Спосіб мікроклонального розмноження раувольфії

Способ микроклонального размножения рауволь фии, включающий эксплантацию па зушных почек на модифицированную пита тельную среду Мурасиге-Скуга, получение растительного материала, культивирование его до получения растений-регенерантов и их укоренение, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что эксплантацию осущ ествляют на питатель ную среду, содержащую макросоли по Мурасиге-Скугу в конце н тра ции, равной 1/3 указанной в прописи, микроэлементы по Му Изобретение относится к биотехнологии и может применяться для ускоренного размножения растений с их одновременным оздоровлением от фитопатогенных микроорганизмов. Целью изобретения является разработка способа микроклонального размножения разных видов рауволь фии, в том числе видов, являющихся источником ценных алкалоидов, используемых в медицине. Пример. Вычлененные из однолетних побегов пазушные почки с участком побега после поверхностной стерилизации переносят в асептических условиях на простерили расиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 2 мг/л глицина, 3-5 мг/л аскорбиновой кислоты, 0,30,5 мг/л ИУК, 0,01-0.1 мг/л БАП, 30-50 мг/л гумата натрия, 15-20 г/л сахарозы. 5-7 г/л агара, культивирование растительного материала осуществляют на питательной среде того же состава или на питательной среде , содержащей макросоли по Мурасиге-Скугу в концентрации, равной 80% от указанной в прописи, микроэлементы по Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 5 мг/л аденина, 1 мг/л кинетина, 0,5 мг/л а-НУК, 1 мг/л тиамина, 3-5 мг/л аскорбиновой кислоты, 30-50 мг/л, гумата натрия, 20 г/л сахарозы, 5-7 г/л агара, и укоренение осуществляют на питательн ых ср едах тог о ж е с ос та ва и ли на питательной среде, содержащ ей макросоли по Уайту, микроэлементы по МурасигеСкугу, 5 мл/л Fe-хела та, 2 мг/л гли ци на, 3 мг/л аско рбинов ой к исло ты, 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты, 50 мг/л гумата натрия, 10 г/л сахарозы, 5-7 г/л агара. зованную питательную среду следующего состава, мг/л: Макросоли по Мурасиге-Скугу 1/3, микроэлементы по Мурасиге-Скугу: Fe-хелат 5 мл /л Глицин 2 Аскорбиновая кислота 3-5 ИУК 0,3-0,5 БАП 0,01-0,1 Гумат натрия 30-50 Сахароза 15-20 г/л Агар 5-7 г/л Пробирки с высаженными пазушными почками помещают в термостатированные С > ел ел со с* О 15586 условия (22-28°С) с 12-16-часовым световым днем и с освещением 1000-2000 люкс. Через 30-50 дней из почек вырастают стебельки, которые в асептических условиях отделяют от остатка стебля исходного растения. В дальнейшем стебельки либо укореняют, либо размножают далее. С целью размножения стебельки разрезают на фрагменты с одной пазушной почкой и культивируют в тех же условиях. Дальнейшее размножение выросших из пазушной почки растений проводят либо на среде указанного выше состава, либо же на среде следующего состава, мг/л: Макросоли по Мурасиге-Скугу 80%, микроэлементы по Мурасиге-Скугу, Fe-хелат 5 мл/л 5 Аденин 1 Кинетин 0.5 а-НУК 1 Тиамин 3-5 Аскорбиновая кислота Гумат натрия 30-50 Сахароза 20 г/л Агар 5-7 г/л Укореняют растения на среде следующего мг/л: Макросоли по Уайту, микроэлементы по Мурасиге-Скугу. Fe-хелат 5 мл/л 2 Глицин 3 Аскорбиновая кислота ИУК 0.5 50 Гумат натрия Сахароза Агар Вид растения Юг/л 5-7 г/л Укорененные растеньица высаживают в почву и выращивают, как это принято для тропических растений. По изложенному способу были размно5 жены, укоренены, высажены в почву и выращены до взрослого состояния раувольфии змеиная Rauwolfia serpentina, раувольфия мутовчатая Rauwolfia verticillata, раувольфия седоватая Rauwolfia canescens, рауволь10 фия рвотная Rauwolfia vomitorla, раувольфия китайская Rauwolfia chinensis, раувольфия кафрская Rauwolfia caffra. Все размноженные in vitro растения нормально развивались, цвели и плодоносили, отличались 15 здоровым внешним видом. Других отличий по сравнению с исходными растениями не установлено. В таблице даны результаты микроклонального размножения разных видов раувольфии на основе культивирования 20 пазушных почек стебля. Наиболее легко по изложенному способу размножается раувольфия рвотная, относительно трудно - раувольфия китайская и раувольфия седоватая. Последние два вида 25 для эффективного размножения необходимо выращивать попеременно на приведенных составах питательных сред. Таким образом, предлагаемый способ позволяет размножать разные виды рау30 вольфии. Это особенно важно для тропических, фармакологических ценных видов как при их выращивании в теплице, так и для 'ускоренного размножения ценных форм с одновременным их оздоровлением от фито35 патогенных микроорганизмов. Формирование побегов из почек На среде 1* Укоренение побегов На среде 2 На среде 1 Высажено Сформиро- Высажено Сформиро- Высажено почек, шт вали побе- почек, шт вали побеги, % ги. % побегов, Укоренилось, % шт R. serpentina 52 86,5±4,7 37 94,6±3,7 30 0 R. vertlclUata R. canescens 60 30 0 35 90,0±5,5 45,7±8,4 41 41 85,0±4,6 56,1 ±7,8 28 3,6±3,5 tt. vorniiona R. chinensis R. caffra 61 98,4±1,6 54 98.1±1,9 56 85,7±4,7 53 62 49,1 ±6,9 95.2±2,7 38 49 50,0±8,1 * 97,2±2,0 31 39 0 \ 51,3±8,0 15586 Продолжение таблицы Вид растения Укоренение побегов На среде 2 Число жизнеспособ На среде 3 ных, морфологически нормальных растений, растущих в почве Высажено Укорени Высажено Укорени Всего вы побегов, лось, % побегов, лось, % сажено, шт шт % шт R. serpentina 35 2, 9±2, 8 53 79,2 ±5, 6 40 87, 5±5, 2 R. vertlcillata 37 0 74 82, 4±4. 4 53 88, 7±4, 3 R.cane scens R. vomltoria R. chinensls R. caffra 15 6, 7±6, 5 32 68, 8±8, 2 24 62, 5±9, 9 38 78. 9±6, 6 43 95,3 ±3, 2 39 82,1 ±6, 1 18 0 47 52,2 ±7, 3 53 47,2 ±6, 9 51 76, 5±5, 9 53 96,2 ±2, 6 63 95, 2±2, 7 Среда 1, среда 2, среда 3 - номер среды в порядке приведения ее состава в тексте заявки. Упорядник Замовлення 4191 Техред М.Моргентал Коректорі О.Кравцова Тираж . Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Киї в-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101