Спосіб отримання комплексу біологічно активних речовин з протимікробною та мембраностабілізуючою дією

Спосіб отримання комплексу біологічно активних речовин з протимікробною та мембраностабілізуючою дією шляхом дрібної екстракції подрібненої рослинної сировини 70% спиртом етиловим з наступною фільтрацією та упарюванням одержаного сумарного екстракту, який відрізняється тим, що як сировину використовують листя ясена звичайного, а екстракцію проводять при температурі близько 90°С при співвідношенні сировини до екстрагенту як 1:15-1:20. (19) (21) u200509620 (22) 13.10.2005 (24) 15.03.2006 (46) 15.03.2006, Бюл. № 3, 2006 р. (72) Кічимасова Яна Сергіївна, Хворост Ольга Павлівна, Маркова Віра Михайлівна, Малоштан Людмила Миколаївна, Малий Володимир Валентинович (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 13236 4 корисною моделлю передбачено, що як сировину ким виходом готового продукту. використовують листя ясена звичайного, а екстраЕкспериментальним шляхом як екстрагент був кцію проводять при температурі близько 90°С при вибраний спирт етиловий, тому, що він здатний співвідношенні сировини до екстрагенту як 1:15вичерпно екстрагувати комплекс фенольних спо1:20. лук з листя ясена звичайного, крім того, він налеТехнологічні прийоми та режими здійснення жить до найпоширеніших екстрагентів, які викоризаявленого способу визначені експериментальним стовуються у фітохімічних виробництвах. шляхом. Оптимальна для заявленого способу 70% конценЕкспериментально доведено, що спектр біолотрація екстрагенту вибрана дослідним шляхом. гічної активності екстракту, одержаного за заявлеЛистя ясена звичайного багаті на фенольні сполуним способом, обумовлений вмістом у ньому феки, а саме гідроксикоричні кислоти, гідроксикуманольних сполук. рини та флавоноїди. Виходячи з цього, ефективАвторами досліджено біологічну активність ність розчинника різних концентрацій оцінювали за листя ясена звичайного і створено спосіб отринаступними критеріями: вміст екстрактивних речомання з нього комплексу БАР з вираженою противин та суми окислювальних фенолів (СОФ). Дані мікробною та мембраностабілізуючою дією з висоексперименту приведені у таблиці 1. Таблиця 1 Вибір концентрації спирту етилового як екстрагента за заявленим способом № п/п Концентрація екстрагенту 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 вода 10%-вий спирт етиловий 20%-вий спирт етиловий 30%-вий спирт етиловий 40%-вий спирт етиловий 50%-вий спирт етиловий 60%-вий спирт етиловий 70%-вий спирт етиловий 80%-вий спирт етиловий 96%-вий спирт етиловий Вміст сполук у перерахунку на повітряно-суху сировину, % екстрактивні речовини СОФ 35,10±0,20 2,87±0,03 37,01±0,15 3,54±0,02 28,90±0,05 3,49±0,04 30,42±0,13 4,05±0,02 25,03±0,15 3,78±0,03 30,69±0,20 5,58±0,02 40,22±0,20 6,36±0,04 37,49±0,15 6,62±0,04 31,49±0,13 5,26±0,03 18,90±0,13 2,75±0,03 Примітка: результати є середніми 5-х визначень. За даними табл.1 використання як екстрагента спирту етилового 70% концентрації найоптимальніше з точки зору вмісту, як екстрактивних речовин (ЕР), так і суми окислювальних фенолів (СОФ). Співвідношення сировина-екстрагент було теж вибрано експериментальним шляхом. Вміст ЕР та СОФ у екстрактах, одержаних при різному співвідношенні сировини до екстрагенту наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Вибір співвідношення сировини до екстрагенту № п/п Співвідношення сировина-екстрагент 1 2 3 4 1:5 1:10 1:15 1:20 Вміст сполук у перерахунку на повітряно-суху сировину, % ЕР СОФ 25,44±0,15 4,87±0,03 32,17±0,20 5,32±0,02 39,86±0,20 8,83±0,04 40,08±0,13 9,05±0,02 Примітка: результати є середніми 5-х визначень. Дані таблиці 2 свідчать, що оптимальним є співвідношення сировини до екстрагенту як 1:151:20. Зменшення співвідношення