Спосіб постановки роз бенгал проби (рбп) для дослідження на бруцельоз тварин

Спосіб постановки роз бенгал проби (РБП) для досліджень на бруцельоз тварин, що включає 3 19404 4 (ІЕКВМ, Україна, 2004). Застосували метод визнанегативних результатів (феномену «прозони») в чення граничного титру антитіл в РБП з двома порівнянні з дозою 0,03см3. 3 3 дозами антигену окремо 0,03см і 0,01см в порівПриклад 3 нянні з реакцією аглютинації (РА) та реакцією зв'яПровели дослідження сироватки крові двох зування комплементу (РЗК). Отримані результати бичків до та після імунізації інактивованим бакте3 свідчать про те, що у РБП з антигеном 0,01см рином Brucela abortus штам 19. Роз бенгал пробу виявляли антитіла в 2-4 рази більшому розведенставили з двома дозами бруцельозного роз бенгал ні, ніж з дозою антигену 0,03см3 в стандартних антигену, окремо 0,03см3 і 0,01см3, і різними розсироватках крові, одержаних на великій рогатій веденнями сироватки в дозі 0,03см3. Отримані худобі, з високим титром антитіл в РА - 1:500результати дослідження динаміки виявлення анти1:1000 та в РЗК 1:160 (табл. 1). тіл свідчать про те, що через 10 діб після підшкірПриклад 2. ного введення бактерину Brucela abortus штам 19 Чутливість запропонованого способу постанов дозі 40 млрд. м. к. з масляним ад'ювантом в роз вки РБП досліджували шляхом визначення гранибенгал пробі були виявлені антитіла з дозою античного титру антитіл у сироватках крові морських гену 0,03см3 у нерозведених сироватках, а з дозою свинок, інфікованих Brucella abortus штам 104М 0,01см3 у розведеннях сироваток 1:2 та 1:4. Динапідшкірне у дозі 1млрд.м.к. та подальшому внутріміка накопичення антитіл після подальшої внутрішньошкірному введенні бруцеліну з метою визнашньовенної імунізації свідчить, що РБП з дозою чення його активності (проби сироваток крові антигену 0,01см3 більш демонстративна і мала отримано з Херсонської біофабрики). Дослідження більш високі титри порівняно з дозою антигену зазначених сироваток проведено нами в реакції 0,03см3 (табл. 3). зв'язування комплементу, РА за стандартними Приклад 4 методиками [Настанова по діагностиці бруцельозу Досліджено сироватки крові чотирьох телиць, тварин, Київ, 1998] з визначенням граничного титдві з яких інфіковано культурою Brucela abortus ру антитіл. В РБП одночасно визначали титри анштам 19 підшкірне в дозі 3млрд.м.к. і дві - аплікатитіл з двома дозами бруцельозного роз бенгал цією культури на кон'юнктиву ока в дозі 0,2см3 за3 антигену: у стандартній (0,03см ) та зменшеній значеної суспензії бруцел. Отримані результати (0,01см3) дозах. Облік результатів РБП робили свідчать, що до зараження теличок у сироватці візуально впродовж 4-х хвилин проведення реакції крові в РБП з обома дозами антигену, а також в РА в умовах кімнатної температури (23±2°С). Встаноі РЗК отримана негативна реакція. У дослідженнях влено, що запропонований спосіб постановки РБП на 7, 14 і 35 добу після зараження динаміка виявз дозою 0,03 і 0,01см3 бруцельозного роз бенгал лення бруцельозних антитіл в РБП була більш 3 антигену при дослідженні морських свинок з висодемонстративною з дозою антигену 0,01см , що кими титрами антитіл в РА>1:400 та РЗК>1:320, підтверджує відмінність запропонованого способу виявляв антитіла майже в однакових розведеннях від стандартної методики (табл. 4). сироваток. Проте слід відмітити, що 3 з 12 досліСпосіб постановки роз бенгал проби (РБП) для джених високоактивних сироваток в РА і РЗК при досліджень на бруцельоз тварин, нещеплених дослідженні в РБП у нерозведеному стані як з допротибруцельозними вакцинами, є більш чутливим зою 0,03см3, так і з дозою 0,01см3 антигену, дали з двома дозами антигену, окремо 0,03см3 і феномен «прозони», тобто хибно негативну реак0,01см3, і майже вдвічі підвищує чутливість досліцію, яка уже в розведенні сироватки 1:2 була позиджень на бруцельоз, що підтверджує практичне тивною (табл. 2). Ці дані підтверджують, що