4-[5-(4-метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]-5-(4-нітробензиліден)-5н-тіазол-2-он, що виявляє протипухлинну активність

4-[5-(4-Метоксифеніл)-3-феніл-4,5дигідропіразоліл-1]-5-(4-нітробензиліден)-5Нтіазол-2-он формули: 2 , 3 44775 Синтезована сполука є жовтим кристалічним порошком, розчинним у ДМСО і ДМФА, малорозчинним в оцтовій кислоті, нерозчинним в спирті, ацетоні, воді та ефірі. Для доказу складу і структури синтезованої сполуки були використані відомі фізико-хімічні методи, зокрема ЯМР-спектроскопія (1Н та 13С) та елементний аналіз. Одержані результати свідчать про відповідність синтезованої сполуки заявленій. Заявлену сполуку одержують взаємодією 4-[5(4-метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]5Н-тіазол-2-ону та 4-нітробензальдегіду в умовах реакції Кньовенагеля. Реакцію проводять в середовищі оцтової кислоти в присутності безводного ацетату натрію як каталізатора. Для визначення протипухлинної активності 4[5-(4-метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл1]-5-(4-нітробензиліден)-5Н-тіазол-2-ону попередньо проведено прескринінг протипухлинної активності на 60 лініях ракових клітин людини, діючи на них лише однією дозою препарату (10-5моль/л) [Alley М.С., Scudiero D.A., Monks P.A. et al. Feasibility of Drug Screening with Panels of Human Tumor Cell Lines Using a Microculture Tetrazolium Assay, Cancer Research, 1988, 48, 589-601]. За результатами проведеного прескринінгу 4[5-(4-метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл1]-5-(4-нітробензиліден)-5Н-тіазол-2-ону встановлено, що середнє значення відсотку росту клітин відносно контролю становить 55,47% та зазначена сполука характеризується певною специфічністю дії до окремих ліній раку молочної залози (MDAМВ-468: -54,59%), раку яєчників (IGROV1: 30,79%), лейкемії (RPMI-8226: -0,15%) та раку нирок (RXF 393: -20,80%; UO-31: -27,54%). 4 На основі позитивних результатів прескринінгу проведено ґрунтовний протипухлинний in vitro скринінг [F. Leteurtre, G. Kohlhagen, K.D. Paull, Y. Pommier // J. Nat. Cancer. Inst. - 1994. -86. - P.12391244], який полягав у тестуванні сполуки, що заявляється, на 53 та 56 (при повторному тестуванні) лініях людських ракових клітин у мінімум 5 концентраціях при 10-кратному розведенні. Протиракова активність 4-[5-(4-метоксифеніл)3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]-5-(4нітробензиліден)-5H-тіазол-2-ону вивчалась на клітинних лініях лейкемії (Leukemia) (CCRF-CEM, HL-60(TB), K-562, MOLT-4, RPMI-8226, SR), недрібноклітинного раку легень (Non-Small Cell Lung Cancer) (A549/ATCC, EKVX, HOP-62, HOP-92, NCIH23, NCI-H226, NCI-H322M, NCI-H460, NCI-H522), епітеліального раку (Colon Cancer) (COLO 205, HCC-2998, HCT-116, HCT-15, HT-29, KM12, SW620), раку ЦНС (CNS Cancer) (SF-268, SF-295, SF539, SNB-19, SNB-75, U251), меланоми (Melanoma) (LOX IMVI, M14, MALME-3M, SK-MEL2, SK-MEL-28, SK-MEL-5, UACC-257, UACC-62), раку яєчників (Ovarian Cancer) (IGROV1, OVCAR-3, OVCAR-4, OVCAR-5, OVCAR-8, SK-OV-3), раку нирок (Renal Cancer) (786-0, A498, ACHN, CAKI-1, SN12C, TK-10, UO-31), раку простати (Prostate Cancer) (PC-3, DU-145), раку молочної залози (Breast Cancer) (MCF7, NCI/ADR-RES, MDA-MB231/ATCC, HS 578T, MDA-MB-435, MDA-MB-468, BT-549, T-47D). В умовах експерименту 4-[5-(4-метоксифеніл)3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]-5-(4нітробензиліден)-5Н-тіазол-2-он проявив високу протиракову активність при дослідженнях на 53 та 56 клітинних лініях, результати яких наведено в таблиці. Таблиця Протиракова активність 4-[5-(4-метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]-5-(4-нітробензиліден)-5Н-тіазол-2-ону Лінія клітин раку 1 Лейкемія (Leucemia) Недрібно-клітинний рак легень (Non-Small Cell Lung Cancer) 2 CCRF-CEM HL-60(TB) K-562 MOLT-4 RPMI-8226 SR A549/ATCC EKVX HOP-62 HOP-92 NCI-H23 NCI-H226 NCI-H322M NCI-H460 NCI-H522 Протиракова активність in vitro lg GI50 lg TGI *lg GI50 *lg TGI 3 4 5 6 -6,09 -5,56 -6,01 -5,54 > -4,30 -5,92 > -4,30 > -4,30 -5,80 > -4,30 -5,87 -4,40 -6,34 -5,78 -6,05 -5,66 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -4,47 