Спосіб визначення життєздатності еритроцитів

'Изобретение относится к гистохимии. Для повышения точности способа к суспензии эритроцитов и 10—15%— ного раствора полиэтиленоксида с м.м. 1500 добавляют пероксидазу и инкубиру ют в термостате при 37 D C. Через 3540 мин инкубации готовят мазки, фикси руют этанолом, наносят 0,25-0,3%-ный раствор О-дианиэидина и 0,006%-ный раствор перекиси водорода в 40° этаноле на 5 мин. Затем мазки промывают, высушивают и определяют процент жизне способных клеток, 3 табл. (Л С 09 1 1 329352 2 Изобретение относится к медицине, П р и м е р 1. В пробирку помещаа именно к гистохимии. ют по 0,25 мл суспензии эритроцитов Цель изобретения - повышение точи 10%-ного ПЭО-1500, добавляют пероности способа за счет того, что в ксидазу до конечной концентрации г способе определения жизнеспособности 0,05% и инкубируют в термостате при клеток» включающем инкубацию их при 37°С, периодически взбалтывая. Через в 37 С в растворе, содержащем перокси35 мин инкубации готовят мазки, фикдазу и полимер, изготовление мазков, сируют их этанолом и наносят раствор фиксацию их этанолом и последующую Ю 0,25%-ного 0-дианизидина и 0,006%обработку перекисью водорода в 40 ной перекиси водорода в 40°-ном этином этиловом спирте, в качестве половом спирте на 5 мин, После этого лимера в среде инкубации используют мазки промывают в проточной воде, 10-15%-ный раствор полиэтиленоксида высушивают и определяют процент жиэс молекулярной массой 1500, инкуба15 неспособных клеток. Вычисляют коэффицию осуществляют в течение 35-40 мин I циент вариации. а для обработки мазков после фиксаПараллельно осуществляют способ ции в качестве красителя берут 0-диа согласно прототипу. низидин в конечной концентрации 0,25 Результаты представлены в табли0,3%. це 1 . і Т а б л и ц а 1 Жизнеспособность эритроцитов, % п/п прототип предлагаемый способ 1 83 88 2 71 85 3 86 86 4 2Q 79 5 72 83 6 85 77 7 31 85 8 83 71 9 92 73 10 38 89 StSj V 66 + 7,92 12,0 Из табл.1 видно, что предлагаемый способ определения жизнеспособности клеток более воспроизводимый по сравнению с прототипом, так как коэффициент вариации составляет 2,41, т.е. 82 + 1,98 2,41 находится в пределах физиологических колебаний, П р и м е р 2, Б четыре пробирки помещают по 0,25 мл суспензии эритро цитов и 0,05%-ной пероксидазы . В каж 1329352 ной перекиси водорода в 40р-ном этилодую пробирку добавляют соответственно вом спирте на 5 мин. Мазки промывают 5, 10, 15 и 20%-ный раствор ПЭО-1500 проточной водой, высушивают. Опредеи помещают в термостат при 37°С, пеляют процент жизнеспособных клеток и риодически взбалтывая. Через 35 мин ( вычисляют коэффициент вариации (V). готовят мазки, фиксируют этанолом в течение 5 мин. На мазки наносят растРезультаты представлены в табл.2. вор 0,25%-ного 0-дианизидина и 0,006%Т а б л и ц а 2 Концентрация ПЭО-1500, Z по пор, 10 15 20 1 85 82 83 61 2 81 75 76 69 3 79 78 8! 58 4 66 83 75 62 5 83 80 73 53 6 60 82 76 46 7 75 75 80 53 8 79 79 81 58 9 73 80 78 62 10 51 81 76 64 73+3,74 80+0,88 78+1,1 59+2,53 5,12 S+S 1.1 1,41 \. 4, 29 X 35 мин, третью на 40 мин, четвертую на 45 мин. Готовят мазки и фиксируют 4 5 их этанолом в течение 5 мин. На мазки наносят раствор 0-дианизидина в 0,25%-ной и перекиси водорода в 0,006%-ной концентрации в 40°-ном П р и м е р З . В четыре пробирки этиловом спирте на 5 мин. Мазки пропомешают по 0,25 мл суспензии эритроцитов и ПЭО-1500 10%-ной концентра- 50 мывают в проточной воде, высушивают. Определяют процент жизнеспособных ции. В каждую пробирку добавляют пеклеток. Вычисляют коэффициент вариароксидазу до конечной концентрации ции. Результаты представлены в 0,05%. O l i пробирку помещают в терfFy табл.3. мостат (37°С) на 30 мин, другую на Из табл.2 видно, что наибольшая воспроизводимость способа отмечается при использовании 10 и 15%-ной концентрации ПЭО-1500. • 1329352 . Т а б л и ц а 6 3 Время инкубации, мин пор. ЗО 35 40 45 1 70 78 88 75 76 80 83 60 3 69 83 85 63 4 73 76 76 •68 5 58 85 79 61 69+3,78 V 5,48 80+1,89 82+2,52 2,36 3,06 65+3,15 4,85 Из табл.З видно, что наивысшая вое-25 производимость способа отмечается при инкубации клеток в течение 35-40 мин. Испытания показали, что предложенный способ определения жизнеспособное-ти клеток более точный, так как коэф- 30 фициент вариации находится в пределах физиологических колебаний (1-10%). сидазу и полимер, приготовление мазков с последующей фиксацией этанолом, обработкой перекисью водорода, окраской и определением жизнеспособности клеток по количеству клеток, содержащих гранулы пероксидазы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве полимера используют Ю-15%нын раствор полиэтиленоксида с молеФ о р м у л а и з о б р е т е н и я 35 кулярной массой 1500, а в качестве красителя - 0,25-0,3%-ный раствор Способ определения жизнеспособносО-дианиэидина, при этом инкубацию ти эритроцитов путем инкубации суспенпроводят в течение 35-40 мин. зии клеток в среде, содержащей перок Редактор Л»Волкова Заказ 897/ДСП Составитель Л.Стебаева Техред В.Кадар КорректорА.Зимокосов Тираж 817 Подписное БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 1J 3.035, Москва, Ж-35, Раушская наб, , д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4