Спосіб ранньої діагностики злоякісних пухлин

Спосіб ранньої діагностики злоякісних пухлин, що включає операцію дослідження цитогенетичних 3 15873 4 Поставлена задача вирішується використанHuman Genet,- 1978, v.28, N2, pp.255-260 ]. Тому, ням пропонованого способу, який, як і відомий зауважуючи на ключовій ролі ДНКспосіб ранньої діагностики злоякісних пухлин, місгіпометилювання у феномені передканцерного тить операцію дослідження цитогенетичних порумеханізму пухлинної прогресії, важливо підкреслишень хромосомної організації на клітинах крові, за ти функціональну індукцію геномним ДНКрезультатами якого виконують ранню діагностику гіпометилюванням стану деконденсації перицентзлоякісних пухлин, а, відповідно до пропозиції, ромерного/центромерного гетерохроматину (на операцію дослідження цитогенетичних порушень стадії метафази -максимальної конденсації хромахромосомної організації на клітинах крові виконутину), опосередкованої значним деметилюванням ють в присутності ДНК-деметилюючого реагенту сателітними ДНК- повторів, як основних структурта протипухлинного препарату, а за результатами них елементів гетерохроматину. Одним з протипудослідження виявляють ранній аномальний мехахлинних препаратів, що досліджувалися для виявнізм ДНК-гіпометилювання на рівні соматичних лення феномену ДНК-гіпометилювання в клітин крові при пухлинній прогресії та оцінюють ранньому механізмі пухлинної прогресії був Амітопротекторні можливості протипухлинного препаразин. Так, саме за аутофлюоресценції амітозину ту на ранній стадії при пухлинній прогресії. [Потопальський A.I. Препарати чистотілу в біології Суть пропонованої корисної моделі пояснюта медицині. // Київ: Наукова Думка -1992, - 237 с.], ється графічними матеріалами та фотографіями, мала місце диференційна залежність Амітозину де: від метильованого (В) (здоровий донор) та гіпомеНа фіг.1 показано спектри флуоресценції "Амітильованого (С) (хворий на пухлинну прогресію) тозину" (А) з нативними препаратами геномних стану геномних ДНК лімфоцитів (Фіг.1). На рівні ДНК здорового донора (В) та при пухлинній пробласттрансформованих лімфоцитів виявлена спегресії (С). цифічність флуоресценції амітозину лише з інтерНа фіг.2 наведена діаграма амітозинфазним гетерохроматином у хворих на онкологічспецифцічної флуоресценції культури лімфоцитів ну прогресію (тиреоїдний рак, n=153; перифирійної крові хворих на онкологічну прогреколоректальний рак, n=174), пов'язаною з геномсію та при дії ДНК-деметилюючого реагенту 5'-Азаним ДНК- гіпометилюванням і не виявлялась флуцитидину в культурі лімфоцитів здорових донорів. оресценція Амітозину з інтерфазними лімфоцитаНа фото 1-4 показана специфічна флуоресцеми здорових донорів (п =128) (Фіг.2), у яких нція "Амітозину" з культурою лімфоцитів при пухпрофіль ДНК-гіпометилювання був відсутній (за линній прогресії та дії ДНК-деметилюючого реагепопередніми даними заявки на корисну модель № нту 5-Аза-цитидину. При цьому на фото 1 u200508943 від 21.09.2005 р.). Модельною систеконтроль; на фото 2 - колоректальний рак; на фото мою ДНК-гіпометилювання була культура клітин 3 - рак щитовидної залози; на фото 4 - 5-Азалімфоцитів крові здорових донорів, що культивуцитидин. На фото 5 показано профіль генетичного валась в присутності ДНК-деметилюючого реагенполіморфізму ДНК-метилтрансферазного гену при ту 5-аза-цитидину (10-5Μ) та Амітозину (25 мкг/мл) пухлинній прогресії за результатами ПЛР - ампліна протязі 48 год. в термостаті при температурі фікації. 37°С. Показано, що Амітозин виявляє специфічну Авторами експериментально встановлено, що флуоресценцію інтерфазних клітин лімфоцитів ключовим механізмом специфічного соматичного здорових донорів, що культивувались з ДНКмутагенезу при канцерогенезі є епігенетичне ДНКдеметилюючим реагентом, на відміну від контрогіпометилювання геному, суттєвим проявом якого льних лімфоцитів здорових донорів без 5-азає глобальне гіпометилювання Alu повторів, найчицитидину (Фото 1-4; Фіг.2). Таким чином, протипусельніших за часткою (до 5%) типових сателітних хлинний препарат - "Амітозин" - можна вірогідно ДНК-повторів прицентромерного/центромерного пов'язувати з виявленням раннього механізму гетерохроматину [заявка на корисну модель № ДНК-гіпометилювання при пухлинній прогресії на u200508943 від 21.09. 2005 р.]