Спосіб лікування опіку очей

Спосіб лікування опіку оч-зй, що включає ферментативну обробку протеолітичними ферментами, який відрізняється тим, що додаткоее проводять попередню обробку рогівки та кон'юнктиви очей 3-7%-м водним розчином желатини. Винахід стосується офтальмології, а саме лікування опіку очей. Відомий спосіб лікування опіку очей за допомогою ферментативної обробки іммобілізованим протеолітичним ферментом для очищення поверхні ока (див. Перетегин О.А., Вит В.В., Гончар А.М Эффективность применения протеолитического фермента иммозимозы при лечении тяжелых химических ожогов роговицы в эксперименте. - Офтальмологический журнал. 1987, № 3, с. 145-148). Однак, цей спосіб не реалізовано анаслідоі|мизької ефективності лікування. Найближчим до винаходу, що заявляється, є спосіб лікування опіку очей з використанням ферментативної обробки протеолітичними ферментами при лікуванні лужного опіку рогової оболонки очей (див. Чалапова Р.И. Неотложная кератопластика с предварительной ферментативной обработкой в лечении изолированного щелочного ожога роговой оболочки. Офтальмологический журнал. - 1999, N« 4, с. 227-232). Експериментальні дослідження здійснювалися на очах кролів, яким відтворювали тяжкий лужний опік рогової оболонки (10% NaOH з експозицією 10 сек та наступною ферментативною обробкою протеолітичними, ферментами лекозимом та лужною протеазою). Внаслідок цього некротичні шари рогівки відторгалися самостійно. Приживлення трансплантату при використанні лекозиму відмічалося у 65%, а лужної протеази у 78% уражених очей. При цьому використання протеолітичних ферментів робилося на припущенні того, що вони гідролізують тільки денатуровані білки. Це виявилося при використанні протеолітичних ферментів при лікуванні опіку шкіри та гнійної рани у загальній хірургічній практиці (див. Гончар П.М., Коган Л.С., Салгзник Р.И Раневой процесе и иммобилизованные протеолітические ферменты. - Новосибирск, 1986. - С. 29-30; Кузин М И Раны и ранезая инфекция - М., Медицина, 1990 - С. 280-281). Автори показали, що протеолітичні ферменти, а саме, лужна протеаза, впливають при ферментативжй обробці очей також і на здорову (неденатуровану) тканину. Оброблення 10 мг рогівки очей кроля 0,5 ом 3 водного розчину лужної протеази (який включає 11,8 мг лужної протеази, 1.5 сіл3 Ма-фосфатного буферу рН 7,2) на протязі 2 юдин при 37°С приводило до часткового гідролізу нативної рогівки з виділенням 0,063±0,006 мкадоль/мг рогівки амінокислот і 61,9±0,01 мкг/мг рогівки білка Незважаючи на те, що нативна рогівка піддається дії протеази менше, ніж денатурована, протеолітичні ферменти її гідролізують. Тому не відбувається 100% приживлення трансплантату в разі використання протеолітичних ферментів при лікуванні опіку очей.В основу винаходу поставлено задачу в способі лікування опіку очей, що включає ферментативну обробку протеолітичними ферментами за рахунок введення додаткової операції забезпечити підвищення ефективності лікування. Поставлену задачу вирішено у способі лікування опіку очей, який включає ферментативну обробку протеолітичними ферментами, тим. що (22) 28.09.2000 (24) 15.06.2001 (46) 15.06.2001, Бюл. № 5, 2001 р. (72) Давиденко Тетяна Іванівна, Бондаренко Галина Іванівна, Чаланова Раїса Іванівна (73) ФІЗИКО-ХІМІЧНИЙ ІНСТИТУТ !М. О.В, БОГАТСЬКОГО НАН УКРАЇНИ Дануй спосіб обрано прототипом. Загальним у прототипі та винаході є використання ферментативної обробки протеолітичними ферментами при лікуванні опіку очей. 39527 додатково проводять попередню обробку рогівки та кон'юнктиви очей 3-7%-вим водним розчином желатину. Новим у винаході, що заявляється, є попередня обробка рогівки та кон'юнктиви очей 3 7%-вим водним розчином желатину. Причично-иаслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляється і досягнутим результатом можна пояснити слідуючим: желатина, як і інші білки є амфотерним поліелектролітом Вона має у своєму складі групи -ОН, -СООН та інші. Вона здатна утворювати іонні зв'язки з нативними білками рогівки та кон'юнктиви очей, тим самим захищаючи їх від протеолітичних ферментів, які у цьому випадку гідролізують більш денатуровані білки. Якщо після обробки очей кроля водним розчином желатини 10 мг рогівки піддати дії 0,5 см 3 розчину лужної' протеази (який включає 11,8 мг лужної протеази у 1,5 см 3 Na-фосфатного буферу рН 7,2) на протязі 2 годин при 37°С, то утворюється 0,022±0,003 мкмоль/мг амінокислот рогівки і 10,2±1,4 мкг/мл білка рогівки. Таким чином, внаслідок дії протеолітичних ферментів на оброблену желатиною рогівку утворюється у 3 рази менше амінокислот та у 6 разів менше білка. При цьому велике значення має здатність желатини стимулювати процеси регенерації ушкоджених тканин, слабка антигенність, нетоксичність, відсутність канцерогенних властивостей та висока сорбційна здатність. У зв'язку з цим відомо використання желатини у технології лікарських форм (див. Иванова Л А., Сычеников И.А, Кондратьева Т.С Коллаген в технологии лекарственных срорм. - М., Медицина, 1984. 