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,65 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -4,88 > -4,30 -4,64 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,70 -5,06 5 44775 6 Продовження таблиці 1 Епітеліальний рак (Colon cancer) Рак ЦНС (CNS Cancer) Меланома (Melanoma) Рак яєчників (Ovarian Cancer) Рак нирок (Renal Cancer) Рак простати (Prostate Cancer) Рак молочної залози (Breast Cancer) 2 COLO 205 HCC-2998 HCT-116 HCT-15 HT-29 KM12 SW-620 SF-268 SF-295 SF-539 SNB-19 SNB-75 U251 LOXIMVI M-14 MALME-3M SK-MEL-2 SK-MEL-28 SK-MEL-5 UACC-257 UACC-62 IGROV1 OVCAR-3 OVCAR-4 OVCAR-5 OVCAR-8 SK-OV-3 786-0 A498 ACHN CAKI-1 SN12C TK-10 UO-31 PC-3 DU-145 MCF7 NCI/ADR-RES MDA-MB-231/ATCC HS 578T MDA-MB-435 BT-549 MDA-MB-468 T-47D 3 4 5 -5,95 -5,44 -5,71 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,73 > -4,30 -5,66 -5,86 > -4,30 -5,84 -5,74 > -4,30 > -4,30 -5,49 -5,72 > -4,30 -5,83 > -4,30 > -4,30 -5,44 -4,72 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,34 > -4,30 > -4,30 -4,75 > -4,30 -5,85 -5,74 > -4,30 -5,81 -6,08 -5,78 -6,05 -4.48 > -4,30 -4,37 > -4,30 > -4,30 -4,87 -5,10 > -4,30 -4,75 -5,61 > -4,30 -4,98 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,01 > -4,30 -4,43 -5,57 > -4,30 -5,86 > -4,30 > -4,30 -4,63 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -4,71 > -4,30 -5,61 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -4,56 -5,18 > -4,30 -4,78 -5,45 > -4,30 -4,76 -4,71 > -4,30 > -4,30 -4,97 > -4,30 -5,82 -5,76 > -4,30 -5,69 -5,60 > -4,30 -5,54 -5,88 > -4,30 -5,85 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,55 > -4,30 -4,78 -5,37 -5,47 > -4,30 -5,33 > -4,30 > -4,30 -5,02 -6,04 -5,53 -6,06 -5,79 > -4,30 -6,13 6 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,00 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,11 -5,77 > -4,30 >-4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,26 > -4,30 > -4,30 -4,66 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 > -4,30 -5,74 -5,47 * - результати повторного тестування Як видно з даних, наведених у таблиці, речовина, що заявляється, у концентрації менше 104 моль/л пригнічує ріст пухлинних клітин на 50% на 31 з 53 та 37 з 56 (повторне тестування) досліджуваних ліній та створює повне інгібування росту пухлинних клітин у концентрації менше 10-4моль/л на 5 з 53 та 11 з 56 (при повторному тестуванні) досліджуваних ліній. За результатами in vitro скринінгу сполука, що заявляється, була відібрана для вивчення токсичності in vivo і виявилась нетоксичною. Таким чином, сполука, що заявляється, проявляє високу протипухлинну активність і є перспективним протираковим засобом. Для розуміння запропонованої корисної моделі нижче наведено приклад одержання 4-[5-(4метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]-5(4-нітробензиліден)-5Н-тіазол-2-ону. Сполуку синтезують наступним чином. Синтез 4-[5-(4-метоксифеніл)-3-феніл-4,5дигідропіразоліл-1]-5-(4-нітробензиліден)-5Нтіазол-2-ону. Суміш 0,003моль 4-[5-(4метоксифеніл)-3-феніл-4,5-дигідропіразоліл-1]-5Н 7 44775 тіазол-2-ону, 0,0033моль 4-нітробензальдегіду, 0,003моль ацетату натрію в 10мл оцтової кислоти нагрівають протягом 2год. в колбі зі зворотнім холодильником. Осад, який утворився після повного охолодження реакційної суміші, відфільтровують, промивають оцтовою кислотою, водою, етанолом та ефіром і перекристалізовують з суміші ДМФАЕtOН (1:2). Одержують жовтий порошок з Ттопл. 239-240°С, вихід - 68%. Знайдено, %: N 11,56; S 6,62. C26H20N4O4S. Вирахувано, %: N 11,29; S 6,839. Комп’ютерна верстка А. Рябко 8 ЯМР 1Н, δ , м.ч.: 3,34дд (1Н, СН2СН, J=18,4, 3,5Гц), 3,74с (3Н, СН3), 4,03дд (1Н, СН2СН, J=18,4, 11,0Гц), 5,94дд (1Н, СН2СН, J=11,0, 3,5Гц), 6,89д, 7,23д (4Н, С6Н4, J=8,7Гц), 7,54-7,58м, 7,93д (J=8,8Гц), 7,95д, 8,34д (J=8,8Гц) (9Н, С6Н4, С6Н5), 9,10с (1Н, СН). ЯМР 13С, δ , м.ч.: 175,9 (С=О), 166.4 (C=N, тіаз.), 164.7 (C=N, піраз.), 159,5 (С-О), 147,9, 142,1, 134,9, 133,6, 132,9, 132,7, 131,7, 130,4, 129,8, 128,6, 127,9, 124,7, 114,9, 66,6 (СНСН2), 55,8 (О-СН3), 41,9 (СНСН2). Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601