Спосіб отримання сухого екстракту кореня ехінацеї блідої

Спосіб отримання сухого екстракту кореня ехінацеї блідої, що включає двостадійну екстракцію сировини водою, об'єднання екстрактів, звільнення від осаду, сушіння, який відрізняється тим, що екстракцію здійснюють при температурі 90100°С протягом 25-30хв. кожну, використовуючи співвідношення сировини та води 1:15, відфільтровують, концентрують до відповідного об'єму, висушують в сушильній шафі під вакуумом, отриману масу подрібнюють й одержують цільовий продукт. (19) (21) u200806988 (22) 20.05.2008 (24) 12.01.2009 (46) 12.01.2009, Бюл.№ 1, 2009 р. (72) КИСЛИЧЕНКО ВІКТОРІЯ СЕРГІЇВНА, UA, КИСЛИЧЕНКО ВІКТОРІЯ СЕРГІЇВНА, UA, ДЬЯКОНОВА ЯН А ВОЛОДИ МИРІВНА, U A, БРУНЬ ЛІДІЯ ВОЛОДИМИРІВН А, U A, ДЄМЬОХІН ВАДИ М БОРИСОВИЧ, UA, ДОРОВСЬКИЙ ОЛЕКСАНДР ВІКТОРОВИЧ, U A, С АМОРОДОВ ВІКТОР МИКОЛАЙОВИЧ, UA, ПОСПЄЛОВ СЕРГІЙ ВІКТОРОВИЧ, UA 3 38728 Сьогодні у медичній практиці застосовують три із дев'яти видів ехінацеї: ехінацея пурпурна, ехінацея вузьколиста і ехінацея бліда. В Україні добре акліматизувалася ехінацея пурпурна. У медичній практиці найбільш відомі настоянка та водноспиртові екстракти ехінацеї пурпурної. Останнім часом препарати ехінацеї пурпурної випускають також у формі таблеток. Нещодавно на фармацевтичному ринку України з'явився новий препарат "Ехінацея-ратіофарм"® у формі таблеток (100мг), які містять фізіологічне активні речовини у вигляді висушеного соку свіжої трави ехінацеї пурпурної, а також допоміжні речовини: високодисперсний діоксид кремнію, сорбітол, натрію цикламат, магнію стеарат. Одна таблетка препарату містить 570мг сорбітолу, що відповідає 0,05 хлібної одиниці. Ехінацея є потужним стимулятором центральної нервової системи, гарний радіопротектор. Використовують її для стимуляції імунної системи та кровотворення, при підвищеній радіації тощо. Про популярність цієї рослини у світі доводить і те, що населення Північної Америки називає ехінацею "швидким лікарем", нею успішно лікували опіки, рани, втамовували зубний біль, кашель, простуду, гонорею, хвороби шлунка, рятували при укусі змій. Препаратами з ехінацеї користуються 80% населення Німеччини, трохи менше - в Італії, Югославії. Ехінацея відома в усьому світі як імуномодулятор природного походження, що стимулює клітинний імунітет, збільшує кількість Т-лімфоцитів, підвищує фагоцитарну активність лейкоцитів і хемотаксис гранулоцитів, сприяє вивільненню цитокінінів, тим самим активізуючи неспецифічну резистентність організму. Крім регулюючого впливу на імунну систему, ехінацея справляє протимікробну, противірусну, фунгіцидну, протизапальну, антиоксидантну, проти алергійну, радіопротекторну дію, стимулює функцію центральної нервової системи, підвищує сексуальну потенцію, сприяє загоюванню ран, опіків, виразок. Застосовується ехінацея як у медичній промисловості для виробництва лікарських препаратів, так і харчовій промисловості як біологічна добавка. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб отримання сухого екстракту з коренів ехінації блідої, шляхом екстракції сировини водою двічі, що дозволить розширити спектр препаратів, які мають антимікробну, та протизапальну активність, в яких у якості сировини використовують корені ехінацеї блідої та забезпечується нова схема одержання екстракту, який має вищезгадані властивості і за рахунок чого одержаний екстракт можна використовувати при захворюваннях в стоматології, отоларингології, дерматології, гастроентерології. Поставлену задачу корисної моделі вирішують тим, що згідно зі способом отримання сухого екстракту з коренів ехінацеї блідої з антимікробною та протизапальною активністю, який включає