Спосіб моделювання глобальної церебральної ішемії у мишей

1. Спосіб моделювання глобальної церебральної ішемії у мишей, що включає штучне порушення мозкового кровообігу, який відрізняється 3 33367 використовується для дослідження, скорочується в 10-20 разів. Але невеликий розмір мишей створює те хнічні труднощі, що пов'язані з перев'язуванням сонних артерій - дуже дрібних судин. Завданням корисної моделі є створення способу моделювання глобальної церебральної ішемії у мишей шляхом створення гравітаційного перевантаження в краніо-каудальному векторі при обертанні, що дозволяє одержати просту та добре відтворювану модель заданої патології з можливістю варіювати тяжкість ішемічних порушень. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі моделювання глобальної церебральної ішемії у мишей шляхом штучного порушення мозкового кровообігу корисною моделлю передбачено, що мишей піддають впливу гравітаційного перевантаження при обертанні у радіальному положенні головою до центра обертання. Згідно з корисною моделлю мишей піддають впливу гравітаційного перевантаження 6g, причому ступінь ішемічних порушень регулюють тривалістю часу обертання. У відповідності з винаходом, час обертання становить від 10 до 60 секунд. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином. Дослідних мишей фіксують на центрифузі у радіальному положенні головою до центра обертання. При обертанні створюється гравітаційне перевантаження, яке викликає ішемію. Ступінь тяжкості ішемії регулюється часом обертання і залежить від створюваного прискорення. Краніо-каудальний вектор прискорень (позитивне радіальне прискорення) створюється за допомогою центрифуги. За умов часто ти обертання 1000 об/хв. (центрифуга лабораторна клінічна ЦЛК-1) при розташуванні тварини в радіальному напрямі з мінімальною відстанню голови від осі обертання (0,5 см) гравітаційне перевантаження становить 6g. Гравітаційне перевантаження сприяє переміщенню крові в каудальному напрямі, що забезпечує ішемію головного мозку в усі х його судинних басейнах, тобто глобальну церебральну ішемію. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1 Були проведені дослідження ефективності модельної патології, одержаної за заявленим способом у порівнянні з існуючими моделями. Дослід виконаний на 74 нелінійних мишах-самцях масою 12-15 г, що були розподілені на 6 груп. Тварин перших трьох гр уп піддавали впливу гравітаційного перевантаження в краніо-кау дальнему векторі. Для цього їх розміщували в спеціально виготовлених тканинних пеналах, які щільно охоплюють мишу, але на заважають її диханню. Пенали закріплювали на центрифузі перпендикулярно осі обертання таким чином, що го 4 лова тварини спрямована до осі (відстань від осі становить 0,5 см). Мишей першої групи (n=16) піддавали впливу гравітаційного перевантаження при 6g (1000 об/хв.) протягом 10-20 секунд, мишей другої групи (n=12) - протягом 30-40 секунд, третьої групи (n=6) - протягом 60 секунд, після чого центрифугу вимикали. Повна зупинка відбувалася через 30 секунд, протягом яких гравітаційне перевантаження плавно зменшувалося з 6g до 0g. У мишей четвертої групи (n=19) під нембуталовим наркозом (40 мг/кг) відтворювали ішемію головного мозку шляхом перев'язування обох загальних сонних артерій, викликаючи незворотну двобічну каротидну оклюзію. У мишей п'ятої групи (n=8) перев'язували загальну сонну артерію з одного боку (по 4 тварини з лівого та з правого), викликаючи незворотну однобічну каротидну оклюзію. Шосту гр упу (n=13) складали інтактні тварини. Оцінювали виживаність тварин першої, другої, третьої, четвертої та п'ятої груп протягом 2 тижнів, а також набряк головного мозку (його визначали за масовим коефіцієнтом головного мозку порівняно з показником інтактних тварин шостої групи). Визначення вірогідності відмінностей виживаності проводили за кутовим перетворенням Фішера, масового коефіцієнту головного мозку - за критерієм Ст'юдента. Результати наведені в таблицях 1 і 2. Як свідчать дані таблиці 1, гравітаційне перевантаження 6g в краніо-каудальному векторі викликає загибель тварин, яка прямо залежить від часу дії перевантаження. Таким чином, тяжкість глобальної церебральної ішемії і летальність мишей можна регулювати шля хом змінення терміну перебування тварин в умовах гравітаційного перевантаження залежно від мети дослідження. У тварин, що вижили після гравітаційного перевантаження, протягом 20-30 хв. спостерігалися значні порушення координації рухів, потім вони візуально не відрізнялися від інтактних тварин. Слід відзначити, що моделювання церебральної ішемії у мишей шляхом перев'язування обох загальних сонних артерій викликає загибель 100% тварин протягом першої доби. Значна частина мишей не виходить з наркозу. Це свідчить про більшу чутливість мишей до незворотної каротидної оклюзії порівняно зі щурами, в яких летальність після подібного експериментального втручання звичайно становить 2030% [3, 4]. Стовідсоткова летальність мишей з перев'язаними загальними сонними артеріями не дає можливості виконувати дослідження в віддаленому періоді. Однобічне перев'язування загальної сонної артерії не призводить до загибелі мишей, що не дозволяє рекомендувати дану модель ішемії головного мозку для скрінінгу церебропротекторної дії лікарських препаратів при проведенні доклінічних досліджень. 5 33367 Таблиця 1 Виживаність мишей з моделями церебральної ішемії, які відтворені шляхом гравітаційного перевантаження та перев'язування загальних сонних артерій 1 Гравітаційна церебральна ішемія Час Кількість Вижило / Виживаність, впливу тварин загинуло % 6g, с 10-20 16 12/4 75 2 30-40 12 5/7 41,7 3 60 6 0/6 0 № групи Вірогідність відмінностей Р1-2