Спосіб одержання радіорезистентного штаму карциноми герена

Номер патенту: 35162

Опубліковано: 15.03.2001

Автор: Зінченко Валентина Андріївна

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб одержання радіорезистентного штаму карциноми Герена, що полягає в багаторазовому послідовному рентгенівському опроміненні та ретрансплантаціі відновлених після опромінення пухлинних клітин, який відрізняється тим, що опромінення проводять in vivo і завдяки селективному відбору протягом 15-20 генерацій найбільш стійких до іонізуючої радіації клітин, карцинома Герена стає радіорезистентною.

Текст

Спосіб одержання радіорезистентного штаму карциноми Герена, що полягає в багаторазовому послідовному рентгенівському опроміненні та ретрансплантацїі відновлених після опромінення пухлинних клітин, який відрізняється тим, що опромінення проводять in vivo і завдяки селективному відбору протягом 15-20 генерацій найбільш стійких до іонізуючої радіації клітин, карцинома Герена стає радіорезистентною. В деяких випадках вчені формували і досліджували теж карциному Герена, але таку, яка набувала резистентність до хімічних сполук, а не до радіації і це сприяло вирішенню проблем хіміотерапії, а не променевої терапії. На відміну від широкого вивчення хіміорезистентності, радіорезистентністюмайже не займаються. Методичний підхід до формування в наших експериментах радіорезистентності співпадає з аналогічним процесом набуття хіміорезистентності [3]. За прототип нами взяті дослідження вчених з Киргизстану [Балмуханов СБ., Ефимов М.Л. Радиочувствительность опухолей в эксперименте. Алма-Ата: Наука, 1971 - 172 c.J, які досягли пев-' них успіхів у вивченні радіорезистентності пухлин в експерименті. За допомогою біохімічних методів вони вивчали радіорезистентність, але інших пухлинних штамів: лімфосаркоми Плісса щурів та асцитної карциноми Ерліха мишей. Вони також використовували багаторазові чергування процесів опромінення і ретрансплантації пухлинного матеріалу, але методичний підхід до формування радіорезистентності в наших та їхніх експериментах не співпадає. Суттєвим недоліком їх досліджень було те, що вони проводили опромінення пухлинних клітин, які вилучали з тварини-донора, в пробірці (in vitro), а потім перещеплювали тваринам-реципієнтам. В наших експериментах опромінювали пухлину, яка знаходилася під шкірою заднього стегна (in vivo), екрануючи свинцем тулуб щура, що є максимально наближеним до умов клініки. В основу винаходу покладена задача створення радіорезистентного (РР) штаму карциноми Герена, шляхом ретрансплантації (селекції*) радіо CM со ю со 35162 резистентйих клітин як» збереглися після їх опромінення що дає можливість забезпечити підвищення ефективності променевої терапії, завдяки отриманню моделі пухлини з певними (штучно закладеними) властивостями < ? Поставлена задача виконується слідуючим чином Досліди ПО формуванню селективної РР пухлин проводили на нелінійних щурах-самцях масою 110 f 10 г розведення віварію УНДЮР МОЗ Україні На першому етапі досліджень тваринам пере щеплювали під шкіру стегна 20% ну суспензію клітин карциноми fepeHa Після цього щурів ділили на дві групи (на всіх етапах дослідження у кожній з них було не менше 10 тварин) піддослідну і контрольну пухлини яких не підпадали під опромінення Пухлини щурів піддослідної групи після досягікчч'ч лмметру 19 0 + 0 6 мм на 9 добу від перещеплення піддавали локальному рентгенівському опроміненню в сумарній терапевтичній дозі 50 Гр (5 фракцій по 10 Гр) на установці РУМ-17 при наступних (завжди стандартних) технічних умовах 180 кВ 10 мА фільтри 0 5 мм Си + 1 0 мм АІ шкірно фокусна відстань - 25 см потужність дози - 1,25 Гр/хв Тіло щура екранували свинцем товщиною в З мм Щурів контрольної групи не піддавали ніяким впливам Тварин з рецидивами що виникли після закінчення опромінення, забивали декапітацією під легким ефірним наркозом Пухлини після вилучення використовували для виготовлення 20% суспензії пухлинних