Спосіб моделювання хронічного отруєння алкоголем

Спосіб моделювання хронічного отруєння алкоголем, що здійснюють шляхом непримусової алкоголізації тварин розчином етанолу, який відрізняється тим, що попередньо проводять відбір тварин, схильних до вживання етилового спирту, а алкоголізацію здійснюють в три етапи, при цьому на першому етапі алкоголізацію проводять 5% розчином етанолу, на другому – 15% розчином етанолу, на третьому – 15% і 96% розчинами етанолу. (19) (21) u200812542 (22) 27.10.2008 (24) 25.03.2009 (46) 25.03.2009, Бюл.№ 6, 2009 р. (72) КОВАЛЬОВ ГЕННАДІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, UA, ПЕТРЕНКО ОЛЕКСАНДР ЮРІЙОВИЧ, UA, САНДОМИРСЬКИЙ БОРИС ПЕТРОВИЧ, UA (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ, UA 3 40117 ACT), зниженням функціональної активності печінки (зниження рівня альбуміну в плазмі крові, збільшення протромбинового часу, зменшення вмісту цитохрому Р 450 і зниження Амінопірін N - Деметілазной активності в печінці щурів); в) вираженими патоморфологічними змінами в цих органах на клітинному і тканинному рівнях. Спосіб здійснюють таким чином. Заздалегідь відбирають тварин, схильних до вживання етилового спирту. Потім проводять хронічне отруєння алкоголем в три етапи. На першому етапі тварини одержують 5% розчин етанолу як єдине джерело рідини, на другому - 15% розчин етанолу як єдине джерело рідини, на третьому 15% розчин етанолу як єдине джерело рідини і 96% розчин на хлібі. Приклад. В експерименті використовували 3-місячних білих безпородних щурів-самиць, оскільки у них вище чутливість до алкоголю і швидше розвивається алкоголь-індуковане ураження головного мозку і печінки. Відбір тварин, схильних до алкоголізації проводили таким чином. За 1 добу до проведення тесту тварин позбавляли їжі і доступу до води, потім їх поміщали в індивідуальні клітки и давали по 1мл 40% розчину етанолу на шматочках білого хліба. Критерієм відбору була кількість хліба, з'їденого, протягом години. Тварин, що з'їдали менше половини шматочка, вибраковували. Відібраних тварин (n=20) розподіляли на дві рівні групи - контрольну і експериментальну. Щурів експериментальної групи піддавали алкоголізації. На першому етапі (протягом одного тижня) щури знаходилися на звичайній дієті, але замість води отримували 5% розчин етанолу. На другому етапі 5% розчин етанолу замінювався 15% розчином. Тривалість другого етапу складала один тиждень. Третій етап - інтенсивна алкоголізація. Замість звичайної дієти тварини отримували 15% розчин етанолу як єдине джерело рідини і 96% розчин етанолу на шматочках білого хліба. Добова доза алкоголю складала 14-18г/кг маси тіла на добу. 4 Двічі на тиждень щури отримували паростки вівса. Тривалість третього етапу складала одинадцять тижнів. Після закінчення третього етапу вивчали морфо-функціональний стан головного мозку і печінки. Результати наведені в Таблицях 1-5. Як видно з Таблиці 1, алкоголь-індуковане пошкодження гепатоцитів виявлялося підвищенням рівня амінотрансфераз в плазмі крові, порушенням синтезу і секреції експортних білків, посиленням пероксидації ліпідів в печінці, пригніченістю глутатіонпероксидазної і каталазної активностей, зниженням вмісту цитохрому Р-450 і амінопіриндеметилазної активності. За даними світлової мікроскопії (Таблиця 2) мали місце різкі порушення структури печінки, як на клітинному, так і на тканинному рівні, що виявлялося дистрофічними, атрофічними і некротичними пошкодженнями паренхіматозних клітин, а у ряді випадків дискомплексацією балок і часток. У більшості тварин було відзначено підвищення внутрішньопечінкового і портального тиску. Дані Таблиці 3 демонструють, що алкогольіндуковане ураження головного мозку характеризувалося посиленням в ньому базального і індукованого ПОЛ, пригніченням активності глутатіонпероксидази і каталази. Часто зустрічалися морфологічні ознаки пошкодження головного мозку на тканинному рівні (Таблиці 4, 5). Мікроскопія зрізів головного мозку виявила пошкодження тканини мозку, м'яких оболонок і судинних сплетень шлуночків мозку у 100% випадків. Патоморфологичні ознаки пошкодження м'яких оболонок мозку виявлялися у вигляді повнокров'я і плазматичного просочення судинної стінки, периваскулярного набряку. Збоку шлуночків мозку спостерігалося пошкодження епендими, набряк стінки, підвищення продукції ліквора. Вивчення зовнішнього пірамідного шару сенсомоторної кори виявило масове пошкодження нейронів (Таблиця 5). Спостерігалися атрофія і лізис нейронів, зменшення клітин в об'ємі з посиленим поглинанням фарби (що свідчить про глибоке їх пошкодження), зморщення, а також вакуолизація ядер і маргинація хроматину. Таблиця 1 Біохімічні показники ураження печінки (М±m; n=10) Група Показники АЛТ (Е/Л) ACT (Е/Л) Альбумін (г/дл) Протромбіний час (сек.) Базальний рівень ТБК-активних продуктів в печінці щурів (пмоль МДА/мг білка) Інтенсивність індукованого ПОЛ в печінці щурів (пмоль МДА/мг білка/хвил) Активність глутатіонпероксидази в печінці щурів (мкмоль GSSG/мг білка/хвил) Активність каталази в печінці щурів (мкмоль Н2О2/мг білка/хвил) Вміст цитохрому Р 450 в печінці щурів (пМоль/мг білка) Амінопірін N - деметілазна активність в печінці щурів (пМоль/хвил/мг білка) Примітка: тут і далі *- Р