Спосіб одержання антиаутотоксичної сироватки

Способ получения антиаутотоксической сыворотки путем иммунизации животных, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве антигена для иммунизации животных-доноров антитоксических антител используют наиболее токсичную фракцию белков межклеточной жидкости пораженного организма (перфузата). С > (Л СО L Изобретение относится к медицине, в частности - к иммунологии и представляет собой сыворотку для проведения дезаутоинтоксикации организма при лучевой или ожоговой патологии. В настоящее время для лечения процессов аутоинтоксикации методом иммунотерапии в основном применяют сыворотки реконвалесцентов, которые не дают стабильного терапевтического эффекта и применяются только при нелетальных поражениях. Поэтому, в настоящее время, когда проблема лечения летальных форм лучевой и ожоговой патологии принимает важное значение, разработки методов их лечения занимают одно из ведущих направлений в практическом здравоохранении. Известны антитоксические сыворотки которые используют для лечения острой лучевой и ожоговой болезней (1, 2, 3). Эти сыворотки представляют собой прозрачную желтоватую вязкую жидкость, запаянную в ампулы или флаконы, которая вводится в организм пораженного периодически по мере развития патологии. Однако этим сывороткам присущи следующие недостатки: - необходимость введения в пораженный организм большого количества чужеродного белка нежелательна, так как возможно развитие сывороточной болезни; - использование этих сывороток связано с многократностью их введения, что при 17534 водит к длительности лечения и чревато осложнениями; - эти сыворотки не обладают стабильным терапевтическим эффектом при летальных поражениях, а только облегчают протекание нелетальных поражений. Наиболее близкой к заявляемому является (1), которую получают путем иммунизации животных-доноров белками 10 перфузатов. Недостатком ее является нестабильность терапевтического эффекта. В основу изобретения была поставлена задача создать сыворотку, которая бы обладала более высоким терапевтическим эф- 15 фектом. Задача достигается тем, что согласно изобретению, в качестве антигена для иммунизации животных-доноров антитоксических антител используют наиболее 20 токсичную фракцию белков межклеточной жидкости пораженного организма (перфузата). Антиаутотоксическая сыворотка получается путем внутриконьюнктивальной имму- 25 низации кроликов - доноров антител. Иммунизация проводится по следующей схеме І Дни Концентрация антиге 4 вотное помещают в эксикатор, где находится ватка с эфиром, когда животное входит в наркоз, его извлекают из эксикатора, фиксируют кверху брюшком, для поддержания наркоза одевают на голову стаканчик, в котором лежит ватка с эфиром. Хирургическая стадия наркоза контролируется по корнеальному рефлексу. Животному по переднесрединной линии вскрывают грудную полость, удаляют грудину. В полость левого желудочка вводят канюлю, затем она осторожно вводится за створки клапана аорты, где она и фиксируется. На правом желудочке сердца делается надрез. Организм животного промывается физиологическим раствором хлорида натрия при 37 градусах Цельсия в количестве 800 мл для удаления крови. После этого животное помещают на аппарат "сердце-легкое" собственной конструкции (1). Аппарат снабжен устройством подогрева перфузата до37 гр. Цельсия, имитатором пульсовой волны, аэрлифт - оксигенатором, который обеспечивает подъем вышедшего перфузата на высоту 110 см от уровня животного и обогащение его кислородом воздуха. Общий объем перфузионной жидкости - около 400 мл. Длительность пер Глаз животного на, % Количество антигена, мл 0,1 1 Правый Левый 1 Правый 0,1 6 1 Левый 0,1 7 1 Правый 0,1 8 1 Левый 0,1 11 2 0,1 12 2 Правый Левый 13 2 Правый 0,1 1 1 2 3 0,1 4 5 9 10 0,1 16 - Взятие крови методом тотального кровопускания, получение иммунной сыворотки. Получение очищенного аутотоксина для иммунизации им кроликов: 30 Отбирается крыса-самец линии Vistar, весом 180-250 г с моделью изучаемой патологии нш 2-е сутки после ее нанесения. Жи фузии - около 2 ч (до развития анасарка). После окончания перфузии перфузат собирают и концентрируют методом обдувания воздухом в холодильнике при 4 гр. Цельсия. Когда концентрация натрия хлори 17534 да в перфузате достигнет 18-20%, концентрирование прекращают. Концентрированный перфузат сливают в пробирку и помещают в холодильник на 24 ч. За это время в перфузате появятся сероватые хлопья - комплексы белков, которые осаждают центрифугированием при 3000 об/мин в течении 10 мин. Их трижды отмывают 20% раствором хлорида натрия при 4 гр. Цельсия. После этого осадок растворяют 10 в изотоническом растворе хлорида натрия, доводя концентрацию белка в растворе до 1-2%. Полученный раствор ампулируют и используют для иммунизации кроликов - про- 15 дуцентов антител. Характеристика сыворотки. Антиаутотоксическая сыворотка должна давать реакцию преципитации с глобулином сыворотки крови крысы. Если имеется 20 преципитация с альбумином сыворотки крови крысы, то такая сыворотка выбраковывается. Применение сыворотки. 25 Упорядник Замовлення 4238 Животному с заведомо летальным ожоговым или лучевым повреждением (ЛД 100/14,-т.е. смерть всех контрольных животных наступает в сроки до 2-х недель) в первые часы после моделирования патологии необходимо под кожу бедра ввести 0,05 мл противолучевой или противоожоговой антиаутотоксической сыворотки однократно. Это мероприятие останавливает в организме пораженного животного цепь реакций "летального синтеза", которые приводят к летательному исходу в отдаленные сроки (2-3 недели от нанесения поражения). Таким образом, предлагаемая антиаутотоксическая сыворотка обеспечивает пораженному организму с летальными формами лучевой или ожоговой патологии переживание этого состояния, что позволяет достичь 100% терапевтического эффекта, животные выживают, а патология у них протекает как таковая у животных с нелетальным поражением. Техред М.Моргентал Коректор Н. Король Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101