клітин яку на другому етапі перещеплювали новим групам тварин контрольній (без опромінення) та ПІДДОСЛІДНІЙ яку опромінювали за схемою описаною вище Третій етап досліджень повністю відтворював другий на четвертому також для виготовлення 20% суспензії клітин використовували пухлини ви* лучені з тварин контрольної групи третього етапу на 20 добу після ретрансплантацп Ці клітини перещеплювали тваринам контрольної та дослідної (опроміненої") груп і, таким чином і надалі підтримували процес набування РР у наступних генераціях Таким чином було проведено 20 етапів ретрансплантаци та опромінення рецидивів карциноми Герена Отриманий оригінальним методом РР варіант карциноми Герена відрізняється від класичного (дикого) штаму особливостями росту морфології і метаболізму Деякі характеристики кінетики росту карциноми та и морфологічні параметри в РР варіанті виявилися зміненими що доведено за допомогою математичних морфологічних та біохімічних методів В карциномі Герена виявлена присутність не менше двох субпопуляцій клітин що істотно роз* різняються за характеристиками росту і радіочутливості РР пухлини формується в процесі зміни »х співвідношення - монотонного зменшення питомої ваги чутливої до опромінення субпопуляцн І збільшення резистентної Це узгоджується з положеннями клонально-селективної теорії резистентності На етапах вироблення РР, істотно зростає внутрішньопуляційна гетерогенність пухлинних клітин і МІНЛИВІСТЬ між генераціями РР пухлин Вироблення РР є наслідок двох найтіснішим чином взаємопов'язаних процесів - селективного відбору найбільш РР частини клітинної популяції і формування нових ознак в ході адаптивно-пристосувальних реакцій зумовлених радіаційним клітинним стресом У ході цього процесу закономірно наростає поліморфізм клітин їх ядер мембранних структур, нарівні з нежиттєздатними і непроліферуючими клітинами утворюються адаптивні форми, що мають високу РР Одержана модель дозволяє підвищити вірогідність результатів експериментальних досліджень завдяки можливості випробовувати дію більш потужних впливів Внаслідок створення нового штаму соматичних клітин хребетної тварини який за біологічними ознаками відрізняється від існуючого більш високою СТІЙКІСТЮ до іонізуючої радіації, одержана можливість наблизитися до умов променевої терапії, які використовуються в ОНКОЛОГІЧНІЙ КЛІНІЦІ Приклад конкретного виконання В дослід по формуванню селективної РР пухлин було взято 20 нелінійних щурш-самців масою 110 + 10 г розведення віварію УНДЮР МОЗ України Тваринам перещеплювали під шкіру стегна 20%-ну суспензію клітин карциноми Герена Після ЦЬОГО щурів ділили на дві групи контрольну і Дослідну Пухлини щурів піддослідної групи після досягнення діаметру 19 0 ± 0,6 мм на 9 добу від перещеплення піддавали in vivo локальному фракціонованому рентгенівському опроміненню в сумарній терапевтичній дозі 50 Гр (5 фракцій по 10 Гр) на установці РУМ-17 при наступних технічних умовах 180 кВ, 10 мА фільтри 0,5 мм Си + 1 0 мм АІ шкірно-фокусна відстань - 25 см, потужність дози - 1 25 Гр/хв Тіло щурів екранували свинцем, товщиною в 3 мм Щурів контрольної групи не піддавали ніяким впливам Тварин з рецидивами що виникли після закінчення опромінення забивали декапітацією під легким ефірним наркозом Пухлини після вилучення використовували для виготовлення 20% суспензії пухлинних клітин яку на другому етапі перещеплювали новим групам тварин контрольній та ПІДДОСЛІДНІЙ яку опромінювали за схемою описаною вище Пухлинний матеріал, який залишався, піддавали морфологічному та біохімічному аналізу На третьому етапі досліджень тварин з рецидивами що виникали після закінчення опромінення забивали декапітацією під легким ефірним наркозом Пухлини після вилучення використовували для виготовлення 20% суспензії пухлинних клітин яку на цьому етапі перещеплювали новим групам тварин контрольній та піддослідній яку опромінювали за схемою описаною вище Пухлинний матеріал який залишався, піддавали