Спосіб стерилізації дрібного насіння для введення в культуру in vitro

Реферат: UA 119303 U UA 119303 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузі сільськогосподарської біотехнології і може бути використана для вивчення рідких видів рослин в культурі in vitro, які мають дрібне насіння, діаметром до 0,3 см. Запропонований спосіб дозволяє отримати звільнене від інфекції дрібне насіння в культурі in vitro та проводити подальші дослідження з обраними видами рослин. Найближчим аналогом за сукупністю суттєвих ознак до способу, що заявляється, є спосіб, який описано у патенті України [патент UA № 81681, МПК А01Н 4/00 "Спосіб стерилізації насіння Ligularia sibirica (L.) Cass. для введення в культуру in vitro" Марченко М.М., Чорней І.І., Чебан Л.М., Шелифіст А.Є., Буджак В.В.], що включає послідовну промивку насіння детергентами та проточною водою, обробку насіння в серії стерилізуючих агентів, трикратну відмивку насіння в стерильній дистильованій воді і висадку насіння на поживне середовище; при якому насіння, після промивки детергентом та протічною водою, знезаражують 1 % розчином КМnО4 (30±1 хв) і залишають для набухання в дистильованій воді (24±0,1 год.), почергово обробляють замочене насіння стерилізуючими агентами: 96 % етанолом з додаванням Твін-80 у співвідношенні 100×1 (3±0,1 хв), розчином гіпохлориду натрію, збагаченим активним хлором (промисловий препарат "Білизна", ТУУ6-05743160.001-93) у співвідношенні 1×3 (10±0,1 хв) та розчином 10 % Н2O2 (10±0,1 хв), причому, після обробки другим стерилізуючим агентом насіння додатково промивають у стерильному 0,025 % розчині аскорбінової кислоти (2±0,1 хв), трикратну відмивку насіння від дії стерилізуючих агентів проводять у стерильному 0,025 % розчині аскорбінової кислоти (по 10±0,1 хв) та висаджують стерильне насіння на безгормональне поживне середовище Мурасіге-Скуга, що містить 60 мг/л цистеїну. Недоліком відомого способу є те, що для стерилізації дрібного насіння послідовне використання різних детергентів є токсичним і призводить до його повної стерильності, а також спосіб є тривалим, складним та не має механізму заміни речовин. В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу стерилізації дрібного насіння, діаметром до 0,3 см, для отримання високого виходу звільнених від інфекції життєздатних рослин в культурі in vitro шляхом оптимізації організації праці (безпосередньо процес стерилізації насіння та механізм заміни речовин). Поставлена задача вирішується тим, що дрібне насіння (діаметром до 0,3 см) поміщають у чашки Петрі (діаметром 4,0 см), стерилізують ультрафіолетовим випромінюванням (упродовж 20-30 хв) з подальшим додаванням за допомогою автоматичної піпетки розчин "Білизна", масовою часткою 30 %, і залишають на 10 хв, потім промивають тричі стерильною дистильованою водою з інтервалом 15 хв. Механізм заміни речовин включає додавання та відбирання рідин (розчин "Білизна" та стерильна дистильована вода) за допомогою автоматичної піпетки у чашці Петрі, наконечники якої слугують додатковим захистом від виливання насіння разом з рідинами при стерилізації. Простерилізоване дрібне насіння висаджують очним пінцетом або скальпелем на необхідне агаризоване живильне середовище. Відмітними ознаками запропонованого способу є: Розмір насіння - діаметр до 0,3 см; Стерилізація насіння триває 75-85 хв; Основною стерилізуючою речовиною є розчин "Білизна", масовою часткою 30 %; Додаткова стерилізація насіння проходить за допомогою ультрафіолетового випромінювання; Механізм заміни речовин проводиться за допомогою автоматичної піпетки у чашках Петрі, діаметром 4,0 см. Ознаки, що відрізняють запропоновану корисну модель від найближчого аналогу при взаємодії з відомими забезпечують високий коефіцієнт схожого дрібного насіння в культурі in vitro при мінімальних затратах праці (завдяки механізму заміни речовин та процесу стерилізації насіння). Здійснення запропонованої корисної моделі дає можливість отримати культуру in vitro рідких видів рослин, які мають дрібне насіння, діаметром до 0,3 см, без втрат насіння при стерилізації. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 60 Спосіб стерилізації дрібного насіння для введення в культуру in vitro, що включає стерилізацію дрібного насіння, діаметром до 0,3 см, у чашках Петрі, діаметром 4,0 см, з подальшим висаджуванням очним пінцетом або скальпелем на необхідне живильне середовище, який відрізняється тим, що стерилізацію насіння проводять ультрафіолетовим випромінюванням (упродовж 20-30 хв), з подальшим додаванням розчину "Білизна", масовою часткою 30 %, на 10 хв та триразовим промиванням стерильною дистильованою водою з інтервалом 15 хв; 1 UA 119303 U додавання та відбирання рідин проводять за допомогою автоматичної піпетки у чашці Петрі (механізм заміни речовин), наконечники якої слугують додатковим захистом від виливання насіння разом з рідинами при стерилізації. Комп’ютерна верстка М. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2