Спосіб диференційної діагностики лімфопроліферативних новоутворень орбіти та придатків ока

Спосіб диференційної діагностики лімфопроліферативних новоутворень орбіти та придатків ока, що включає проведення клінічного, морфоло 3 26436 них лімфом. Крім того нам не потрібно визначати клітини попередники, бо з цією групою клітин, поперше, ми майже не зустрічаємось, а по-друге, лімфобластний тип лімфом зустрічається виключно у дітей і по-третє, CD23 можна застосовувати на парафінових зрізах, що є суттєвою перевагою. CD43 - антитіла до антигену, що експресовані на Т-лімфоцитах, NK-клітинах, гістіоцитах. Для визначення Т-лімфоцитів ми і так використовуємо антитіла до CD3 антигена, з NK-клітинами ми не зустрічаємось. Гістіоцити можна встановити при морфологічному досліджені. bcl-2 - антитіла до білка супресора апоптоза дає можливість відрізняти пухлинні фолікули від зародкових центрів. Відрізнити доброякісний процес від злоякісного, при чому при всіх клітинних типах лімфом ми можемо використовуючи антитіла до наступних антигенів: kappa, lambda CD3, CD20. bcl-6 - репрессор транскрипції. Виявляється при фолікулярних лімфомах, дифузно Вкрупноклітинних, лімфомі Беркіта, лімфогранулематозі. Фолікулярну лімфому ми поставимо при наявності CD20 та CD23 антигена. Діагноз дифузну В-крупноклітину лімфом ми встановлюємо при морфологічному дослідженні, а лімфома Беркіта і лімфогранулематоз, по-перше, мають характерну гістологічну картину, а по-друге, вони не надзвичайно рідко зустрічаються в офтальмоонкології. CD79a - антиген, що зустрічається на стадії попередників В-лімфоцитів і зберігається до стадії плазматичних клітин. Використовуючи клінічні данні (вік хворого), а також антитіла до CD20 можна відмовитись від антитіл до CD79a антигену. Лімфобластні лімфоми зустрічаються, по-перше, майже виключно у дітей, а по-друге, цей тип клітин можливо встановити при морфологічному дослідженні. CD138 - маркер плазматичних клітин. Наявність плазматичних клітин ми можемо поставити за даними морфологічного дослідження [Mason D et al. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the Seventh International 4 Workshop and Conference held in Harrogate, United Kingdom. - Oxford Univ, 2002. - 945р.]. Задачею корисної моделі є підвищення точності диференційної діагностики лімфопроліферативних новоутворень орбіти та придатків ока шляхом застосування етапної методики з використанням клінічного, морфологічного і імуногістохімічного дослідження з оптимальним набором антитіл з урахуванням особливостей новоутворень даної ділянки. Досягнутий результат полягає в тому, що запропонований спосіб діагностики лімфопроліферативних новоутворень орбіти та придатків ока дозволяє точно без значних фінансових затрат і в ряді випадків швидше встановлювати типи лімфопроліферативних новоутворень, за рахунок врахування вікових особливостей хворих, особливостей лімфоїдних новоутворень орбіти і придатків та поетапного використання оптимального набору антитіл при проведенні імуногістохімічного дослідження. Вказана задача вирішується тим, що у відомому способі діагностики лімфопроліферативних новоутворень орбіти та придатків ока, що включає клінічне, морфологічне та імуногістохімічне дослідження з використанням набору антитіл, відповідно до корисної моделі, при проведенні морфологічного дослідження додатково визначають розмір клітини та їх будову і при виявленні крупних клітин округлої форми лімфоїдного походження, які в 2-3 рази перевищують розмір лімфоцитів, то одразу діагностують дифузну В-крупноклітинну лімфому, якщо при морфологічному дослідженні виявляють дрібні клітини, проводять імуногістохімічне дослідження з використанням антитіл до антигенів kappa, lambda, CD3, CD20 і при співвідношенні kappa:lambda 3:1 і більше, lambda:kappa 2:1 і більше діагностують плазмоцитому, при всіх інших спів відношеннях - реактивну плазмоцитарну гіперплазію, при цьому якщо в пухлині кількість Вчи Т-лімфоцитів перевищує 70 % відповідно діагностують В- чи Т-клітинну лімфому. Причинно-наслідкові зв'язки Причина При морфологічному досліджені виявлення крупних клітин округлої форми, що мають лімфоїдне походження і в 2-3 рази перевищують розмір звичайних лімфоцитів При виявлені плазмотичних клітин за допомогою морфологічного дослідження, використовуємо антитіла до легких ланцюгів kappa і lambda При виявлені дрібних клітин, що мають лімфоїдне походження, за допомогою морфологічного дослідження, використовуємо антитіла до наступних антигенів: kappa, lambda, CD3, CD20 Наслідок Дозволяє поставити діагноз крупноклітинна лімфома дифузна-В Дозволяє поставити діагноз плазмоцитома чи реактивна плазмоцитарна гіперплазія Дозволяє поставити діагноз реактивна лімфоїдна гіперплазія. В- чи Т-клітинна лімфома Дозволяє поставити клітинний тип В-клітинної При встановленні за допомогою імуногістохімічного долімфоми: лімфома маргінальної зони, фолікуслідження В-клітинної лімфоми, використовуємо антитілярна лімфома, лімфоцитарна лімфома, лімла до наступних антигенів: CD5, CD23, CyclinD1 фома із зони мантії 5 Запропонована корисна модель дозволяє спростити діагностику, а в ряді випадків, при дифузній В-крупноклітинній лімфомі, значно прискорити постановку діагнозу при збереженні точності і