Спосіб розплоджування медичних п’явок в штучних умовах

Спосіб розплоджування медичних п'явок в штучних умовах, що включає годування їх кров'ю ссавців, закладення в торф з наступним перенесенням у водне середовище, який відрізняється тим, що п'явок утримують у пластмасових ємкостях при темпераїурі +15 - +30°С в освітленому приміщенні, після чого п'явок з утвореним пояском запліднення утримують у темному приміщенні при температурі +18 - +30°С в ємкостях з торфом, з відкладених коконів збирають молодняк, розміщують у пластмасових ємкостях і утримують за умов природного освітлення. (19) (21) 98031253 (22) 11.03.1998 (24) 16.10.2000 (33) UA (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р. (72) Селезньов Констянтин Георгіевич, Ніконов Гєнадій Івановіч, RU (73) СПІЛЬНЕ ПІДПРИЄМСТВО У ВИГЛЯДІ ТОВАРИСТВА З ОБМЕЖЕНОЮ ВІДПОВІДАЛЬНІСТЮ "МЕДИЧНА НАУКОВО-УПОРЯДЖУВАЛЬНА КОЛЕКТИВНА ФІРМА "БІОКОН" 29249 пояски запліднення п'явок пересаджують у пластикові бідони з торфом і переводять у темне приміщення з температурою +25 градусів С. Через три місяці збирають молодняк із коконів, розміщують у пластикових ємкостях і утримують у приміщенні з кімнатною температурою та природним освітленням. Годують п'явок 6 разів і маса тіла їх досягає 1,7-2,3 грама. Після 6-го годування п'явок переводять у прохолодне (+16 градусів С) затемнене приміщення, де утримують в резервуарах з проточною водою. Через чотири місяці аналізують чисельність п'явок і активність секрету слинних залоз вирощених п'явок (див. таблицю). Приклад 2 Всі операції проводять так, як описано в прикладі 1, лише первинне розгодовування п'явок проводять при температурі +15 градусів С і утримують маток у торфі при температурі +18 градусів С (див. таблицю). Приклад 3 Всі процедури проводять так, як описано в прикладі 1, лише первинне розгодовування здійснюють при температурі +23 градусів С, утримують маток у торфі при +30 градусів С (див. таблицю). Приклад 4 Всі операції проводять, як зазначено вище, лише первинне розгодовування п'явок здійснюють при +12 градусів С. П'явки досягли маси тіла 34 грама після трьох годувань, пояски запліднення не утворювалися. Таким чином п'явки не дали потомства. Приклад 5 Всі операції проводять, як описано на прикладі 1, лише п'явок у торфі утримують при температурі +15 градусів С і при освітленні природному. Одержані кокони стерильні, іншими словами, п'явки не дали потомства. Приклад 6 Всі операції проводять, як описано на прикладі 1, лише п'явок утримують у торфі при температурі +35 градусів С. Одержані кокони частково стерильні (25%), молодняк, який вийшов з них, загинув до третього годування. Приклад 7 Всі процедури проводять, як указано в прикладі 1, лише утримують п'явок у скляних банках (за прототипом) (див. таблицю). Приклад 8 Всі процедури здійснюють при кімнатній температурі (як у прототипі), лише утримують п'явок у пластикових ємкостях (див. таблицю). Порівняна активність медичних п'явок, вирощених за методом, що пропонується, наведено в таблиці. Результати, одержані в процесі роботи і наведені в таблиці, свідчать про те, що п'явки, вирощені за способом, який пропонується (приклади 1, 2, 3), досягають більшої маси тіла за більш короткий проміжок часу, дають більше потомства в першому поколінні (на 40% більше, ніж за способомпрототипом) і що, чи не найголовніше, мають репродуктивну здатність (тобто дають потомство в другому і третьому поколінні, яке за своїми тера певтичними властивостями не поступається перед п'явками з природних водоймищ. Це в свою чергу дає можливість скоротити вилов природних п'явок на 80-90%). За терапевтичними властивостями, які визначаються кількістю та якістю секрету слинних залоз, п'явки мало чим поступаються перед тваринами, виловленими з природних водоймищ, як за часом кровососання в процесі гірудотерапії, так і за вмістом біологічно активних сполук, продукованих медичними п'явками, що призводить до зниження числа п'явок на курс гірудотерапії одному хворому (в середньому на 20-30%). Цикл вирощування п'явок по запропонованому методу, практично позбавлений роботи рук, що дає можливість вдвічі скоротити число робочих на фабриці. За використання способу-прототипу вдвічі знижується відсоток природної загибелі п'явок. Таким чином, спосіб розплодження й утримання медичних п'явок, який пропонується, дає можливість: 1) скоротити час розплоджування п'явок; 2) одержати п'явку терапевтичне більш ефективну; 3) одержувати від цих п'явок життєздатне потомство (тобто здійснити замкнутий цикл вирощування п'явок, не виснажуючи природних ресурсів); 4) різко знизити трудомісткість технологічного процесу; 5) знищити трудомісткість вирощування п'явок. Метод визначення активності секрету слинних залоз 1. Концентрацію білка визначаємо спектрографічно, використовуючи формулу Калкара: 1,45´А280-0,74´А260=мг/мл 2. Активність гірудину визначаємо за часом згортання комерційного препарату фібріногену тромбіном [2], активність гірудину виражаємо в міжнародних одиницях (ATNIH). 3. Активність ферменту дестабілази визначаємо за методом Аструпа [3] за площею (1 мм) рідинних зон, які утворюються на поверхні стабілізованого фібріну. 4. Вираженість блокади внутрішнього механізму згортання крові визначаємо за часом рекальціцифікації плазми крові [3] в сек. 5. Вміст простоцикліну визначаємо радіоімунним методом, використовуючи набір реактивів за прописом фірми "Amersham" (Англія). Джерела інформації 1. Щеголев Г.Г., Федорова М.С. Медицинская пиявка и ее применение. - М.: Медгиз,1955. - 75 с. 2. Никонов Г.И., Баскова И.П. Физиологические и биохимические аспекты лечебного действия медицинских пиявок // Успехи современной биологии. - 1986. - Т. 101. - Вып. 1. - С. 141-154. 3. Никонов Г.И. Полифункциональность и противотромбическое действие желез медицинских пиявок Hirudo medicinalis: Дис. ... канд. биолог. наук. - М., 1985. 2 29249 Таблиця Порівняння результатів вирощування медичних п'явок за способом-прототипом, який пропонується 3 29249 Продовження таблиці __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 34 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 4