Спосіб диференційної діагностики ексудативних плевритів неясної етіології

Спосіб диференційної діагностики ексудативних плевритів неясної етіології, що полягає у дослідженні внутрішньоплевральної рідини, який відрізняється тим, що після центрифугування плевральної рідини відбирають надосад, який розводять фосфатним буфером, після чого в дослідний зразок послідовно додають динатрієву сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти, сироватку донорської крові І групи і азотнокисле срібло з пода 3 18500 4 ліжка у високо спеціалізованому медичному зазної етіології; кладі; - рівні діагностичної специфічності та загаль- навіть такий складний діагностичний алгоної ефективності досить відрізняються в різних ритм припускає відсутність визначення генезу аналогічних дослідженнях. плеврального випоту приблизно в 15% від усіх В основу корисної моделі поставлена задача випадків. створення способу диференційної діагностики екЯк найближчий аналог обраний спосіб дифесудативних плевритів неясної етіології, в якому ренційної діагностики ексудативних плевритів шляхом дослідження надосадку внутрішньоплевшляхом визначення активності аденозинральної рідини пацієнта з плевральним випотом, дезамінази та її ізоферментів у плевральній рідині, який, після його розведення фосфатним буфером, що отримують при торакоцентезі, та в сироватці послідовно оброблюють дінатрієвою сіллю етилекрові [див. Gorguner М., Сегсі М., and Gorguner I. ндіамінтетраоцтової кислоти, сироваткою донорDetermination ofadenosine deaminase activity and its ської крові І групи та азотнокислим сріблом з поisoenzymes for diagnosis ofpleural effusions // дальшою витримкою розчину на денному світлі до Respirology. -2000. -Vol.5. -P.321-324]. Зразки плепояви світло-коричневого кольору та визначенням вральної рідини центрифугують 15хв. зі швидкістю особливостей кривих спектрофотограм при замі1000об/хв., надосадок зберігають при – 20°С; кров рах оптичної щільності дослідного та контрольного також центрифугують 5 хвилин при 5000об/хв. і зразків у діапазоні хвиль видимого спектру 340зберігають в тих же умовах. 500нм досягається підвищення точності і специфіВідомо, що зростання рівня ферменту аденочності способу, скорочення строків диференційної зин-дезаміназа (АДА) у внутрішньо плевральній діагностики, в результаті чого з’являється можлирідині є проявом дисфункції імунної відповіді. Цей вість діагностувати хворобу на більш ранніх стадіфермент існує у 3-х основних ізоформах. Фермент ях її розвитку та раніше розпочати адекватне етіознайдено в усіх типах клітин, при цьому ізоферпатогенетичне лікування. мент АДА1 переважає в лімфоцитах та моноцитах, Поставлена задача вирішується тим, що у тоді як АДА2 міститься в моноцитах та макрофаспособі диференційної діагностики ексудативних гах, окрім того, збільшення концентрації внутрішплевритів неясної етіології, який включає досліньоклітинного АДА2 спостерігається при інфікувандження внутрішньоплевральної рідини, згідно коні мікроорганізмами. З’ясовано також, що АДАрисної моделі, після центрифугування плевральактивність значно посилюється в рідині туберкуної рідини відбирають надосад, який розводять льозного генезу, та концентрація ферменту значно фосфатним буфером, після чого в дослідний зразмінюється у випадках плевритів різної етіології. зок послідовно додають динатрієву сіль етилендіАДА-активність визначають традиційним колоамінтетраоцтової кислоти, сироватку донорської риметричним методом. Використовують фотоелекрові І групи і азотнокисле срібло з подальшою ктрокалориметр, у якому порівнюють забарвлення витримкою розчину на денному світлі до появи зразка зі стандартним розчином в умовних одинисвітло-коричневого кольору, дослідний та контроцях. Субстратом цього методу є аденозин. Зразок льний зразки поміщають у спектрофотометр, реінкубують з субстратом протягом 1 години на воєструють величину оптичної щільності в діапазоні дяній бані при 37°С. Для окремого визначення акхвиль видимого спектру 340-500нм з кроком 10нм тивності АДА1 і АДА2 ізоформ додають 200нмоль/л та проводять аналіз кривої оптичної щільності, яку еритро-9-(2-гідрокси-3-ноніл) аденін гідрохлориту отримують внаслідок віднімання показників конт(ЕГНА) в розчин з реагентом до інкубації з суброльного розчину з відповідних показників оптичстратом, оскільки ЕГНА є потенційним інгібітором ної щільності дослідного зразка і при висхідному лише АДА1 ізоформи. Техніка визначення рівня типі кривої спектрограми, наявності піків на довАДА2 така ж, як і у випадку загального АДА. Режині хвиль 400-420нм та 460-480нм діагностують зультати вимірів оброблюють за комп’ютерними плеврит пухлинної етіології, при висхідному типі статистичними програмами. Розрахунки активності спектрограми, без піку на довжині хвиль 400АДА-ферменту проведено для усіх основних типів 420нм - плеврит туберкульозної етіології, при низплевритів - туберкульозного, неспецифічного хахідному типі кривої спектрограми без піку на доврактеру та для метастатичних випотів. Визначено, жині хвиль 400-420 діагностують плеврит неспещо найбільша активність ферменту спостерігалася цифічної запальної етіології. у випадках туберкульозного плевриту (у середПередумовою створення нового способу диньому - 85,2у.