Спосіб одержання фенольних сполук, які проявляють гепатозахисну властивість

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно, к способам получения биологически активных соединений из растительного сырья. В настоящее время в медицинской практике из препаратов, получаемых из растительного сырья и обладающих гепатозащитным действием, применяются силибор, карсил и легалон. Они малотоксичны, но имеют недостаточную сырьевую базу. Легалон и карсил являются импортными препаратами [Маш-ковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х томах. Т.І. - 10-е изд.стер.-М.: Медицина, 1985-С. 516]. Известен способ получения суммы фе-нольных соединений, обладающей гепатозащитным действием, из караганы кустарниковой (Caragana frutex (L.) Koch.). Сущность этого способа следующая: надземную часть караганы кустарниковой экстрагируют 70% этанолом, упаривают, удаляют липофильные вещества хлористым метиленом, обрабатывают водный остаток двойным объемом 96% этанола, фильтруют, фильтрат упаривают и сушат [Авт.св. СССР № 1302487, 1986]." Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего получать сумму фенольных соединений, обладающую антиоксидантной, мембраностабилизирующей, противовоспалительной активностью, способностью улучшать антитоксическую функцию печени, более простым путем с высоким выходом высококачественного целевого продукта. Решение поставленной задачи достигается тем, что сухие измельченные побеги караганы древовидной (Caragana arborescens Lam.) экстрагируют горячей водой при непрерывном перемешивании в течение 40-50 минут при температуре 90°С с последующим настаиванием в течение 10 минут, упариванием и сушкой. Способ по изобретению дает возможность исключить использование дефицитных растворителей (этанола и хлористого метилена), стадию очистки извлечения от липофильных веществ, предусматривает использование доступного растительного сырья - караганы древовидной, которая широко культивируется на Украине. Кроме того, полученная указанным выше способом сумма фенольных соединений выгодно отличается по своим технологическим параметрам (хорошей сыпучестью, меньшим влагопоглощением), а в конечном итоге стойкостью при хранении. Использование данного способа позволит расширить ассортимент лекарственных средств гепатозащитного и противовоспалительного действия из доступного растительного сырья и значительно упростить и удешевить технологию получения конечного продукта. Экспериментальным путем установлено, что для заявляемого способа оптимальными параметрами при экстрагировании сухого сырья водой являются: измельчение сырья до 1-2 мм, экстрагирование в течение 4050 минут при температуре 90°С с последующим настаиванием в течение 10 минут. Отдельные отличительные признаки способа являются известными, однако в заявляемой совокупности при заданном соотношении компонентов реализация предложенного способа позволяет получить новый результат, а именно: получение сухой водорастворимой суммы фенольных соединений, устойчивой при хранении, обладающей антиоксидантной, мембраиостабилизирую-щей, противовоспалительной активностью и способностью улучшать антитоксическую функцию печени. Пример 1. 2кг измельченных до 1-2 мм побегов караганы древовидной (Caragana arborescens Lam.) заливали 24 л горячей воды (90°С) в соотношении сырье -экстрагент 1:10 (с учетом коэффициента поглощения, равного 2) экстрагировали в течение 40 минут при температуре 90°С при непрерывном перемешивании. Настаивали в течение 10 минут без нагревания, сырье отфильтровывали. Извлечение упаривали под вакуумом при разряжении 102 мм рт.ст., после чего сушили в вакуум-сушильном шкафу при разряжении 10 мм рт.ст. Получили 300 г порошка. Выход готового продукта составил 15% по отношению к исходному сухому сырью, а в прототипе -4%. Для получения сухого экстракта заявленным способом были в чспериментально подобраны оптимальные условия экстракции, что представлено в табл. 1-3. Полученный продукт представляет собой аморфный сыпучий порошок желто-коричневого цвета, со специфическим запахом, легко растворимый в воде, практически не растворимый в диэтиловом эфире, хлороформе, этаноле. В его состав входят: флавоноиды, дубильные вещества, оксикоричные кислоты, уреиды (производные мочевины), полисахариды и восстанавливающие сахара. Пример 2. Гепатозащитную активность суммы фенольных соединений из побегов караганы древовидной определяли на белых беспородных крысах - самцах, массой 180-200 г на модели острого токсического поражения печени четыреххлористым углеродом (0,8 мг/100 г массы 50% масляного раствора однократно подкожно). Гепатопротекторную активность оценивали по способности стабилизировать мембраны гепатоцитов и регулировать перекисное окисление липидов, проявляя антиоксидантный эффект. Мембраностабилизирующее действие определяли по уровню активного индикаторного фермента аланиламинотрансфера-зы (АлAT), используя метод Reitman S., Frankel S. [Amer.S.Clin Pathology. - V.28.