Спосіб діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті с

Спосіб діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С, який включає дослідження специфічних вірусу гепатиту С анти тіл класів М і G методом імуноферментного аналізу з одночасним визначенням показників імунологічного статусу, який відрізняється тим, що проводять дослідження додаткових імунологічних показників із застосуванням методу непрямої реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням моноклональних антитіл, а також досліджують функціональний стан нейтрофілів шляхом підрахунку фагоцитарного індексу, фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу 00 Винахід стосується медицини, а саме, інфекційних хвороб, і може бути використаний для діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С Відомим Є спосіб діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С (В В Серов, С Д Подымова, Т Н Постникова Морфологическое состояние печени больных хроническим гепатитом при нормальном уровне трансаминаз // Росс журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии -1999 -т IX, №4 - С 45 - 47), який заключається у визначенні методом імуноферментного аналізу специфічних антитіл до різних антигенів вірусу гепатиту С з розподілом на класи М та G, з підтвердженням позитивного тесту імуноферментного аналізу в полімеразній ланцюговій реакції і ГІСТОЛОГІЧНИМИ дослідженнями пунктатів печінки Ознаками, що співпадають з суттєвими ознаками запропонованого способу, є визначення спе 47781 цифічних вірусу гепатита С антитіл класів М і G методом імуноферментного аналізу Причинами, що перешкоджають досягненню очікуваного технічного результату (підвищення точності діагностики), є відсутність інформації про імунологічні порушення в організмі хворого, необхідність спеціального устаткування для узяття бюпсійного матеріалу на дослідження, швазивність методик, громіздкість способу За прототип обрано спосіб діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С (Клименко Ж Б Кпініко-епідемюлопчні особливості гепатиту С Автореф дис канд мед наук, 14 01 13 / КНДІЕХ їм Л В Громашевського -ДО, 1999 -19 с), який заключаешься у визначенні специфічних вірусу гепатита С антитіл класів М та G методом імуноферментного аналізу і основних імунологічних показників методом розеткоутворення з еритроцитами барана (Е-РУК) та визначенням КІЛЬКОСТІ Т-хелперів, Т-супресорів, імунорегуляторного індексу (ІРІ), імуноглобуліну G, рівня циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) Ознаками, які співпадають з суттєвими ознаками запропонованого способу, є визначення специфічних вірусу гепатита С антитіл класів М та G методом імуноферментного аналізу з одночасним дослідженням показників імунологічного статусу Причинами, що перешкоджають досягненню очікуваного технічного результату (підвищення точності діагностики), є неповний перелік імунологічних показників, що свідчать про ступінь імунопатології, визначення досліджуваних показників Т- і В-ланки імунітету недостатньо точним методом розеткоутворення з еритроцитами барана, використання теофілл і нового тесту для визначення субпопуляцій Т-хелперів і Т-супресорів, при проведенні якого бувають погрішності, відсутність даних про функціональний стан нейтрофілів В основу винаходу поставлена задача вдосконалення способу діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С шляхом визначення поряд зі специфічними антительними маркерами гепатиту С більшої КІЛЬКОСТІ імунологічних показників, що дозволяє досягти очікуваний технічний результат підвищити точність діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С, що свідчать про ступінь імунопатології, прогнозувати перебіг захворювання і підбирати лікування Поставлена задача вирішується тим, що в запропонованому способі діагностики імунологічних порушень при хронічному гепатиті С, який включає дослідження специфічних вірусу гепатиту С антитіл класів М та G методом імуноферментного аналізу з одночасним визначенням показників імунологічного статусу, згідно винаходу, проводять дослідження додаткових імунологічних показників із застосуванням методу непрямої реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням мишачих моноклональних антитіл, а також досліджують функціональний стан нейтрофілів шляхом підрахунку фагоцитарного