о.), нижча - характерна для неспеференційної діагностики ексудативних плевритів цифічних плевритів (67,3у.о.), значно нижча - при стала запропонована Сусловим Є.І. та співавтопухлинних плевритах (28,1у.о.). рами [див. Роль ДНК-протеин-Са2+ -комплексов в Однак цей спосіб має наступні недоліки: канцерогенезе. Методы их определения для ран- недостатня точність дослідження, оскільки у ней диагностики злокачественных опухолей легких розрахунковій формулі активності ферменту є ем/ Суслов Е.И., Подгаевская Т.П., Пленов С.Н., Чепірично підібрані коефіцієнти, які відрізняються в пиль П.И., Кузовкова С.Д., Григорович Л.Л. // Журн. різних дослідженнях - від 40 до 70; АМН Украины. - 1997. - №3. - С.282-290] концепція - потрібно проводити досить багато розрахунпро роль ядерних кальцій-зв’язуючих білків у регуків з використанням складного математичного ляції стабільності геному клітин у різних умовах апарату, що потребує тривалого часу; функціонування та циклу розвитку останніх. Згідно - застосований фермент має найбільшу активцієї концепції, при розвитку злоякісних пухлин із ність саме у лімфоцитах, характерні кількісні зміни ядерного хроматину малігнізованих клітин у кров останніх виявлені лише для плевритів туберкульота інші біологічні рідини (зокрема, в слину) надхо 5 18500 6 дять у підвищеній концентрації специфічні ядерні на приладі СФ-46 у діапазоні хвиль видимого спеккальцій-зв’язуючі білки. Враховуючи значну подібтру 340-500нм з кроком 10нм та проводять аналіз ність білкового, електролітного та рН- обумовлекривої оптичної щільності, яку отримують внасліного показників крові, лімфи та інших біологічних док віднімання показників контрольного розчину з рідин організму, логічно було припустити, що такі відповідних показників оптичної щільності дослідж кальцій-білкові сполуки ядерного генезу знахоного зразка. І при висхідному типі кривої спектрогдяться і у внутрішньоплевральній рідині, тим рами, наявності піків на довжині хвиль 400-420нм більш, що при пухлинному походженні останньої, та 460-480нм діагностують плеврит пухлинної етіяк правило, більш аніж у 50% випадків злоякісні ології, при висхідному типі спектрограми, без піку клітини навіть вільно „плавають” у плевральному на довжині хвиль 400-420нм - плеврит туберкульовипоті. зної етіології, при низхідному типі кривої спектрогІз літературних джерел відомо [див. Пат. рами без піку на довжині хвиль 400-420 діагносту64427 Україна, МПК-7 G01N33/483. Спосіб діагносють плеврит неспецифічної запальної етіології. Як тики злоякісних пухлин людини / Суслов Є.І., Підконтрольний розчин застосовують надосад плевгаєвська Т.П. (Україна). - 3. №2003054937; Заявральної рідини, розведений у фосфатному буфері лено 29.05.2003; Опубл. 16.02.2004. Бюл. №2(1). без його обробки реактивами. Тривалість досліС.4.149], що у здорових осіб в умовах фізіологічної дження складає в середньому 3 години. норми максимальне підвищення оптичної щільносНаводимо конкретні приклади здійснення споті зразка крові при обробці його відповідними реасобу. ктивами знаходиться в діапазоні значень довжини Приклад 1 хвиль 410-430нм, тоді як мінімальна оптична Хвора В-к H.I., 31 рік, історія хвороби №231щільність зразку розташовується в діапазоні 4602003. Поступила до клініки торакальної хірургії 480нм. Інституту фтизіатрії і пульмонології з попереднім Нами експериментальне встановлено, що опдіагнозом -лівобічний плеврит неясного Генезу. тична щільність зразків з внутрішньоплевральною Після проведення дослідження внутрішньоплеврідиною графічно демонструє криву змін, подібну ральної рідини згідно запропонованого способу до такої у зразках з кров’ю цих же пацієнтів. Тобто отримано наступну криву, характер якої свідчив за для дослідження можна відбирати лише плеврапухлинний характер випоту (див рис.1). В подальльну рідину, яка достовірно відображає загальні шому діагноз було підтверджено гістологічним зміни. дослідженням біопсійного матеріалу плеври. ПатоЗгідно проведеним дослідженням доведено, гістологічний висновок №55-2003 - метастатичний що для плевритів пухлинного генезу характерним плеврит, метастази аденокарциноми. Діагноз підтє переважно висхідний тип кривої спектрограми в верджено онкоморфологами. діапазоні вимірів та наявність піків на довжині Приклад 2 хвиль 400-420нм та 460-480нм. Переважно висхідХворий М-ко К.