112 с). Але захисні властивості желатини у відношенні до неденатурованих тканин не були відомі та не можливо цей ефект спрогнозувати. Спосіб лікування опіку очей реалізується слідуючим чином. Кролям відтворювали хімічний або термічний опік рогівки очей та обробляли очі 3-7%-вим водним розчином желатини. Для цього кон'ьюнктивальну порожнину очей за допомогою розширювальної ванночки промивали розчином желатини. Після цього здійснювали ферментативну обробку протеолітичними ферментами з послідуючою негайною кератопластикою. Приклади конкретного використання. Дослідження здійснювали на очах 29 кролів (обидва ока) 8 кролів були контрольні (І група) 7 кролям (И група) проводили за допомогою розширювальної ванночки обробку очей 3%-вим водним розчином желатини 7 кролям (НІ група) утворювали тяжкий ізольований лужний опік рогівки очей 10% NaOH на протязі 10 секунд, а далі, використовуючи розширювальну ванночку, обробляли очі водним розчином желатини з послідуючою ферментативною обробкою протеолітичними ферментами, а для одного ока 7 кролям здійснювали послідуючу негайну кератопластику. 8 останньому випадку (III група) спостерігали практично повне відслоювання денатурованої тканини рогівки. Результати визначення амінокислот та білків наведені у таблиці 1. Ці дані підтверджують захисний ефект 3% водного розчину желатини неушкод женої опіком тканини Таким чином, при ферментативному гідролізі протеолітичними ферментами утворюється у 3 рази менше амінокислот та у 6 разів менше білка. У групі кролів, при лікуванні опіку очей, яким застосовували обробку желатиною, приживлення трансплантату при застосуванні лекозиму було у 80%, а лужно» протеази у 90%, що на 15% і відповідно 12% вище ніж у прототипі Приклад 1 (табл. 2). 7 кролям утворювали тяжкий ізольований лужний опік рогівки очей 10% NaOH на протязі 10 сек, а далі, використовуючи розширювальну ванночку, обробляли очі 3% водним розчином желатини з послідуючою ферментативною обробкою протеолітичними ферментами, з послідуючою негайною кератопластикою. Приклади 2-3. Дослідження здійснювали як у Прикладі 1, використовуючи 5%, 7% водний розчин желатини. Отримані результати підтверджують необхідність обробки рогівки кон'юнктиви очей 5%, 7% водним розчином желатини (в разі лужного опіку очей). При цьому спостерігалось у 3-3,5 рази менше утворення амінокислот та в 6-6,5 разів менше утворення білка, ніж у групах кролів, де обробка не проводилася Це підтверджує захисний ефект желатини на неушкоджені тканини очей у разі ферментативної обробки протеолітичними ферментами. Приклади 4—5 свідчать про недоцільність проведення обробки рогівки та кон'юнктиви очей 1% та 9% водним розчином желатини. У випадку 1% розчину - ефект малий, а у випадку 9% розчину желатини - не спостерігається подальше зниження утворення амінокислот та білка. Приклади 6-8. 7 кролям здійснювали кислотний опік очей, далі обробляли очі 3%, 5%, 7% водним розчином желатини з послідуючою ферментативною обробкою протеолітичними ферментами. Отримані результати підтверджують доцільність проведення обробки ропвки кон'юнктиви очей 3%, 5%, 7% водними розчинами желатини (у випадку кислотного опіку очей) При цьому спостерігається у 2,5-3 рази менше утворення білка, ніж у групах кролів, для яких ця обробка не проводилася. Це підтверджує захисний ефект желатини на ушкоджені тканини очей при ферментативній обробці протеолітичними ферментами у разі кислотного опіку очей. Приклади 9-10 свідчать про недоцільність проведення обробки очей 1% та 9% водним розчином желатини у випадку кислотного опіку очей. Приклади 11-13. Підтверджують доцільність проведення обробки рогівки та кон'юнктиви очей 3%, 5%, 7% водними розчинами желатини при термічному опіку очей. » Приклади 14-15. Свідчать про недоцільність проведення обробки 1% та 9% водними розчинами желатини при термічному опіку очей (Табл. 2). Таким чином, обробка рогівки та кон'юнктиви очей 3-7% водним розчином желатини захищає 39527 очі від впливу протеолітичних ферментів, які у цьому випадку гідролізують більш денатуровані білки. Тому приживлення трансплантату на 15% вище, ніж у прототипі. Таблиця 1 Визначення амінокислот та білків при ферментативному гідролізі рогівки очей кроля Групи кролів Амінокислоти, мкмоль/мг рогівки Білки, мкг/мг рогівки І 61,910,01 0,063+0,006 II 0,022±0,003 0,13010,009 III 10,2±1,4 77,3±8,6 Таблиця 2 Залежність утворення амінокислот та білків при ферментативному гідроліз» рогівки очей від кількості введеної желатини Шзіп Кількість желатину Амінокислоти, Білки, мкг/мг рогівки Тип опіку мкмоль/мг рогівки прикл. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 3 5 7 1 9 3 5 7 1 9 3 5 7 1 9 0,02210,003 0,021+0.003 0,01810,002 0,049+0,004 0,02010,003 0,02510,003 0,0231,0,002 0,021Ю,003 0.03710,004 0,02210,003 0,02610,003 0,02310,003 0,01910,002 0,03210.004 0,02010,003 10,211,4 10,311,0 9.511,1 30,711,3 10,211,0 12.411,3 11.911,2 11,211,0 27,3101,4 11.111.2 13,511,1 12,311,0 11,711,3 24,311,1 10,910,9 Лужний _и_ _-_ —"Кислотний _-_ т —"— Термічний . 11 м —"— - " Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3 І