підготовку сировини шляхом -подрібнення, в якості екстрагента використовують воду, екстрагування проводять двічі, корені ехінацеї блідої використовують з розрахунку 19,5кг на 550л, одержані екст 4 ракти об'єднують, фільтрують, концентрують до 12л, висушують у сушильній шафі під вакуумом і сухий екстракт подрібнюють. Новим у корисній моделі, що заявляється є використання нового виду лікарської рослинної сировини, для України - ехінацеї блідої та отримання на її основі сухого екстракту з антимікробними та протизапальними властивостями. Спосіб одержання екстракту з коренів ехінацеї блідої здійснюється наступним чином. Для одержання екстракту з коренів ехінацеї блідої 19,5кг подрібненої сухої сировини (розмір частинок 710мм) екстрагували двічі. Засипали сировину у ємність, що має водяну оболонку або інший щадний обігрів, додавали воду у співвідношенні (1:15) та екстрагують при помірному кип'ятінні на протязі 30хв., потім 2год. настоювали, 250л екстракту зливали, потім екстрагували, потім екстрагували 300л води при помірному кип'ятінні на протязі 30хв., потім 1,5год. та отримали 300л екстракту. Об'єднували обидва екстракти та концентрували 550л екстракту до 12л. Потім висушували екстракт у сушильній шафі під вакуумом, при температурі 60°С і тиску 85кПа. Далі сухий екстракт подрібнювали та отримали 6кг сухого екстракту кореню ехінацеї блідої. Одержаний екстракт являє собою світло-коричневу пухку аморфну масу, гіркого смаку, з характерним запахом. Екстракт, одержаний за заявленим способом, проявляє широкий спектр фармакологічної дії, а саме антимікробну, протизапальну. Приклад 1 Протизапальну активність екстракту, одержаного за заявленим способом вивчали на моделі карагінінового набряку у дослідах на білих мишах, методом скринінгового вивчення протизапальної активності. Через час після введення дослідних речовин тваринам моделюють асептичне запалення. В задню ніжку підшкірно вводять 0,05мл свіжо приготовленого 1% розчину карагініну. Через 3 години після його введення мишей забивають й ампутують задні лапки. Абсолютну величину набряку в кожному випадку обчислюють по різниці в масі між набряком і здоровою лапками. Активність досліджуваних препаратів визначають по їхній здатності зменшувати розвиток набряку в порівнянні з контролем і виражають у відсотках, величину контрольного набряку приймають за 100%, активність розраховують по формулі. Препаратом порівняння були таблетки по 100г Ехінацея-ратіофарм®. Для досліду використовували білих мишей масою 1822г. Путь введення - per os, тварин розподілили на п'ять груп. 1 група: контрольна патологія (n=20), 2 група: тварини, що отримують сухий екстракт ехінацеї блідої (1:10) у дозі 20мг/кг (n=5) 3 група: тварини, що отримують сухий екстракт ехінацеї блідої (1:10) у дозі 50мг/кг (n=10) 4 група: тварини, що отримують сухий екстракт ехінацеї блідої (1:10) у дозі 100мг/кг (n=15) 5 група: тварини, що отримують сухий екстракт ехінацеї блідої (1:10) у дозі 200мг/кг (n=10). Показники, що досліджують 0 маса набряклих та нормальних лап. Дослід триває 14 діб. 5 38728 Результати досліду представлені у таблиці 1. Приклад 2 Антимікробну активність сухого екстракту ехінацеї блідої, одержаного за заявленим способом вивчали у дослідах in vitro за стандартним методом серійних розведень у поживних середовищах. Відповідно до рекомендацій ВООЗ для оцінки активності препаратів використовували рефренсштами Staphylococus aureus ATCC 25923, Excherichia coli ATCC 25922, Proteus vulgaris NCTC 4636, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Candida albicans ATCC 885/653. Дослідження проводили на середовище виробництва НПО "Живильні середовища" МОЗ Російської Федерації. Відповідно до вимог виробника. Метод серійних розведень дозволив дати кількісну оцінку антимікробної активності досліджуваних препаратів. М'ясо-пептоне живильне середовище розливали в 10 пробірок по 2мл. В першу додавали 2мл приготовлених розчинів досліджуваних об'єктів, перемішували, забирали 2мл і переносили в наступну пробірку і т.