змензначення запропонованого способу для застосушена доза антигену 0,01см3 не призводила до вання в неблагополучних щодо бруцельозу госпопідвищення відсотку випадків виявлення псевдодарствах великої рогатої худоби. Таблиця 1. Результати досліджень Бруцельозна сироватка одержаРБП, доза антигену (см3) РА РЗК на на бичках розведення розведення розведення 0,03 0,01 оцінка оцінка сироваток сироваток сироваток н/р ++++ ++++ 1/100 ++++ 1/10 ++++ 1/2 ++++ ++++ 1/200 ++++ 1/20 ++++ 1/4 ++++ ++++ 1/400 ++++ 1/40 ++++ 1. Національний стандарт (ВДНКІ, 1995, Росія) проти 1/8 ++++ ++++ 1/450 +++ 1/50 ++++ Brucella abortus шт. 544 1/16 ++++ 1/500 ++ 1/80 +++ 1/32 + 1/600 1/160 + 1/64 н/р ++++ ++++ 1/100 ++++ 1/10 ++++ 1/2 ++++ ++++ 1/200 ++++ 1/20 ++++ 1/4 ++++ ++++ 1/400 ++++ 1/40 ++++ 2.Робочий стандарт (ІЕКВМ, 2004, Україна) проти Brucella 1/8 ++++ ++++ 1/800 ++++ 1/50 ++++ abortus шт. 19 1/16 +++ ++++ 1/900 ++++ 1/80 ++++ 1/32 + ++++ 1/1000 ++++ 1/160 ++++ 1/64 + 1/1200 ++++ 1/320 н/д 5 19404 6 Таблиця 2. Сироватка крові морських свинок РЗК 1 2 4 5 7 8 9 11 12 13 14 15 Контроль нормальна сироватка 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 320++++ 40++++ Результати порівняльних досліджень на бруцельоз (титри) РБП, доза антигену (см3) РА 0,03 0,01 н/р 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 н/р 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 400++++ 3+ 3+ 3+ 3+ + 3+ 3+ 3+ 3+ + 400++++ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 200++ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ н/д 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 4+ 3+ 3+ 2+ 200++++ 3+ 4+ 4+ 4+ 3+ + 3+ 4+ 4+ 4+ 3+ 3+ 200+++ 4+ 4+ 3+ 3+ 4+ 4+ 3+ 3+ 400++++ 4+ 4+ 3+ + 4+ 4+ 3+ 2+ 1004+ + + + 4+ 2+ + + 200++ 4+ 4+ 4+ 3+ 4+ 4+ 4+ 3+ 100++++ 3+ 4+ + 3+ 4+ + 100++ 4+ 4+ + 3+ 4+ + + 1004+ 4+ 2+ Примітка: розведення сироваток в РЗК і РА вказані протилежними величинами, наприклад, 320 (1:320); 400 (1:400) Таблиця 3. Дата відбору крові у бич№ ків бичків До імунізації 10 діб після підшкірного введення (16.04.2004) 21.04.2004 26.04.2004 28.04.2004 7.05.2004 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 н/р ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ +++ Результати дослідження в РБП, доза антигену (см3) 0,03 0,01 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 н/р 1/2 1/4 1/8 ± ++++ + +  ++++ ±  +++ ++ + ++++ +++ ++ ++ + ± ++++ +++ ++ ++ ++++ +++ +++ ++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++ + ± ++++ +++ ++ + ++++ ++++ ++ + ++++ ++++ ++++ +++  ++ ++ + ++++ ++ ++ + ++++ ++++ +++ ++ + ++++ ++++ ++++ ++++ ++ + ++++ +++ ++ ++  1/16 1/32 + + +++ +++ ++ + + ± +++ ++ + ± Таблиця 4 Інв. № телиць інфіко ваних В. abortus н/р шт. 19 7224 7227 4-0 7242 Результати досліджень РБП, доза антигену, (см3). 0,03 0,01 2 4 8 16 32 н/р 2 4 8 16 32 До зараження РЗК РА 5 10 20 40 80 25 50 100 200 7 7224 ++ ++ ++ + 19404 4-0 7242 7224 7227 4-0 7242 7224 7227 4-0 7242 + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ 7227 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ ++ ++ ++ + 8 Продовження таблиці 4 Через 7 діб після зараження ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ ++ + ++ + Через 14 діб після зараження ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ + + ++ ++ + Через 35 діб після зараження ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ++ ++ ++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++ н/д ++ ++ н/д ++ ++ ++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ н/д н/д н/д н/д ++ н/д н/д н/д н/д ++ ++ ++ ++ ++ ++ н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д н/д Примітка: розведення сироваток вказані протилежними величинами, наприклад, 2 (1:2), 4 (1:4), 32 (1:32); Телички №№7224 і 7227 інфіковані підшкірне, №№4-0 і 7242 - кон'юнктивально Комп’ютерна верстка Н. Лисенко Підписне ++ + Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601