індексу, фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу Між сукупністю суттєвих ознак способу діагностики, імунодефіциту при хронічному гепатиті С, що заявляється і технічним результатом, який може бути досягнутим, проявляється слідуючий причинно-наслідковий зв'язок визначення додаткових імунологічних показників поряд з маркерами гепатиту С забезпечує одержання більш точного діагностичного ефекту, а використання методу непрямої реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням мишачих моноклональных антитіл до антигенів лімфоцитів CD3, CD4, CD8, CD22, CD25, CD16 для визначення їх субпопуляційного складу дозволяє найбільш точно простежити імунологічні зрушення в організмі хворого, необхідні для корекції лікування, при відсутності вищеперелічених ознак технічний результат недосяжний Запропонованим способом обстежено 25 хворих на хронічний гепатит С помірної активності у ВІЦІ 20 - 45 років Отримані дані порівнювались з показниками 20 хворих на хронічний гепатит С помірної активності такої ж вікової групи, отриманими при обстеженні способом-прототипом В групі хворих, імунологічні показники которої досліджувались методом E-PYK, спостерігались наступні зміни зниження Т-лімфоцитів, виражена пперсупресія, значне зниження Т-хелперів і, як наслідок, зменшення імунорегуляторного індексу, а також збільшення рівня ЦІК В той же час в аналогічної групі хворих, обстежених методом з використанням моноклональних антитіл та одночасним визначенням фагоцитарної активності нейтрофилів, виявлено зниження Т-лімфоцитів, значне зниження CD4, помірне зниження CD8, помірне зниження імунорегуляторного індексу, а також збільшення КІЛЬКОСТІ CD25, рівня ЦІК і зниження CD22, CD16 та виражене пригнічення показників фагоцитарної активності нейтрофілів Аналізуючи отримані результати, можна сказати, що запропонований спосіб діагностики дозволяє виявити більш виражені імунні порушення в организмі хворого Спосіб винаходу заключається в слідуючому Хворим на хронічний гепатит С при надходженні в стаціонар проводять дослідження маркерів вірусного гепатиту С класів М та G, а також показників імунологічного статусу рівень CD3, CD4, CD8, CD16, CD22, CD25, нульових лімфоцитів у непрямій реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням мишачих моноклональных антитіл до даних антигенів, рівня циркулюючих імунних комплексів методом преципітації з 3,5% розчином поліетіленгликоля і оцінюють функціональний стан нейтрофілів шляхом підрахунку фагоцитарного індексу, фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу Застосування способу ілюструється слідуючими прикладами Приклад 1 Хвора Г , 1974 р н , звернулась за консультативною допомогою 2 03 2001 на приймальне відділення 7-і міської лікарні зі скаргами на виражену невмотивовану слабкість, зниження апетиту, ломоту в ТІЛІ, постійну субфебрильну температуру, вагу в правому підребер'ї Подібні явища турбують протягом останніх 4 - 5 МІСЯЦІВ, із приводу чого зверталася до різних фахівців У хворої підозрювали системне захворювання, але після ретельного обстеження діаг 47781 ноз колагеноза був відкинутий 23 02 2001 хворій у комплексному обстеженні було проведене дослідження крові на маркери вірусних гепатитів виявлені анти-HCV Ig G 2,3, при нормі до 0,35, і анти-HCV Ig M 0,9, при нормі до 0,35, загальний білірубін 9,8мкмоль/л, АлАТ 1,9ммоль/гхл Був поставлений діагноз хронічний гепатит С, безжовтянична форма, помірної активності Імунологічні показники, досліджені методом розеткоутворення, наведені в таблиці 1 Таблиця 1 Показник Лімфоцити, % Т-лімфоцити, % CD4, % CD8, % ІРІ CD22, % Нульові лімфоцити, % ЦІК, од екст Показник хворого 38 60 49 11 4,5 18 Норма 19-37 45-65 20-40 10-17 2,5-3 15-30 22 20-25 110 80-100 Як видно з таблиці 1, у хворої виявляється помірний лімфоцитоз, різке збільшення ІРІ за рахунок підвищення CD4, при нормальному ВМІСТІ CD8, CD22, нульових лімфоцитів Дослідження імунологічних показників у непрямій реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням мишачих моноклональных антитіл до антигенів лімфоцитів CD3, CD4, CD8, CD22, CD25, CD16 для визначення їх субпопуляційного складу, а також ЦІК методом преципітації з 3,5% розчином поліетиленгликоля і функціонального стану нейтрофілів з підрахунком фагоцитарного індексу, фагоцитарного числа і показника завершеносте фагоцитозу, дозволило