зменшення витрат за рахунок використання клінічних (особливостей вікового перебігу захворювання), морфологічних даних, особливостей ЛПН цієї області і поетапним застосуванням імуноогістохімічного дослідження з певним набором антитіл. Спосіб здійснюють наступним чином: на першому етапі проводять клінічне (встановлення віку хворого) та морфологічного досліджень. Якщо при гістологічному досліджені виявляють крупні клітини лімфоїдного походження, що нагадують центробласті та/або імунобласті, то діагноз дифузна В-крупноклітинна лімфома виставляють одразу. При виявленні крупних клітин, що нагадують плазмоциди, другим етапом проводять імуногістохімічне дослідження з використанням лише антитіл до легких ланцюгів kappa та lambda. Залежно від того, в яких співвідношеннях ідентифікують легкі ланцюги kappa та lambda встановлюють діагноз плазмоцитома чи реактивна плазмоцитарна гіперплазія. При плазмоцитомах співвідношення kappa:lambda=3:1 чи більше, а також lambda:kappa=2:1 чи більше. При всіх інших випадках встановлюють реактивну плазмоцитарну гіперплазію. Якщо в гістологічному препараті визначають тканину, що складається з дрібних лімфоцитів, то проводять імуногістохімічне дослідження, використовуючи антитіла до наступних антигенів: kappa, lambda CD3, CD20. Це дозволяє визначити реактивну лімфоїдну гіперплазію, а також В- чи Т-клітинну лімфому. Критеріями постановки діагнозу реактивної лімфоїдної гіперплазії є: співвідношення легких ланцюгів В-лімфоцитів kappa:lambda не більше ніж 3:1, а lambda:kappa як 2:1. В середньому, в нормі співвідношення kappa:lambda становить 2:1. Кількість Т-клітин становить від 20 до 70%. Відповідно критеріями постановки діагнозу лімфома були: співвідношення легких ланцюгів Влімфоцитів kappa:lambda більше ніж 3:1, а lambda:kappa як 2:1. Кількість В-лімфоцитів становить більше 80%. При Т-клітинних лімфомах кількість Т-клітин становить більше 70%. При визначенні В-клітинної лімфоми використовують додаткові антитіла: CD5, CD23, cyclin D1. В результаті чого визначають лімфому маргінальної зони, лімфому зони мантії, лімфоцитарну та фолікулярну лімфоми. Імунофенотип лімфоми маргінальної зони CD20+, CD5-, CD23- та cyclin D1-. Імунофенотипичний профіль фолікулярної лімфоми наступний: вона CD20+, CD5-, CD23+ та cyclin D1-. Лімфоцитарна лімфома - CD20+, CD5+, CD23+ та cyclin D1. Лімфома із зони мантії - CD20+, CD5+, CD23- та cyclin D1+. Таким чином запропонований спосіб дозволяє більш точно провести диференціальний діагноз, 26436 6 значно здешевіти дослідження, а також прискорити процес постановки діагнозу. Приклади конкретного застосування Приклад 1 Хвора Ф. 49 років, у 2006р. з екзофтальмом правого ока поступила в онкологічне відділення інституту очних хвороб і тканинної терапії ім. В.П. Філатова. При проведені орбітотомії 7.08.06 було взято біопсію для морфологічного дослідження. При морфологічному досліджені визначаються великі клітини округлої форми (в 2-3 рази більше лімфоцитів). Достатньо помітний ободок цитоплазми з вираженою базофілією оточує світле "пузиреподібне" ядро. Ядра світлі через малу кількість дрібнодисперсного гетерохроматина. Чітко визначаються невеликі ядерця, кількістю від 2 до 4. В даному випадку вже на основі морфологічної картини ми встановили діагноз дифузна Вкрупноклітинна лімфома. Приклад 2 Хвора Ч. 83 роки у 2006р. поступила в онкологічне відділення інституту очних хвороб і тканинної терапії ім. В.П. Філатова з новоутворенням кон'юнктиви. Біопсія проводилась 20.09.06. Було проведено морфологічне і імуногістохімічне дослідження. При морфологічному досліджені визначається тканина, що складається з дрібних клітин із слабо ірегулярним ядром з помірно дисперсним хроматином, помітним ядерцем та вираженою блідою цитоплазмою. Другим етапом була постановка імуногістохімічного дослідження з використанням антитіл до наступних антигенів: kappa, lambda CD3, CD20. В результаті ми отримали, що співвідношення kappa до lambda становить 1 до 4. Кількість В-лімфоцитів становить 85%, відповідно Тлімфоцитів - 15%. На цьому етапі ми визначили, що досліджувана пухлина є В-клітиною лімфомою. Наступним етапом є визначення клітинного типу і використовуємо наступні антитіла CD5, CD23, cyclin D1. В результаті проведеного дослідження ми отримали негативну реакцію у всіх випадках. На основі вище перерахованих даних ми встановили діагноз - екстранодальна форма лімфоми маргінальної зони. Приклад 3 Хвора Ж. 34 роки у 2006р. поступила в онкологічне відділення інституту очних хвороб і тканинної терапії ім. В.П. Філатова з новоутворенням кон'юнктиви. Біопсія проводилась 17.10.06. Було проведено морфологічне і імуногістохімічне дослідження. При морфологічному досліджені визначається тканина, що складається з дрібних клітин із слабо ірегулярним ядром з помірно дисперсним хроматином, помітним ядерцем та вираженою блідою цитоплазмою. При імуногісточному досліджені був визначений наступний імунофенотип: співвідношення легких ланцюгів В-лімфоцитів каппи до лямбди 2:1. Кількість В-лімфоцитів становило 60%, CD5-, CD20+, CD23-, cyclin D1-. Діагноз: реактивна лімфоїдна гіперплазія кон'юнктиви. 7 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 26436 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601