д. З останньої пробірки зливали 2мл суміші. У кожну пробірку, включаючи контрольну, вносили по 0,2мл приготованої культури тест-штаму з розрахунку 107108KОЕ/мл. Стандарт посівної культури встановлювали за оптичним стандартом каламутності. Посіви вміщували у термостат на 18-24 години при 37°С. Результати відмічали за наявністю або відсутністю помутніння середовища у пробірках, що містять різні розведення досліджуваного Екстракту. Концентрація Екстракту в останній пробірці із прозорим середовищем (відсутність росту тестмікроба) відповідає мінімально інгібуючій концентрації екстракту (МГК). Аналіз отриманих даних показав, що екстракт ехінацеї in vitro проявляє антимікробну активність 6 у відношенні достатньо широкого кола мікроорганізмів. Приклад 3 Для визначення бактерицидної концентрації з 2-3 останніх пробірок із прозорим середовищем (відсутність видимого росту) робили висів 0,1мл вмісту на чашки зі щільним живильним середовищем або пробірки з бульйоном. Інкубування проводили 18-24 години при 37°С і відзначали ту мінімальну концентрацію препарату, посів з якої не давав росту на агарі або в бульйоні. Ця кількість препарату відповідала його мінімальній бактерицидній концентрації. У досліді використовували б стандартних штамів мікроорганізмів і 4 клінічних, отриманих від хворих із запальними захворюваннями. Проводили по шість випробувань. Дані досліду свідчать, що екстракт характеризується широким спектром антимікробних властивостей, які включають бактерицидну та бактеріостатичну дію у відношенні використаних тестштамів. Аналізуючи представлені матеріали слід зазначити, що найбільш виражену протимікробну активність Екстракт виявив у відношенні грампозитивних піогенів та кишкової палички. Таким чином, сухий екстракт коренів ехінації блідої перспективні для перорального застосування при терапії інфекцій верхніх дихальних шляхів, інфекцій спричинених грибами роду Candida, а також для технологічного відтворення відповідних лікарських форм для зовнішнього застосування при лікуванні ран, екзем, трофічних ран, опіків. Заявлений засіб може знайти застосування у стоматології, отоларингології, дерматології, гастроентерології. Засіб простий у одержанні, може бути ви готовлений на стандартному обладнанні фармацевтичних підприємств, має достатню сировинну вітчизняну базу. Таблиця 1 Назва препарату 1 2 3 4 5 Сухий екстракт ехінацеї блідої Ехінацея-ратіофарм® Доза, мг/кг 20 50 100 200 100 А,% 21,0 35,75 50,0 73,0 53,78 Таблиця 2 Мікроорганізми St.aureus - 25923 АТСС E.coli - 25922 АТСС P.vulgaris NCTC 4636 P.aeruginosa -27853 АТСС С.albicans - 885653 АТСС Str.pyogenes 2432 АТСС St.aureus 4a (клінічний) St.aureus 4б (клінічний) Str.pyogenes 5в (клінічний) Str.pyogenes 7а (клінічний) МГК(М1), мг/мл Екстракт з коренів ехінацеї 40-50 50-70 рост рост 55-65 40-60 рост 50-55 45-50 50-70 7 38728 8 Таблиця 3 Мікроорганізми St.aureus - 25923 АТСС Е.coli - 25922 АТСС С.albicans - 885653 АТСС Str.pyogenes 2432 АТСС St.aureus 4a (клінічний) St. aureus 4б (клінічний) Str.pyogenes 5в (клінічний) Str.pyogenes 7а (клінічний) Комп’ютерна в ерстка А. Рябко Діаметр зон затримки росту, мм 5% розчин екстракту з коренів ехінацеї 14,0±0,1 12,5±0,3 11,5±0,1 150±0,2 рост 13,5±0,2 14,0±0,1 14,5±0,3 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601