. Саме стан ДНКрівні соматичних клітин крові. Окрім того, нами гіпометилювання геному через глобальне деметипоказано, що при пухлинній прогресії має місце лювання Alu повторів корелював з виявленою насуттєва аномалія в профілі геномної ампліфікації ми деконденсацією прицентромерногену ДНК-метилтрансферази 1, ключового фермего/центромерного гетерохроматину метафазних нту епігенетичного механізму ДНК-метилювання хромосом та центромерною нестабільністю, що геному, за методом ПЛР (Фото 5), Нами виявлена поєднувалась з появою передчасного розділення важлива суттєва кореляція між дією Амітозину в сестринських хроматид в популяції лімфоцитів культурі лімфоцитів хворих з пухлинною прогресіпериферійної крові у хворих на онкологічну проєю та відсутністю аномального профілю ампліфігресію [Деклараційний патент України на винахід кації ДНК-метилтрансферазного гену, що виявля№ 64533А, 2004 р.]. Явище передчасного роздіється у геномних ДНК лімфоцитів хворих на лення сестринських хроматид лежить в основі пухлинну прогресію, у порівнянні з геномною ДНК перш за все аномальної сегрегації хромосом до здорових донорів (Фото 5). Продукт ампліфікації полюсів мітотичного веретена та анеуплоїдій (змігену ДНК–метилтрансферази 1 при культивуванні неним числом хромосом у каріотипі як в більшу так лімфоцитів хворих на пухлинну прогресію в присуі в меншу сторони), що типово супроводжують тності Амітозину адекватно відповідав продукту пухлинну прогресію та є однією з головних сучасампліфікації гену ДНК-метилтрансферази 1 здороних парадигм механізму розвитку канцерогенезу вої геномної ДНК (128 п.н). Таким чином, протипу[MehesK. Nonrandom centromere division: a хлинний спектр дії Амітозину може вірогідно пов'яmechanism of nondisjunction causing aneuploid. / зуватись саме з протекторною дією в ранньому 5 15873 6 молекулярному механізмі аномального геномного рої адекватно асоціюється з пухлинною прогресією ДНК-гіпометилювання при пухлинній прогресії. та корелює з клінічною верифікацією онкодіагнозу. Отримані результати дають підставу стверджуваХвора О., 32 років, пройшла лікування з хірурти, що Амітозин є адекватним інструментом у спогічним втручанням в Центрі лікування та реабілісобі виявлення та корекції раннього аномального тації хворих з патологією щитоподібної залози молекулярного механізму ДНК-гіпометилювання (клінічна лікарня N16), за верифікацією клінічного на рівні соматичних клітин крові при пухлинній діагнозу – карцинома щитоподібної залози. За прогресії. способом корисної моделі фіксували амітозинПриклади. специфічну флуоресценцію культури лімфоцитів Хвора Η. , 17 років, пройшла лікування з хірурпериферійної крові хворої при культивуванні з Амігічним втручанням у Київському Центрі лікування тозином, у порівнянні з контролем здорового дота реабілітації хворих з патологією щитоподібної нора, методом флуоресцентної мікроскопії. Встазалози (клінічна лікарня N16). За верифікацією новлена кореляція флуоресценції лімфоцитів діагнозу на основі У ЗІ, гормонального аналізу та периферійної крові хворої при культивуванні з аміморфологічної експрес-діагностики тканини залози тозином та клінічною верифікацією онкозахворюпід час операції хвора мала карциному щитоподібвання. ної залози з лімфопроліферативним метастазуХворий П., 50 років, пройшов лікування з хіруванням. ргічним втручанням в Інституті онкології АМН За пропонованим способом відбирали 5мл пеУкраїни, з клінічною верифікацією діагнозу колорериферійної крові хворої (внутрішньовенне) до опектальний рак. За методом флуоресцентної мікросрування та лікування. Лімфоцити хворої (0,5мл копії виявлена амітозин-специфічна флуоресценцільної крові на 5мл середовища RPMI 1640 з 10% ція лімфоцитів периферійної крові хворого, що ембріональної телячої сироватки та 0,01мг мітогевідбирались до операції та культивувались, як у нстимулюючого фітогемаглютиніну) культивували наведеному прикладі 1 та 2, в присутності Амітов присутності Амітозину (25мкг) на протязі 48 гозину. Контрольні лімфоцити периферійної крові дин. За контроль мали культуру лімфоцитів периздорового донора культивувались за аналогічними ферійної крові здорового донора. Методом флуоумовами в присутності Амітозину. Показана аміторесцентної мікроскопії була виявлена амітозинзин-специфічна флуоресценція тільки лімфоцитів специфічна флуоресценція лімфоцитів хворої, за периферійної крові хворого при культивуванні з відсутності флуоресценції контрольних лімфоциАмітозином, у порівнянні з контролем. Встановлетів, що культивувались також з Амітозином. За на кореляція амітозин-специфічної флуоресценції результатами аналізу було встановлено, що амілімфоцитів хворого з онкологічною прогресією за тозин-специфічна флуоресценція лімфоцитів хводаними клінічного діагнозу. 7 Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 15873 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601