Спосіб кількісного визначення тамоксифену цитрату

Спосіб кількісного визначення тамоксифену цитрату, що передбачає приготування розчину проби, взаємодію його з реагентами при заданому рН та вимірювання спектральної характеристики реакційного розчину, який відрізняється тим, що як реагенти використовують стандартні розчини хлориду європію і 9-фтор-1-гідрокси-5-метил-3оксо-6,7-дигідро-3H,5H-піридо[3,2,1-ij]хінолін-2карбонової кислоти(2-піперазин-1-іл-етил) аміду дигідрохлориду при рН=7,0-7,5, а вимірювання спектральної характеристики реакційного розчину здійснюють шляхом вимірювання інтенсивності люмінесценції при lеміс=614 нм. (19) (21) u200802649 (22) 29.02.2008 (24) 11.08.2008 (46) 11.08.2008, Бюл.№ 15, 2008 р. (72) АЛЕКСАНДРОВА ДАР'Я ІГОРІВНА, UA, СКРИПИНЕЦЬ ЮЛІЯ ВОЛОДИМИРІВН А, U A, ЄГОРОВА АЛЛ А ВОЛОДИМИРІВН А, UA, УКРАЇНЕЦЬ ІГОР ВАСИЛЬОВИЧ, UA, АНТОНОВИЧ ВАЛЕРІЙ ПАВЛОВИЧ, U A (73) ФІЗИКО-ХІМІЧНИЙ ІНСТИТУТ ІМ. О.В. БОГАТСЬКОГО НАЦІОН АЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ Н АУК УКРАЇНИ, U A 3 34353 значення, стає можливим забезпечити вищу чутливість визначення та спростити спосіб. Поставлена задача вирішена в способі визначення тамоксифену цитрату що передбачає приготування розчину проби, взаємодію його з реагентами при заданому рН та вимірювання спектральної характеристики реакційного розчину тим, що в якості реагентів використовують стандартні розчини хлориду європію і 9-фтор-1-гідрокси5-метил-3-оксо-6,7-дигідро-3H,5H-пірідо[3,2,1ij]хінолін-2-карбонової кислоти(2-пиперазин-1-ілетил) аміду дигідрохлориду при рН=7,0-7,5, а вимірювання спектральної характеристики реакційного розчину здійснюють шляхом вимірювання інтенсивності люмінесценції При lеміс=614НМ. Новим в заявленій корисній моделі є наявність таких ознак: - взаємодія розчину проби із сумішшю, що містить органічний ліганд -9-фтор-1-гідрокси-5-метил3-оксо-6,7-дигідро-3H,5H-пірідо[3,2,1-ij] хінолін-2карбонової кислоти(2-пиперазин-1-іл-етил) амід дигідрохлорид і стандартний розчин хлориду європію; - умови взаємодії - рН=7,0-7,5; - метод люмінесцентного визначення (опромінювання УФ-світлом при lзбудж=320нм; вимірювання інтенсивності люмінесценції при lеміс=614нм). В заявленому способі використаний ефект посилення цитрат-іонами сенсибілізованої флуоресценції іону європію у комплексі, який характеризується квантовим виходом (Q=0,018) та часом життя збудженого стану іонів європію (t=315мкс) (див. Фіг.1). Зниження межі виявлення тамоксифену цитрату стало можливим завдяки використанню нового люмінесцентного зонду - комплексу європію з новим лігандом. Це можна пояснити наступним. Органічний ліганд - 9-фтор-1-гідрокси-5-метил-3оксо-6,7-дигідро-3Н,5Н-пірідо[3,2,1-ij]хінолін-2карбонової кислоти(2-пиперазин-1-іл-етил) амід дигідрохлорид - відноситься до похідних 3-оксо-1гідрокси-хінолінкарбонової кислоти і має таку структурну формулу: OH O F NH . 2HCl N H N N O CH3 Цей реагент має в ультрафіолетовій області спектру дві смуги поглинання при l=292нм (e=13800л×моль -1×см -1) і l=235нм (e=33300л×моль1 ×см -1), що обумовлює ефективне поглинання енергії збудження. Ця енергія передається з триплетного рівня ліганду (Е=21010см -1) на енергетичний рівень Еu3+ (Е=17300см-1), що призводить до сенсибілізації люмінесценції європію. Взаємодія люмінесцентного зонду - комплексу Еu-R - з тамоксифеном цитратом відбувається при рН 3-11, максимум люмінесценції спостерігається при рН 7,0 - 7,5. У запропонованому способі для утворення оптимального рН розчину використовується 4 0,5мл 40%-ного розчину уротропіну. Підвищення чутливості стало можливим завдяки використанню ефекту посилення цитрат-іонами, які є аніонною часткою молекули тамоксифену цитрату, сенсибілізованої люмінесценції іонів європію у комплексі з R, завдяки витисканню цитрат-іонами молекул води із внутрішньої сфери комплексу. Це надає можливість досягнути зниження нижньої межі визначаємих концентрацій тамоксифену цитрату в 2,5 рази на відміну від прототипу. Максимальне посилення сигналу спостерігається при співвідношенні Eu:R=1:1 (C Eu=1´104 моль/л, CR=5´10-5моль/л). Iлюм європію в комплексі Eu-R максимальна при опромінюванні утвореного комплексу УФ-світлом з lзбудж=320нм. Встановлено, що додавання до розчину люмінесцентного зонду