Спосіб оцінки фагоцитарної активності низькомолекулярної фракції кордової крові

Реферат: Спосіб оцінки фагоцитарної активності низькомолекулярної фракції кордової крові, який включає змішування лейкоконцентрату зі стафілококом і досліджуваним препаратом, проведення двоетапної інкубації фагоцитарної суміші при 37 °C, з тривалістю інкубації на другому етапі 120 хв., приготування мазків і їх дослідження за допомогою мікроскопа. Інкубацію фагоцитарної суміші на першому етапі проводять протягом 45 хв. UA 121500 U (12) UA 121500 U UA 121500 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі експериментальної медицини і може бути використана для оцінювання біологічної активності препаратів. Відомий спосіб оцінки фагоцитарної активності лейкоцитів [1], згідно з яким лейкоконцентрат, одержаний з гепаринізованої крові, змішують зі стафілококом і проводять інкубацію при 37 °C у 2 етапи: 30 хв. на першому етапі і 120 хв. на другому. Готують мазки і досліджують за допомогою світлового мікроскопа. Недоліком цього способу є недостатній час фагоцитарної реакції, що не дає можливості отримати достовірні показники фагоцитарної активності. Найбільш близьким до заявленого є спосіб оцінки фагоцитарної активності фармпрепаратів [2], який включає змішування лейкоконцентрату зі стафілококом і досліджуваним препаратом, проведення 2-етапної інкубації фагоцитарної суміші при 37 °C протягом 30 і 120 хв., приготування мазків і досліджування за допомогою світлового мікроскопа. Недоліком цього способу є недостатня тривалість першого етапу інкубації фагоцитарної суміші, через що не відбувається завершення фагоцитарної реакції. Внаслідок цього неможливо отримати достовірні показники фагоцитарної активності препарату. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити відомий спосіб шляхом збільшення часу інкубації фагоцитарної суміші на першому етапі, і таким чином забезпечити можливість отримання достовірних показників фагоцитарної активності низькомолекулярної фракції кордової крові (ФКК). Ця задача вирішується тим, що в відомому способі оцінки фагоцитарної активності препаратів, який включає змішування лейкоконцентрату зі стафілококом і досліджуваним препаратом, проведення 2-етапної інкубації фагоцитарної суміші при 37 °C, з тривалістю інкубації на другому етапі 120 хв., приготування мазків і їх дослідження за допомогою мікроскопа, згідно з корисною моделлю, інкубацію фагоцитарної суміші на першому етапі проводять протягом 45 хв. Збільшення часу інкубації на першому етапі до 45 хв. дає можливість завершити фагоцитарну реакцію і одержати достовірні показники фагоцитарної активності ФКК. Спосіб здійснюють таким чином. Лейкоконцентрат, одержаний з гепаринізованої крові, змішують зі стафілококом (1:50) і 0,15 мг/мл ФКК. Фагоцитарну суміш інкубують в термостаті при температурі 37 °C в 2 етапи: на першому етапі протягом 45 хв., на другому - 120 хв. Після інкубації з фагоцитарної суміші готують мазки, які фіксують, забарвлюють і досліджують за допомогою світлового мікроскопа. В мазках визначають фагоцитарне число (ФЧ) - середню кількість мікробних тіл на один нейтрофіл і індекс завершеності фагоцитозу (ІЗФ), який характеризує процес переварювання стафілококу. Приклад ФКК одержували методом ультрафільтрації [3]. Лейкоконцентрат, одержаний з гепаринізованої крові, змішували з стафілококом у співвідношенні 1:50 і 0,15 мг/мл ФКК. У контрольних пробах лейкоконцентрат змішували з стафілококом і фізіологічним розчином у такому ж співвідношенні. Експериментальні проби інкубували в термостаті при температурі 37 °C в 2 етапи: на першому етапі протягом різного часу: 15, 30, 45, 60 і 90 хв., на другому - 120 хв. Після інкубації з фагоцитарної суміші готували мазки, які фіксували розчином еозинметиленового синього (за Май-Грюнвальдом), забарвлювали розчином азур-еозину (за Романовським) і досліджували за допомогою світлового мікроскопу Warszava (Польша) під імерсією (ок.8, об. 100). В мазках визначали ФЧ і ІЗФ. Результати наведені в Таблиці. З наведених у Таблиці даних видно, що додавання ФКК до фагоцитарної суміші призводить до достовірного (р0,05) підвищення ФЧ і ІЗФ у порівнянні з контролем, тобто впливає на фагоцитарну активність лейкоцитів. Збільшенні часу інкубації до 45 хв., дозволяє досягти максимального значення ФЧ, що свідчить про завершення етапу поглинання стафілококу. При зменшенні часу на першому етапі інкубації до 30 хв. (найближчим аналогом) або підвищенні до 60 хв. значення ФЧ достовірно (р0,05) зменшується. Відомо, що процес фагоцитозу є завершеним, якщо ІЗФ не