призводить до різкого зниження вмісту, як екстрактивних речовин, так і фенольних сполук у екстракті, а збільшення співвідношення економічно недоцільне внаслідок незначного збільшення вмісту екстрагованих речовин. Використання у заявленому способі фільтрування необхідне для запобігання можливої присутності у кінцевому продукті часток подрібненої сировини. Для забезпечення високого виходу готового продукту та створення умов для вичерпної екстракції з листя ясена звичайного комплексу БАР з протимікробною дією у заявленому способі перед 5 13236 6 бачено проведення екстракції при температурі ньому ЕР та СОФ. Порівняльні дані, одержані при близько 90°С. Вибір температурного режиму обуздійсненні заявленого способу при кімнатній теммовлений виходом готового продукту і вмістом у пературі та 90°С, наведені у таблиці 3. Таблиця 3 Вибір температурного режиму № температурний режим п/п 1 кімнатна температура 2 нагрівання до 90°С вихід, % (1:15-1:20) ЕР,% СОФ,% 28,32 31,00 37,28±0,20 39,75±0,18 4,55±0,04 5,44±0,02 Примітка: результати є середніми 5-х визначень. Дані таблиці 3 беззаперечно свідчать на користь проведення екстракції при температурі 90°C. Заявлений спосіб включає стадію упарювання для отримання інших консистенцій кінцевого продукту - крім густого, також сухого екстракту. Це дає більший простір маневрування у технологічному аспекті при створенні ряду лікарських форм, таких, як супозиторії, гелі, таблетки, тощо. Використання густого та сухого екстракту дозволить запобігти таких незручностей, як неточність дозування, наявність залишків екстрагенту. Спосіб здійснюють наступним чином: подрібнені до розміру часток 0,5-3,0мм листя ясена звичайного завантажують в екстрактор, заливають 70% етанолом до дзеркала, екстрагують протягом 1 години, екстракт зливають у прийомник. Екстракцію проводять ще двічі. Отримані екстракти (загальне співвідношення сировина: екстрагент 1:151:20) об'єднують, при необхідності фільтрують та упарюють до густого або сухого екстрактів. Екстракцію проводять при температурі близько 90°С з використанням киплячого водяного огрівника або екстрактора з подвійним кожухом. Вихід цільового продукту складає 24-31% від повітряно-сухої ваги сировини. Спосіб ілюструється конкретними прикладами. Приклад 1 5кг подрібненого до розміру часток 0,5мм листя ясена звичайного завантажують у екстрактор, заливають 25л 70% спирту етилового, екстрагують протягом 1 години, екстракт зливають в прийомник. Екстракцію проводять ще двічі порціями також по 25л 70%-вого спирту етилового. Отримані екстракти (загальне співвідношення сировинаестрагент 1:15) в обсязі 70л об'єднують, фільтрують та упарюють. Екстракцію здійснюють на водяній бані з температурою водяного огрівника 90°С. Вихід цільового продукту складає 24,3% від повітряно-сухої ваги сировини. Приклад 2 5кг подрібненого до розміру часток 1мм листя ясена звичайного завантажують у екстрактор з подвійним кожухом, заливають 40л 70% спирту етилового, екстрагують протягом 1 години, екстракт зливають в прийомник. Екстракцію проводять аналогічно двічі порціями по 30л 70% спирту етилового. Отримані екстракти (загальне співвідношення сировина-екстрагент 1:20) в обсязі 96л об'єднують, фільтрують і упарюють до густої консистенції (вологість 16%). Екстракцію здійснюють при температурі 90°С. Вихід цільового продукту складає 31,00% від ваги повітряно-сухої сировини. Приклад 3 5кг подрібненого до розміру часток 3мм листя ясена звичайного завантажують у екстрактор, заливають 35л 70% спирту етилового, екстрагують протягом 1 години, екстракт зливають в прийомник. Екстракцію проводять ще двічі порціями по 25л 70% спирту етилового. Отримані екстракти (загальне співвідношення сировина-екстрагент 1:17) в обсязі 80л об'єднують, фільтрують, упарюють