А., 20 років, історія хвороби ний тип спектрограм, без піку на довжині хвиль №1181-2003. Поступив до клініки торакальної хі400-420нм - характерний для плевритів туберкурургії Інституту фтизіатрії і пульмонології з попельозній етіології. Переважно низхідний тип кривої, реднім діагнозом - правобічний плеврит неясного без піку на довжині хвиль 400-420нм свідчить за генезу. Після проведення досліджень внутрішньохронічний неспецифічний запальний процес у плеплевральної рідини отримано наступні криві, харавральній порожнині. ктер яких свідчив за специфічний туберкульозний Спосіб диференційної діагностики здійснюють характер випоту (див рис.2). Подальші цитологічне наступним чином. і гістологічне дослідження (№202-2003) біопсійного При проведенні чергової лікувальної (розванматеріалу плеври підтвердили висновок на основі тажувальної) плевральної пункції відбирають до спектрограми. Патогістологічний і цитологічний пробірки приблизно 10мл рідини та негайно нависновки: плеврит туберкульозної етіології. правляють на дослідження. Рідину у пробірці Приклад 3 центрифугують 25-30 хвилин при швидкості Хворий С-ко В.М., 38 років, історія хвороби 3000об/хв. з метою розподілення на фракції влас№786-2003. Поступив до клініки торакальної хірурне рідини та її клітинного вмісту. Відбирають 2мл гії Інституту фтизіатрії і пульмонології з попереднім надосад, який розводять фосфатним буфером з діагнозом - правобічний плеврит, можливо парапрН - 7,2-7,4 до остаточного загального об’єму невмонічного характеру. Після проведення дослі10мл. Перемішують. Знову відбирають 2мл остандження його внутрішньоплевральної рідини отринього розчину, в який додають 0,2мл 12%-го розмано наступні криві, характер яких свідчив за чину дінатрієвої солі етилендіамінтетраоцтової неспецифічний запальний характер випоту (див кислоти (трилону Б). Витримують 15-20 хвилин, рис.3). В подальшому цитологічне та гістологічне постійно стряхуючи пробірку. До розчину додають (№142-2003) дослідження підтвердили цей висще 0,2мл донатора кальцій-білкових комплексів новок. свіжу сироватку крові людини з І-ою групою крові. Усього заявленим способом було обстежено Витримують ще 15-20 хвилин, з постійним стряху35 пацієнтів із встановленим синдромом плевраванням розчину. Після чого додають 0,2мл 0,2% льного випоту неясного походження. Згідно отрирозчину азотнокислого срібла. Проводять витримманих результатів, загальна ефективність запроку (експозицію) вмісту пробірки на денному світлі понованого способу диференційної діагностики протягом 45-60 хвилин до появи світлосклала 88,6%, тоді як діагностична специфічність коричневого кольору. Реєструють величину оптичпо відношенню до пухлинних плевритів становила ної щільності дослідного та контрольного розчинів 81,8%; до неспецифічних плевритів - 84,0% та до 7 18500 8 туберкульозних плевритів - 83,3%. тори значно спрощують проведення диференційУ порівнянні із прототипом запропонований ної діагностики, й дозволяють підвищити ефективспосіб диференційної діагностики дозволяє виконість її проведення. Останнє, в свою чергу, дозвористовувати замість крові - плевральну рідину, що ляє раніше розпочати адекватне отримують при обов’язковому проведенні розванетіопатогенетичне лікування, яке може забезпечитажувальної пункції у таких хворих, тобто спосіб не ти й кращі результати лікування. потребує додаткового інвазивного втручання з Спосіб, що заявляється, не складний у викодіагностичною метою. Окрім того, у порівнянні з нанні, не потребує значних коштів на реактиви, традиційними підходами диференційної діагностипри цьому він досить специфічний та інформативки плевральних випотів значно скорочуються її ний у визначенні природи плевральних випотів. строки - до 3-х годин, а також кошторис на її проСпосіб є доцільним для впровадження у медиведення, оскільки спосіб не потребує значних кошчних закладах фтизіо-пульмонологічного профілю, тів на реактиви. З приладів обов’язково потрібні де наявні хірургічні підрозділи (відділення). лише центрифуга та спектрофотометр, якими зазвичай обладнана кожна лабораторія. Усі ці фак Комп’ютерна верстка Н. Лисенко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601