-N: 1.-P.56-78], антиоксидантную - по содержанию малонового диальдегида (МДА) в гомогенатах печени, применяя метод Стальной И.Д., Гаришвили Т.Г. [Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы биохимии / Под ред. Н.Н. Ореховича. -М., 1977. - С.44-46]. Препаратом сравнения в этой серии опытов служил силибор в дозе 32 мг/кг (1/100 от LD50. Сумму фенольных соединений из побегов караганы древовидной в дозе 53 мг/кг (1/100 от LD50) и силибор вводили энтерально за 2 часа до воздействия четыреххлористым углеродом и через 2 часа после инъекции гепатотропного яда. Результаты опытов представлены в табл. 4. Из полученных данных следует, что содержание МДА в гомогенатах печени животных, леченных суммой фенольных соединений караганы древовидной и силибором оказалось значительно ниже, чем у нелеченных. В сравнении с (ТИлибором антиоксидантная активность суммы фенольных соединений караганы древовидной выше на 25,0%. Мембраностабилизирующая активность суммы фенольных соединений караганы древовидной также не уступает силибору. Пример 3. Противовоспалительную активность определяли по методу Е.Ю. Стрельникова на белых мышах массой 18--20 г [Стрельников Е.Ю. Сравнительная характеристика противовоспалительного действия некоторых пиримидиновых производных//Фармакология и токсикология. -1960.- № 6.-С. 526-531] в сравнении с выпускаемыми препаратами силибором и бутадионом. Воспаление вызывали путем впрыскивания в толщу бедра одной из лапок 0,1 мл 2,5%-ного раствора формалина, исследуемые вещества вводили в желудок в дозе 1/100 от LD50 за 2 часа до инъекции формалина, а затем через 5 и 18 часов. О выраженности воспалительного отека судили по приросту массы воспаленной лапки по отношению к интактной конечности. Всего было поставлено 40 опытов. Статистическую обработку данных по определению острой токсичности проводили по методу Прозоровского В.Б. [Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П. Табличный метод определения ЕД50 (LD50) веществ с низкой биологической активностью // Фармакология и токсикология. - 1980. - № 6.- С. 733-735]. Результаты исследований приведены в табл. 5. Анализ табл. 5 свидетельствует о выраженной противовоспалительной активности суммы фенольных соединений караганы древовидной, превышающей таковую для известных препаратов и при меньшей токсичности. Пример 4. Одним из критериев антитоксической функции печени является метаболизм гексобарбитала. Опыты проводились по методу Hahn I. [Hahn I., Lenmann N.D., Korten M., Vebel H., Vogel I. Arznelm -Forsch.-18, 698 (1968)]. Исследования были проведены на белых крысах линии "Вистар" со средней массой 150-180 г, из числа животных были сформированы группы по 10 крыс в каждой. Первая группа - интактные животные. Крысам второй группы вводили 0,2 мг/кг четыреххлористого углерода через рот. Крысам третьей группы вводили суммарный фенольный препарат из караганы древовидной по 100 мг/кг через рот ежедневно в течение 7 дней. Как показали исследования, четыреххлористый углерод увеличивает продолжительность сна после гексобарбитала с 28 до 63 минут. Семидневное введение суммы фенольных соединений караганы древовидной уменьшает поражение четыреххлористым углеродом. Это выражено в значительном снижении продолжительности времени гексобарбиталового сна животных до 50 минут. Таким образом, проведенные исследования подтверждают правильность выбора оптимальных условий экстракции в способе получения суммы фенольных соединений, обладающей антиоксидантний, мембраностабилизирующей, противовоспалительной активностью, способностью улучшать антитоксическую функцию печени. Средство, полученное описанным выше способом, обладает широким спектром действия при использовании доступного, дешевого сырья, отсутствии дефицитных растворителей, возможности стандартизации целевого продукта.