Eu-R тамоксифену цитрату призводить до посилення спектрів збудження (див. Фіг.2, а) та люмінесценції (див. Фіг.3) даного комплексу. Дане явище використано для люмінесцентного визначення тамоксифену цитрату. Залежність інтенсивності люмінесценції комплексу від концентрації тамоксифену цитрату наведена на Фіг.4. Приклад. Визначення тамоксифену цитрату проводили в умовах тесту «Кількісне визначення» для таблеток «Тамоксифен» виробництва ТОВ «Фармацевтична компанія «Здоров'я»» (тамоксифену цитрату 10,0мг). Градуювальний графік будують наступним чином: у мірні колби вносять по 0,1; 0,2; 0,7; 1,0; 1,3; 1,8мл робочого розчину тамоксифену цитрату (100мкг/мл) (5 паралельних вимірів), в кожну колбу додають по 1,0мл 1´10-3моль/л розчину хлориду європію, 0,5мл 1´10-3моль/л розчину R, 0,5мл 40%-ного розчину уротропіну. Доводять водою до 10,0мл та перемішують. Паралельно готують розчин холостої проби, який містить усі компоненти, крім тамоксифену цитрату. Вимірюють інтенсивність люмінесценції за lеміс=614нм (lзбудж=320нм) у кожній точці (І), враховують інтенсивність люмінесценції холостої проби (І0). За допомогою одержаних результатів будують градуювальний графік залежності інтенсивності люмінесценції ((І-І0)/І 0) від концентрації тамоксифену цитрату (мкг/мл) (див. Фіг.4), в якому спостерігається лінійність в інтервалі концентрацій тамоксифену цитрату 1,018,0мкг/мл. Кількісне визначення. Випробовуваний розчин. Наважку порошку розтертих таблеток, еквівалентну 25,0мг тамоксифену цитрату, поміщають у мірну колбу місткістю 25,0мл, розчиняють в метанолі, доводять метанолом до 25,0мл і фільтрують крізь паперовий фільтр "Синя стрічка". Відкидають перші порції фільтрату. Далі 5,0мл фільтрату вносять у мірну колбу об'ємом 50,0мл, розчиняють в 40мл води з підлужуванням 0,1моль/л розчином NaOH до рН 7,5, перемішують та доводять водою до 50,0мл. Далі 1,0мл одержаного розчину вносять у мірну колбу об'ємом 10,0мл, додають 1,0мл 1´103 моль/л розчину хлориду європію, 0,5мл 1´103 моль/л розчину R, 0,5мл 40%-ного розчину уро 5 34353 тропіну. Доводять водою до 10,0мл та перемішують. Вимірюють інтенсивність люмінесценції (Іпр) при lеміс=614нм (опромінювання УФ-світлом при lзбудж=320нм). Паралельно вимірюють інтенсивність люмінесценції розчину робочого стандартного зразка (РСЗ) тамоксифену цитрату (Іст). Розчин РСЗ тамоксифену цитрату. 0,025г тамоксифену цитрату розчиняють у 25,0мл метанолу. 5,0мл одержаного розчину вносять у мірну колбу об'ємом 50,0мл, розчиняють в 40мл води з підлужуванням 0,1моль/л розчином NaOH до рН 7,5, перемішують та доводять водою до 50,0мл. 1,0мл одержаного розчину вносять у мірну колбу об'ємом 10,0мл, а далі додають всі реактиви як, зазначено в приготуванні випробовуваного розчину. Розчин використовують свіжоприготованим. Паралельно готують розчин холостої проби, який містить усі компоненти, крім тамоксифену цитрату. Вимірюють інтенсивність люмінесценції холостої проби (І0) за зазначених вище умов. При розрахунку інтенсивності люмінесценції випробо 6 вуваного розчину та розчину РСЗ враховують Ілюм холостої проби. Вміст тамоксифену цитрату (X) в одній таблетці у міліграмах обчислюють за формулою: X= I пр × m0 × b × 5 × 25 × 50 × 10 = I пр × m0 × b I ст × m1 × 25 × 50 × 10 × 5 I ст × m1 , Іпр - інтенсивність люмінесценції випробовуваного розчину; Іст - інтенсивність люмінесценції розчину РСЗ тамоксифену цитрату; m 0 - наважка РСЗ тамоксифену цитрату, у міліграмах; m 1 - наважка порошку розтертих таблеток, у міліграмах; b - середня маса таблетки, у міліграмах. Точність і достовірність визначення тамоксифену цитрату у розчинах перевірені методом "введено - знайдено". При n=5; Р=0,95 відносне стандартне відхилення (s r) складає 0,024-0,028. Таким чином, спосіб дозволяє підвищити чутливість визначення тамоксифену цитрату в 2,5 рази та спростити спосіб проведення аналізу у порівнянні з прототипом. Таблиця. Результати визначення тамоксифену цитрату (X) в таблетках «Тамоксифен», виготовлених ТОВ «Фармацевтична компанія «Здоров'я»», (Р=0.95, n=5) Серія 1 2 X, мг 9,80 9,55 10,20 9,75 9,85 10,25 9,80 10,30 9,90 10,20 Xср±DX Sr, % 9,83±0,29 2,4 10,09±0,29 2,8 7 Комп’ютерна в ерстка І.Скворцов а 34353 8 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601