Спосіб визначення проникності еритроцитів для осмотично активних органічних речовин

лля о т ли-ьнш и ііиньіиштя экз к » СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ РЕСПУБЛИК ОО ( 5 1 ) 6 G 01 N 24/10 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРРТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ОПИСАНИЕ Н АВТОРСКОМУ (21) 4101692/28-14 (22) 03,06.86 * • -, . * (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) С.Х.Межидов, О.А.Нардид и В.А.Моисеев (53) 621.015(088.8) (56) Mayrand R.R., Levitt D.G., Journal of genetal Physiology, 1983, v.8\f pp.221-237. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОНИЦАЕМОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ ДЛЯ ОСМОТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ОРГАНИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к биологии и медицине и касается изучения проницаемости мембран эритроцитов для осмотически активных органических веществ. Цель изобретения упрощение способа путем сокращения трудоемких операций. Для этого к суспензии клеток в капилляре, находящемся в резонаторе спектрометра ЭПР добавляют р-р, содержащий осмотически активное органическое вещество П-88 [Р (ОАВ), радикал 2,2,6,6-тетраметил-4-оксопиперидин-1-оксил и парамагнитную соль К э [Fe(CN)6] до получения концентрации двух последних э в суспензии 2-(Ю" - 10" ) моль/л и 0,09-0,11 моль/л соответственно. Наблюдают спектр ЭПР радикалов только в цитозоле клеток, т.к. парамагнитная соль не проникает в клетку и уширяет спектр радикалов вне клеток. При наличии во внеклеточной среде ОАВ происходит дегидратация клеток, если это в-во проникает через мембраны клеток, то происходит их регидратация; в связи с этим повышаются конц. радикала вне клеток и его химический потенциал. Поэтому радикал входит в клетку вслед за ОАВ и водой пропорционально их количеству, что позволяет проследить кинетику проникновения ОАВ через мембрану клеток по кол-ву радикала в цитозоле, зависящего от кол-ва проникновения ОАВ и воды. . 1 . • 138400,6 Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для изучения проницаемости мембран эритроцитов для осмотически а к т и в ных органических веществ. Цель изобретения - упрощение способа за счет, сокращения числа трудоемких операций. Способ осуществляют следующим об~> 10 р * а э о м . • , " • • • ридин-1-оксила и 30% глицерина. После перемешивания снимали спектры ЭПР радикала через каждые 2 мин с " момента прибавления раствора. Затем получали график, построенный путем обработки полученных дан-ных, используя уравнение In = h к - h< = - К1 ; - . - . . . . К суспензии клеток в капилляре, где h' - интенсивность спектра находящемся в резонаторе спектрометK, - ЭПР радикала конечная . ра" ЭПР при известной температуре, , и через время "с" с о о т . добавляют раствор с такой же темпе15 ветственно, - ;,'• - ,*• і -• ,' ратурой, содержащий осмотически а к тивное органическое вещество, радикал 2 , 2 , 6 , б-тетраметил-4-оксопипери^Полученное значение константы скодин-1-оксил и парамагнитную соль рости из графика К = 1,3*10" с" . К^ [Fe(CN) 6 J до получения концент20 П р и м е р 2. Способ осущест-' рации двух последних в суспензии вляли в соответствии с примером 1, 2»1(Г* - 10~4 моль/л и 0,09-0,11 моль/л только раствор вместо .глицерина со- ; соответственно. держал 30% 1,2-пропандиола. Получен- 1 , . При этом наблюдается спектр ЭПР ное значение константы скорости К = радикалов, находящихся только в ци- 25 = 3,1 -Ю- 3 с" 1 . тозоле клеток, так как парамагнитная П р и м е р З . Способ осуществлясоль не проникает в клетку и уширяет ли в соответствии с примером 1, тольспектр радикалов, находящихся вне ' . ко вместо глицерина раствор содержал клеток. 30% этиленгликоля. ' При наличии во внеклеточной среде 30 Полученное значение 1 константы скоосмотически активного вещества происрости из графика К = 2,3*10" с" . ходит дегидратация клеток. Если это. • :. Из приведенных примеров следует, вещество проникает через мембраны к л е что способ позволяет определять про-1 т о к , то происходит их регидратация. В ницаемости клеточных;мембран на одсвязи с этим повышается концентрация •зс ной пробе и не требует центрифугирорадикала вне клеток и соответственвания, что сокращает время осущестно его химический потенциал. Поэто-*, вления способа на 50І10 мин и знаму радикал входит в клетку вслед за чительно упрощает е г о . осмотически активным веществом и в о В связи с тем, что проникновение дой пропорционально их количеству. вещества можно регистрировать веко- . 40 Это позволяет следить за кинетикой ре после перемешивания (через 1 мин), проникновения осмотически активного способ может быть использован для вещества через мембрану клеток по к о определения проницаемости клеточных личеству радикала в цитозоле, з а в и мембран не только для медленно, но и сящего от количества проникающего для быстро проникающих веществ. осмотически активного вещества и в о Ф о р м у л а Способ поясняется следующими примерами. П р и м е р 1. Эритроциты т р е х 50 кратно отмывали от лейкоцитов ф и з раствором' центрифугированием в т е ч е ние 20 мин при 3 тыс. об/мин. Затем поместили в капилляр", установленный в резонаторе спектра. После д о с т и 55 жения -й С прибавили 1:1 раствор, содержащий 0,10 моль/л К 3 5--W моль/л иминоксильного радикала 2,2,6,6-тетраметил-4-оксопипе и з о б р е т е н и я Способ определения проницаемости эритроцитов для осмотически активных органических веществ путем введения исследуемого вещества в .суспензию эритроцитов, инкубации и последующего определения изменения физико-химического параметра цитозоля, о т л и ч а ю щ и й с я тем, ч т о , с ц е лью упрощения способа за счет сокращения числа, трудоемких операций, в среду инкубации дополнительно вводят 4 1384006 яминоксильный радикал 2,2,6,6-тетраметил-4-оксопиперидин-1~оксил в конечной концентрации 2 - Ю " 5 - 10~ моль/л и феррицианид калия в конечной концентрации 0,09 Редактор Т.Иванова ,. 0,11 моль/л, затем регистрируют сигнал электронно-парамагнитного резонанса иминоксильного радикала цитозола и по изменению его интенсивности определяют проницаемость. Составитель Н,Гуляева Техред Л.Олийньас Корректор М.Шароши Заказ 141/ДСП ^ Тираж 752 Подписное В Ш И Государственного комитета СССР Н Ш по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул,Проектная,