,33±71,35 210,2±61,81 172,0±84,59 151,6±88,18 3,4±2,84 5,12±3,12 3397,67±979,12 2814,0±1166,5 1,7±087 2,47±0,64 0,97±0,29 0,89±0,24 9,32±0,48 11,6±4,36 2,0±2,0 14,0±4,24 Р=0,004 10,0±8,72 10,8±5,22 ся непараметричний ранговий критерій MannWhitney, згідно якому р=0,025. Таким чином, одержана статистичне достовірна залежність може бути використана як критерій прогнозування резорбції контузійного гемофтальма. Визначено, що якщо у хворих з контузійним гемофтальмом рівень сенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла до призначенного лікування в середньому складає M=9,5±SD7,07, то в групах з подальшою позитивною і негативною динамікою резорбції гемофтальма рівень аутосенсибілізації організму до антигенів скловидного тіла значно відрізнявся і знаходився в межах від 0 до 4% (M=2,0±SD2,0) і від 8 до 18% (M=14,0±SD4,24) відповідно. Доведено, що визначена залежність клінічного результату резорбції контузійного гемофтальму від ступеню аутосенсибілізації організма до антигенів скловидного тіла статистичне достовірна (р=0,004) і може бути використана як критерій прогнозування резорбції контузійного гемофтальма. 7 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 11866 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601