Спосіб отримання асептичної культури експлантів lysimachia nummularia l.

Реферат: Спосіб отримання асептичної культури експлантів Lysimachia nummularia L. включає відмивання частин пагонів, відібраних із насаджень природного походження, проточною Н2О та стерильною dH2O, у дезінфікуючому розчині та стерильному розчині. Відібрані пагони довжиною 1,5-3,0 см поетапно стерилізують у мильному розчині 15 хв., потім відмивають у проточній воді 10 хв. та переносять у стерильну dH2O, після цього поетапно здійснюють стерилізацію у розчинах: 70 % С2Н5ОН впродовж 30 с та 25 % розчині Н2О2 впродовж 7 хв., відмивають у стерильній dH2O впродовж 10 хв., після чого експланти розділяють на фрагменти стебел завдовжки 1,0-2,0 см з одним міжвузлям. UA 121448 U (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ АСЕПТИЧНОЇ КУЛЬТУРИ ЕКСПЛАНТІВ LYSIMACHIA NUMMULARIA L. UA 121448 U UA 121448 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі садівництва, зокрема до розмноження лікарських рослин, які можуть використовуватися в фармацевтиці та в озелененні. Здавна вербозілля застосовується в народній медицині різних країн, і перші відомості про його лікувальні властивості наводив ще Адам Лоніцер (1563). Відомі бактерицидні, протистоцидні, в'яжучі й протизапальні властивості настоянок трави вербозілля лучного (Флора СССР, 1952; Гродзінський, 1990; Лавренова, 1997; Марчишин, 2007 тощо). Існують окремі згадування про застосування в народній медицині L. vulgaris як жовчогінного, тонізуючого й антисептичного засобу (Святош, Краснікова, 2011) та L. christinae в традиційній китайській медицині (Hempen, Fischer, 2009). Ще в минулому столітті були наведені дані щодо використання дикими бджолами рослинної олії, що продукується та виділяється на трихомах деяких рослин, в першу чергу вербозілля, для покриття стінок комірок в гніздах, розташованих у ґрунті, і завдяки бактерицидним та фунгіцидним властивостям такого покриття в комірках зберігаються запаси пилку для харчування личинок цих комах (Радченко, Песенко, 1994). В останні роки активнішим стало дослідження потенційних фармакологічних властивостей лікарських рослин, зокрема Lysimachia nummularia, для створення на їх основі нових лікарських засобів. Новий напрямок наукових досліджень відкриває робота із прямої регенерації рослин, отриманих in vitro з верхівок пагонів і листя видів Lysimachia christinae, L. rubinervis та сорту L. nummularia 'Aurea', що відкриває перспективи отримання цінного матеріалу для фармакології та можливості промислового вирощування сортових зразків і декоративних форм для потреб декоративного озеленення. Тому важливою перспективою є отримання нових ліній рослин високопродуктивних за вмістом біологічно активних речовин у сировині, зокрема в рослинній олії. Розроблена біотехнологія мікроклонального розмноження цих ліній дасть можливість створити сировинну базу для отримання повністю природного високоефективного бактерицидного препарату. Відомим аналогом способу розмноження є (Zheng W., Xu X., Dai H., Chen L. Direct regeneration of plants derived from in vitro cultured shoot tips and leaves of three Lysimachia species / Scientia Horticulturae. - Volume 122, Issue 1. - 2009. -- P. 138-141.jornal homepage: www.elsevier.com/locate/scihorti), який складається з відмивання частин пагонів довжиною 3-5 см у проточній воді протягом години, потім занурення у 75 % розчин етанолу на 45 с з наступною поверхневою стерилізацією в 0,1 % розчині HgCl2 протягом 4-5 хв. Після цього тричі проводять їх відмивання у стерильній дистильованій воді (dH2O) й розділення на сегменти пагонів довжиною 0,5-0,8 см та сегменти пагонів з міжвузлям - 0,8-1,0 см. Недоліком відомого аналога є те, що у способі використовуються стерилянти, які є токсичними для молодих рослинних тканин, та такі, що значно ускладнюють процес отримання асептичної, добре ростучої культури. Також не передбачено застосування більш простого розчину, менш шкідливого для дослідника та молодих рослинних тканин. В основу корисної моделі поставлена задача усунення недоліків відомого аналога. Поставлена задача вирішується способом, згідно якого використовують розчин Н 2О2 як основний стерилянт, що є простим у використанні, менш шкідливим для дослідника та молодих тканин рослини й забезпечує високий відсоток виходу стерильних експлантів за короткий час та не потребує тривалого відмивання у стерильній dH2O, що значно спрощує підготовчий процес. Спосіб отримання асептичної культури експлантів Lysimachia nummularia L. передбачає використання як рослин-донорів L nummularia без морфологічних та фізіологічних відхилень, що стеляться по поверхні ґрунту. Як первинні експланти використовували частини пагонів із міжвузлям 1,5-3,0 см. Для ефективного знешкодження екзогенної та ендогенної мікрофлори (мікобіоти) експланти стерилізували в лабораторних умовах у два етапи: І - в нестерильних умовах та II - в умовах ламінарного боксу. На І етапі пагони витримують у мильному розчині 15 хв., інтенсивно помішуючи. Після відмивають у проточній воді протягом 10 хв. та переносять у посудину зі стерильною dH 2O. На II етапі всі маніпуляції проводять у стерильному ламінарному боксі зі стерильними розчинами та інструментами. Спосіб отримання асептичної культури L. nummularia в умовах in vitro, до складу якого входить асептична культура експлантів пагонів із міжвузлям, взятих із повзучих (сланких) рослин, мильний розчин, 25 % розчин Н2О2 та стерильна dH2O. Пагони довжиною 1,5-3,0 см поетапно стерилізують у розчинах детергенту протягом 15 хв., здійснюють: відмивання в проточній воді 10 хв., перенесення у стерильну dH2O, після чого у 70 % розчині етанолу (С2Н5ОН) на 30 с, потім у розчин Н2О2 25 % на 7 хв. та здійснюють відмивання у стерильній 1 UA 121448 U 5 dH2O протягом 10 хв., після цього експланти переносять до чашки Петрі з фільтрувальним папером, розділяють на стеблові фрагменти завдовжки 1,0-2,0 см з одним міжвузлям. Використання такого способу отримання асептичної культури експлантів L. nummularia забезпечує вихід 93-98 % асептичних регенераційно-здатних експлантів із мінімальною шкодою для рослинних тканин, що дозволяє широко використовувати його у системі прискореного виробництва значної кількість оздоровленого, високоякісного, генетично-однорідного садивного матеріалу для лікарських та фармацевтичних потреб і використання в озелененні. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 Спосіб отримання асептичної культури експлантів Lysimachia nummularia L., який включає відмивання частин пагонів, відібраних із насаджень природного походження, проточною Н2О та стерильною dH2O, у дезінфікуючому розчині та стерильному розчині, який відрізняється тим, що відібрані пагони довжиною 1,5-3,0 см поетапно стерилізують у мильному розчині 15 хв., потім відмивають у проточній воді 10 хв. та переносять у стерильну dH2O, після цього поетапно здійснюють стерилізацію у розчинах: 70 % С2Н5ОН впродовж 30 с та 25 % розчині Н2О2 впродовж 7 хв., відмивають у стерильній dH 2O впродовж 10 хв., після чого експланти розділяють на фрагменти стебел завдовжки 1,0-2,0 см з одним міжвузлям. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2