Спосіб лікування хворих на рак шлунка

Спосіб лікування хворих на рак шлунка, що включає післяопераційний курс вакцинотерапії та ревакцинації, який відрізняється тим, що в післяопераційних зразках пухлин методом імуногістохімії визначають маркери і, при наявності позитивної реакції з моноклональними антитілами проти білків р53, EGFR, HER-2, β-катеніну, VEGF та Bcl-2, призначають протипухлинну аутовакцину. (19) (21) u200905645 (22) 02.06.2009 (24) 25.11.2009 (46) 25.11.2009, Бюл.№ 22, 2009 р. (72) ПОТЕБНЯ ГРИГОРІЙ ПЛАТОНОВИЧ, ЛУК'ЯНОВА НАТАЛІЯ ЮРІЇВНА, БАЗАСЬ ВОЛОДИМИР МИКОЛАЙОВИЧ, ЛІСОВЕНКО ГАЛИНА СТЕПАНІВНА, ЧЕХУН ВАСИЛЬ ФЕДОРОВИЧ (73) ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ПАТОЛОГІЇ, ОНКОЛОГІЇ ТА РАДІОБІОЛОГІЇ ІМ. Р.Є. КАВЕ 3 катеніну, β-катеніну, Е-кадгерину, HER-2/neu, EGFR та VEGF за допомогою імуногістохімічного методу, що дає можливість корегувати курс імунотерапії та подовжити час ремісії хворого до 3-х років. Поставлена задача вирішується наступним чином. Після хірургічного втручання пухлинну тканину фіксують у 10%-му водному розчині нейтрального формаліну і заливають в парафін за загальноприйнятим методом. Імуногістохімічне дослідження (ІГХД) експресії білків р53, BCL-2, HER-2/neu, EGFR, Е-кадгерину, α-, та β-катеніну, та VEGF проводять на парафінових зрізах пухлинної тканини. Парафіновані зрізи товщиною 4-6мкм монтують на скельця, покриті полі-L-лізином, або на скельця з адгезивними властивостями SuperFrost Plus («Sigma», Німеччина) і залишають на добу в термостаті при 37°С або ж на 30хв. в термостаті при 56°С (у разі застосування скелець Super Frost Plus). У день проведення імуногістохімічної реакції проводять депарафінування та зневоднення зрізів. Для оптимального імуногістохімічного визначення експресії антигенів проводять демаскування антигенів в розчині 0,1М цитратного буферу (рН6,0), шляхом інкубування у мікрохвильовій печі протягом 2хв. за потужності 600 Вт, або на водяній бані протягом 20хв. за температури 90°С з подальшим охолодженням скелець до кімнатної температури у розчині цитратного буферу. Надалі виявлення антигенів проводять у вологій камері при кімнатній температурі. Для зменшення неспецифічного забарвлення на зрізи наносять 1%-ий розчин бичачого сироваткового альбуміну (БСА). Білки, що входять до його складу, блокують усі високо заряджені неспецифічні ділянки, з якими може відбутися неспецифічне зв'язування моноклональних антитіл (МКАТ). Потім протягом однієї години проводять інкубацію препаратів з МКАТ, специфічними до вищезазначених білків. Після цього зрізи тричі відмивають у фізіологічному розчин. NaCl, забуференому фосфатами, рН-7,4. Всі інкубаційні цикли, що передбачені при імуногістохімічному виявленні антигенів, проводять у вологій камері при кімнатній температурі. Для візуалізації застосовують систему «EnVision+» (Dako Cytomation, Данія), яку наносять після МКАТ, з подальшою обробкою 3-,3диамінобензидином (Dako Cytomation, Данія) для визначення активності пероксидази через 30 хв інкубації з вищевказаною системою. Після виявлення активності пероксидази зрізи тканини пухлин дофарбовують гематоксиліном протягом 23хв. і укладають в бальзам або Faramount Aqueous Mounting Medium (Dako Cytomation, Данія). Оцінку результатів фарбування проводять за допомогою світлового мікроскопу (збільшення ´400). Пухлину вважають р53-позитивною, якщо в тканині пухлини позитивна реакція спостерігається більше, ніж у 5% ядер пухлинних клітин. Для ідентифікації інших маркерів (Е-кадгерину, α- та β-катеніну, рецепторів епідермального фактору росту, HER-2/neu та фактору росту ендотелію судин) пухлину вважають 45751 4 позитивною, якщо кількість клітин з даним білком більша за 20%. Нами виявлені клініко-морфологічні та імунофенотипові характеристики злоякісних пухлин шлунка, за наявності яких доцільно проводити імунотерапію з використанням ПАВ: це диференційовані пухлини III та IV стадій T3-4N1-2M0, (табл.13) які виявляють позитивну реакцію на моноклональні антитіла, специфічні до білків р53, EGFR, HER-2, β-катеніну, VEGF та Bcl-2. Таблиця 1 Вплив застосування ПАВ на показники загальної виживаності хворих на рак шлунка в залежності від стадії захворювання Загальна 3-річна виживаність, % Клінічна стадія за класиХворі, які Контрольна фікацією TNM отримували група ПАВ III 70,8±5,6 39,4±8,5 IV 40,9±10,5 26,7±11,4 t 3,08* 0,92 * - р