у вакуумі до густої консистенції. Після цього сушать в вакуум-сушильній шафі або сушарці до сухого залишку. Екстракцію здійснюють на водяній бані з температурою водяного, огрівника 90°С. Вихід цільового продукту складає 27,80% від ваги сировини. Приклад 4 Протимікробну активність комплексу БАР, отриманих за заявленим способом (далі густий екстракт листя ясена звичайного) вивчали за стандартним методом дифузії в агар (метод "колодязів") з використанням двошарової заливки чашок Петрі. В якості тест-штамів використовували еталонні штами із американської типової колекції культур мікроорганізмів: Staphylococcus aureus АТСС 25923, Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 і Bacillus subtilis АТСС 6633. В якості критерію протимікробної активності вибраний розмір діаметру затримки росту мікроорганізмів. Результати наведені у таблиці 4. 7 13236 8 Таблиця 4 Протимікробна активність густого екстракту листя ясена звичайного Тест-штами 1 Staphylococcus aureus АТСС 25923 Escherichia coli АТСС 25922 Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 Bacillus subtilis АТСС 6633 Proteus mirabilis Klebsiella pneumoniae 128 Діаметр затримки росту мікроорганізмів, мм 2 14,04±0,02 13,04±0,02 14,04±0,03 15,06±0,03 13,04±0,04 13,02±0,02 Примітка: дані є середніми значеннями 5-х визначень. З даних таблиці 4 витікає, що комплекс БАР, одержаний за заявленим способом, у формі густого екстракту листя ясена звичайного має досить широкий спектр протимікробної активності, у відношенні грампозитивних та грамнегативних мікроорганізмів. Найбільш виражена протимікробна активність густого екстракту листя ясена звичайного у відношенні культур Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus та Pseudomonas aeruginosa. Приклад 5 Мембраностабілізуючу дію густого екстракту листя ясена вивчали за допомогою удосконаленого методу Шрека. При проведенні досліду у пробірки вносили у рівних об'ємах клітинну завись (з концентрацією 240000 кліток в мл3) та 1% розчин тетрацикліну. У контрольну серію додавали рівний об'єм фізіологічного розчину, до дослідної серії - рівний об'єм досліджуваних сполук з попередньою розтитровкою. Час експозиції становив 15 хвилин. Було використано модель, на тлі якої тестувався препарат порівняння сілібор, який має Мембраностабілізуючу дію. Мембраностабілізуючу дію досліджених засобів визначали у відсотках за відношенням різниці кількості живих клітин у дослідній пробірці та у контрольній серії. Результати наведені у таблиці 5. Таблиця 5 Вивчення мембраностабілізуючої дії густого екстракту листя ясена звичайного Назва субстанції 1 контроль (нативний стан) тетрациклін силібор (з додаванням тетрацикліну) екстракт листя ясена звичайного (з додаванням тетрацикліну) Кількість живих клітин 2 95,80±0,21 49,20±0,41 49,70±0,12 Мембраностабілізуча дія, % 3 – – 1,07±0,12 60,30±0,10 22,56±0,10 Примітка: результати є середніми 5-х визначень. Екстракт листя ясена звичайного має Мембраностабілізуючу дію, що перевищує дію силібору, крім того, одержаний комплекс БАР за заявленим способом на відміну від сілібору має протизапальну дію. Таким чином, заявлено спосіб одержання комплексу БАР з листя ясена звичайного з вираженою протимікробною та мембраностабілізуючою дією. Заявлений спосіб простий, економічний, передбаКомп’ютерна верстка Л.Литвиненко чає використання доступної вітчизняної сировини та екологічно безпечного реактиву, може бути здійснений на будь-якому фармацевтичному підприємстві зі стандартним обладнанням. Комплекс БАР, одержаний заявленим способом, може бути використаний як лікарський засіб у формі густого екстракту або як лікарська субстанція для створення препаратів у різних лікарських формах. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601