морфологічному та біохімічному аналізу На четвертому етапі для виготовлення 20% суспензії клітин використовували пухлини, вилучені з тварин третього етапу на 20 добу після ретрансплантацп Ці клітини перещеплювали тваринам контрольної та піддослідно» груп, яку опромінювали за схемою описаною вище Пухлинний матеріал, який залишався, піддавали морфологічному та біохімічному аналізу На п'ятому етапі для виготовлення 20% суспензії клітин використовували пухлини, вилучені з тварин четвертого етапу на 20 добу після рет 35162 рансплантації. Ці клітини перещеплювали тваринам контрольної та піддослідної груп, яку опромінювали за схемою, описаною вище. Пухлинний матеріал, який залишався, піддавали морфологічному та біохімічному аналізу. На п'ятому етапі для виготовлення 20% суспензії клітин використовували пухлини, вилучені з тварин четвертого етапу на 20 добу після рєтрансплантації. Ці клітини перещеплювали тваринам контрольної та дослідної груп, яку опромінювали за схемою, описаною вище Пухлинний матеріал, який запишався, піддавали морфологічному та біохімічному аналізу ТакиМ же чином надалі підтримували процес набування РР у наступних генераціях- 6-20 Було проведено 20 етапів ретрансплантації та опромінення рецидивів карциноми Герена. Дослідження механізмів формування набутої резистентності можливі й інформативні лише в умовах створення адекватної експериментальної моделі набування РР, близької до реальних умов променевої терапії хворих на злоякісні новоутворення Така експериментальна модель була нами створена і опробована Процес формування набутої РР супроводжується певними морфологічними, біохімічними та цитокінетичними змінами, появою певних маркерів PP. їх виявлення має значне теоретичне і особливо практичне значення. Джерела інформації: 1. Балмуханов С.Б, Ефимов М Л Радиочувствительность опухолей в эксперименте - Алма-Ата: Науке, 1971. - 172 с (прототип) 2. Кулик Г.И. К механизму лекарственной устойчивости опухоли // Вопр. онкологии - 1969. - Т 15, № 1 1 . - С 60-64. 3 Соляник Ґ.И., Коненко М.М., Чехун В Ф , Кулик Г И Изменение роста карциномы Герена при возникновении резистентности к действию цисплантина и тиофосфамида И Экслерим онкология - 1992. - Т. 14, N9 5. - С. 68-72. 4 Стасык Т В., Антонюк В А , Якимович М.Я. с соавт Сравнительное исследование гликозипьных детерминант клеточной поверхности чувствительных и резистентных к цисплатине клеток мышиной лейкемии L 1210 // Эксперим. онкология. 1998. - Т 20, Ns 3-4, - С. 204-209. 5 Титоб KB , Стюф И Ю., Князев П.Г. Молекулярные аспекты феномена множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток // Эксперим. онкология. - 1994. - Т. 16, No 4. - С. 241-251. 6 Райхпин Н.Т , Смирнова Є А., Перевощиков А.Ґ Апоптоз и его роль в механизмах регуляции роста опухолевых клеток с множественной лекарственной устойчивостью // Архив патологии 1996.-Т. 58, № 2. - С. 3-в. 7 Шишова Ю В., Чехун В Ф. Механизмы резистентности опухолей к цисплатину // Эксперим. онкология - 1998. - Т. 20. № 1 - С. 3-14. 8. Guerin М., Guerin P. Epihtelioma de hiterus du rat lymphatrope et tranaplantable. Bull Ass. Franc. Puor Etude Cancer. - 1934. - V 23, N9 6. - P. 632646. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент)» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3 І

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

A method for producing radio resistant strain of gu-rin's carcinoma

Автори англійською

Zinchenko Valentyna Andriivna

Назва патенту російською

Способ получения радиорезистентного штамма карциномы герена

Автори російською

Зинченко Валентина Андреевна

МПК / Мітки

МПК: A61N 5/10, C12N 5/08

Мітки: герена, спосіб, штаму, одержання, радіорезистентного, карциноми

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/4-35162-sposib-oderzhannya-radiorezistentnogo-shtamu-karcinomi-gerena.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб одержання радіорезистентного штаму карциноми герена</a>

Подібні патенти