виявити зміни, наведені в таблиці 2 Таблиця 2 Показник Лімфоцити, % CD3, % CD4, % CD8, % ІРІ CD25, % CD22, % Нульові лімфоцити, % CD16,% ЦЖ, од є кети н Фагоцитарний індекс, % Фагоцитарне число, ум од Показник завершеності фагоцитозу, % Показник хворого 41 64 33 31 1,1 26 13 24 8 Норма 42 21-39 67-76 38-46 31-40 1,0-1,5 16-20 11-16 19-25 10-19 0,0060,110 40-80 1 Таблиця З Показник Показник хворого Лімфоцити, % 39 Т-лімфоцити, % 41 CD4, % 22 CD8, % 19 ІРІ 1,2 CD22, % 18 Нульові лімфоцити, 22 % ЦІК, од екст 115 >20 0,115 Аналізуючи наведені дані в таблиці 2, видно, що в хворої відзначається помірний лімфоцитоз, Норма 19-37 45-65 20-40 10-17 2,5-3 15-30 20-25 80-100 Як видно з таблиці 3, у хворої має місце помірний лімфоцитоз, збільшення ЦІК, зниження Тлімфоцитів, імунорегуляторний індекс також знижений, хоча зміст CD4, CD8 не виходить за межі норми Рівень CD22 і нульових лімфоцитів не порушений Дослідження імунологічних показників у непрямій реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням мишачих моноклональных антитіл до антигенів лімфоцитів CD3, CD4, CDS, CD22, CD25, CD16 для визначення їх субпопуляційного складу, а також ЦІК методом преципітації з 3,5% розчином поліетиленгликоля і функціонального стану нейтрофілів з підрахунком фагоцитарного індексу, фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу, дозволило виявити зміни, наведені в таблиці 4 4-6 16 зниження CD3, CD4, CD 16, а також достовірне зниження фагоцитарної активності нейтрофілів зі зменшенням фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу, що ж стосується CD25 і ЦІК, той їхній зміст виявився збільшеним, утой час як ІРІ та CD22 відповідають нормі Приклад 2 Хвора А , 1961 р н , історія хвороби №465, перебувала на стаціонарному лікуванні в інфекційному відділенні 7-і міської лікарні м Сімферополя з 31 03 01 по 15 05 01 з діагнозом хронічний гепатит С, стадія загострення, жовтянична форма, середньотяжкий перебіг При надходженні в стаціонар пред'являла скарги на слабкість, зниження апетиту, підвищення температури тіла до субфебрильных цифр, нудоту, триразову блювоту, вагу в правому підребер'ї, жовтяничне забарвлення шкіри і склер, темний колір сечі Об'єктивно склери іктеричні, шкіра субіктерична, розміри печінки по Курлову 12/1 х 9 х 7, щільної консистенції, помірно болюча при пальпації Загальний білірубін 37,4мкмоль/л, прямий - 22,5мкмоль/л, АлАТ 7,4ммоль/гхл Діагноз підтверджений виявленням специфічних антитіл до вірусу гепатиту С антиHCV Ig G 1,64, при нормі до 0,35, і анти-HCV Ig M 0,72, при нормі до 0,35 При дослідженні імунологічних показників методом розеткоутворення були отримані дані, представлені в таблиці З Таблиця 4 Показник Лімфоцити, % Показник хворого 42 Норма 21-39 47781 CD3, % CD4, % CD8, % ІРІ CD25, % CD22, % Нульові лімфоцити, % CD16,% ЦЖ, од є кети н Фагоцитарний індекс, % Фагоцитарне число, ум од Показник завершеності фагоцитозу, % 76 43 33 1,3 18 11 4 9 0,125 58 2 67-76 38-46 31-40 1,0-1,5 16-20 11-16 19-25 10-19 0,0060,110 40-80 4-6 17 >20 Дані таблиці 4 вказують нам на наявність у хворій помірного лімфоцитоза, збільшення ЦІК, пригнічення неспецифічного захисту, що виявляється зниженням рівня CD16, фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу з вираженим зниженням вмісту нульових лімфоцитів 8 Інші ж показники CD3, CD4, CD8, ІРІ, CD22, CD25 - не змінені Наведені приклади підтверджують важливість дослідження поряд з маркерами гепатиту С імунологічних показників методом непрямої реакції поверхневої імунофлюоресценцм з використанням мишачих моноклональных антитіл до антигенів лімфоцитів CD3, CD4, CD8, CD16, CD22, CD25, а також рівня циркулюючих імунних комплексів методом преципітації 3,5% розчином поліетиленгликоля і функціонального стану нейтрофілів шляхом підрахунку фагоцитарного індексу, фагоцитарного числа і показника завершеності фагоцитозу, про що свідчить більш точне виявлення вираженості імунологічних порушень Спосіб дозволяє удосконалити діагностику імунологічних порушень при хронічному гепатиті С шляхом визначення поряд зі специфічними антительними маркерами віруса гепатиту С додаткових імунологічних показників, що дозволяє орієнтуватися в глибині імунодефіциту, прогнозувати перебіг захворювання і контролювати ефективність лікування ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71